HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸含量

王光函，姜 鸿，邹桂欣，尤献民*

(1.辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034；2.辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)



HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸含量

王光函1,2，姜 鸿1，邹桂欣1，尤献民1*

(1.辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034；2.辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)

目的：建立HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸含量的方法。方法：色谱柱为Hypersil BDS C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相为乙腈-水(36∶64)，柱温为25℃，流速为1.0mL·min-1。检测器为ELSD，漂移管温度为100℃，载气流量为3.0L·min-1。结果：胆酸在0.14～1.4μg进样量范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系(r=0.999 4)，平均加样回收率为97.13%，RSD=1.80%。结论：该方法简便准确，灵敏度高，可用于胆南星中胆酸含量的测定和产品质量控制。

胆南星；HPLC-ELSD；胆酸

胆南星为制天南星的细粉与牛、羊或猪胆汁经混合加工而成，或由天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成。其具有清热化痰、熄风定惊的功效，临床用于痰热咳嗽、咳痰黄稠、中风痰迷、癫狂惊痫的治疗。天南星经胆汁炮制后性味发生改变，功效由燥湿化痰变为清热化痰，由散结消肿变为熄风定惊，这种变化主要是由胆汁引起的。胆汁酸中主要含有胆酸、去氧胆酸和鹅去氧胆酸等成分。本文采用HPLC-ELSD法对胆南星中胆酸含量进行测定，目标物与杂质峰分离效果好，该方法快速准确，重现性好，现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；试剂：乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水；对照品：胆酸(批号：078-9312，中国食品药品检定研究院)；药材：胆南星(批号：10032，四川广汉中药饮片有限责任公司)；胆南星(批号：111002，四川百胜药业有限公司)；胆南星(批号：20121102，四川千方中药饮片有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil BDS C18(4.6mm×200mm，5μm)，流动相：乙腈-0.2%醋酸(36∶64)，柱温：25℃，流速：1.0mL·min-1；检测器为ELSD，漂移管温度：100℃，载气流量：3.0L·min-1。在上述色谱条件下，供试液色谱图中胆酸与其他组分的色谱峰分离度良好，见图1。

2.2 供试品溶液制备

取胆南星粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇25mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

图1 供试品HPLC色谱

2.3 对照品溶液制备

精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含70μg胆酸的溶液，作为对照品溶液。

2.4 标准曲线制备

精密吸取胆酸对照品溶液(70μg/mL)2、4、8、12、16、20μL分别注入液相色谱仪中，测定峰面积。以胆酸进样量的对数为横坐标，以峰面积的对数为纵坐标，得线性回归方程为：Y=1.468 6X+3.113 1，r=0.999 4，胆酸在0.14～1.4μg进样量范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液(百胜)，分别放置0、2、4、6、8、12h后进样测定峰面积，得峰面积积分RSD为1.24%，表明供试液在12h内化学性质稳定。

2.6 精密度试验

取同一供试品溶液(百胜)，连续进样测定6次，计算得峰面积积分RSD为1.52%，表明该方法精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一份样品(百胜)，平行取样6次，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算供试液中胆酸含量，RSD为1.60%，表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验

取已知含量的样品(百胜)1g，精密称定，平行取样9份，分别加入胆酸对照品溶液适量，按“2.2”项下制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算供试液中胆酸加样回收率，得平均回收率为97.13%，RSD为1.8%，结果见表1。

2.9 样品测定

分别精密吸取对照品溶液5、10μL与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪中测定峰面积，根据标准曲线计算供试液中胆酸含量，结果见表2。

表1 加样回收率测定结果

表2 不同来源胆南星中胆酸含量测定结果

3 讨论

在炮制过程中，胆汁不仅是加工胆南星的主要辅料，其还从根本上改变了主药的理化性质及性味。目前，2010版中国药典尚未对胆南星质量标准进行规范，但许多学者在胆南星质量标准方面进行了研究。赫炎等[1]采用 HPLC-ELSD 法测定胆南星中猪去氧胆酸含量；高向军等[2]以胆酸为指标，采用薄层扫描法对胆南星及其制剂中的胆酸含量进行了测定；张厚宝等[3]以总胆酸、胆红素含量为检测指标，对江苏省8个市县的胆南星进行了测定；张绍轩等[4]以鹅去氧胆酸为对照，建立了胆南星的薄层色谱鉴别方法。

本文采用高效液相色谱法，选择蒸发光散射检测器，以胆酸为对照品，对市售三种胆南星药材中的胆酸含量进行了测定，可能由于加工过程中胆汁来源及加入量的不同，导致胆酸含量有所差异。实验过程中考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%醋酸3种色谱系统，并对流动相比例进行了考察，最终乙腈-0.2%醋酸(36∶64)分离效果最为理想。

采用HPLC-ELSD法测定胆南星中胆酸含量简便准确，灵敏度高，稳定性好，可用于胆南星中胆酸含量测定，用于其质量控制。

[1] 赫炎,张永欣,赵惠东,等.HPLC测定胆南星中猪去氧胆酸的含量[J].中国中药杂志,2007,32(16):1634-1636.

[2] 高向军,刘涵芳,张伯崇.胆南星及其复方制剂中胆酸的检查[J].中药通报,1987,12(6):31-32.

[3] 张厚宝,康纯.胆南星中胆汁成分的检测[J].中药材,1991,14(3):37-38.

[4] 张绍轩,黄青,王学农,等.胆南星的薄层色谱鉴别[J].长春中医药大学学报,2008,24(2):147-148.

(责任编辑：尹晨茹)

Determination of Cholic acids in Bile Arisaema by HPLC-ELSD

Wang Guanghan1,2,Jiang Hong1,Zou Guixin1,You Xianmin1*

(1.Liaoning Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034,China;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China)

Objective:To develop a HPLC method for the determination of cholic acids in Bile Arisaema.Methods:Hypersil BDS C18column (4.6mm×200mm，5μm)in an oven at 25℃ was need，with a mobile phase consisting of acetonitrile-water(36∶64)，the flow rate was 1.0mL·min-1.The drift-tube temperature of ELSD was 100℃,and the flow rate of air was 3.0L·min-1.Results:The linear ranges of cholic acids was 0.14～1.4μg(r=0.999 4),the average recovery was 97.13%,RSD=1.80%.Conclusion:The method was simple and accuate,and can be used for the quality control of Bile Arisaema.

Bile Arisaema; HPLC-ELSD; Cholic Acids

2014-07-11

国家科技部重大新药创制项目(2012ZX09102201-005)

王光函(1980-)，女，辽宁省中医药大学在职博士研究生，辽宁省中医药研究院副研究员，研究方向为中药新药质量控制。

尤献民(1964-)，男，辽宁中医药研究院研究员，研究方向为新药开发。

R284.1

A

1673-2197(2014)22-0008-02