用于COPD的吉祥草雾化吸入剂制备及其质量控制研究

黄诗娅，李 江，马国新

(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)



用于COPD的吉祥草雾化吸入剂制备及其质量控制研究

黄诗娅，李 江*，马国新

(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)

目的：制备吉祥草气雾剂，建立其质量控制方法。方法：采用水提醇沉工艺，提取吉祥草的有效部位，采用薄层色谱法进行定性鉴别，紫外分光光度计法测定吉祥草气雾剂中的总皂苷含量。结果：薯蓣皂苷元在4.0～44.0μg·mL-1质量浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.999 4)；平均加样回收率为98.79%，RSD=0.44%(n=6)。结论：吉祥草气雾剂质量稳定，薄层色谱法定性鉴别可行，且吉祥草气雾剂制备工艺合理，质量标准科学。

吉祥草；气雾剂；质量标准；药物制备

吉祥草又名观音草，为百合科吉祥草属植物吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)Kunth)的带根全草，是我国西南苗族地区常用的传统草药之一。其味甘，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽等功效[1]。苗族民间常用其治疗咳嗽、支气管炎、肺炎等病症。吉祥草在贵州民间及目前临床上主要采用雾化吸入的给药方式，即将吉祥草鲜品直接加水煮沸，患者吸入其气雾来治疗慢性阻塞性肺疾病[2](COPD)，其是通过肺部给药途径发挥疗效的。肺部给药具有吸收表面积大、吸收部位血流丰富、药物吸收快而完全、避免肝首过效应、酶活性低、上皮屏障较薄及膜通透性高等优点[3]。近年来，有以吉祥草为主药的“咳速停糖浆”“咳速停胶囊”“复方吉祥草含片”“咳清胶囊”等制剂的研制报道，但对于其吸入剂的研究报道并不多。笔者运用现代制剂技术将该药制成定位、定量、速效、安全的新型气雾剂，并采用薄层色谱法鉴别吉祥草，紫外分光光度计法测定吉祥草中总皂苷含量，为吉祥草气雾剂的进一步研究和质量评价提供参考依据。

1 仪器与试药

紫外分光光度计GBC Cintra 20(澳大利亚照生公司)；安灵ZF-2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)；电子调温电热套98-1-B型(天津市泰斯特仪器有限公司)；安瓿拉丝灌封机(上海信谊制药机械厂)；安瓿瓶(贵州神奇药业有限公司)；YX系列手提式压力蒸汽灭菌器(江阴滨江医疗设备有限公司)；转蒸发仪RE-2000(上海亚荣生化仪器厂)；电子天平(Sartorius德国赛多利斯)；恒温水浴锅(江苏国胜实验仪器厂)；科导SK8210HP型台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。

吉祥草对照药材(批号：121314-200402，中国食品药品检定研究院)；薯蓣皂苷(批号：MUST-13042301，成都曼斯特生物科技有限公司中国科学院成都生物研究所)；香兰素(天津市科密欧化学试剂有限公司)。吉祥草采于贵州六枝县，经贵阳中医学院生药教研室孙庆文老师鉴定为百合科吉祥草属植物吉祥草Reineckiacarnea(Andr.)Kunth的带根全草。

2 方法与结果

2.1 吉祥草气雾剂制备[4]

取吉祥草药材干品30g，切碎，置于3 000mL圆底烧瓶中，加20倍量的水浸泡3h，水浴回流提取2次，每次3h，滤过，合并滤液，浓缩并定容至50mL，室温冷却，慢慢加入乙醇，边加边快速搅拌，使含醇量达到75%，静置过夜，取上清液，回收乙醇，浓缩定容至30mL即得含量为1g/mL的醇沉药液。药液用YX系列手提式压力蒸汽灭菌器灭菌8min，精密吸取吉祥草水提液10mL稀释成200mL，含生药量为0.1g/2mL，过0.22μm微孔滤膜后定量装入气雾剂瓶内，压盖，充入抛射剂(压缩空气，10kg/cm2)即得。

2.2 定性鉴别

取吉祥草气雾剂1支，排尽抛射剂后取2mL，挥干，残渣加70%乙醇30mL，水浴回流1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL微热溶解，移至锥形瓶中，再加盐酸8mL，置于水浴中加热回流2.5h，放冷，滤过，滤液用氯仿萃取3次，每次分别为30mL、20mL、10mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取吉祥草药材和吉祥草对照品药材粉末各2g，同法制成药材溶液、对照品药材溶液。按照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VIB)实验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(8∶5∶0.2)为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯下(365nm)下检视。结果显示，吉祥草雾化吸入液、药材溶液和对照品药材溶液在相同比移值处呈现相同颜色的斑点，见图1。

图1 吉祥草雾化吸入剂中吉祥草的薄层色谱鉴别

注：1.供试品溶液；2.药材溶液；3.对照药材溶液

2.3 总皂苷含量测定[5-6]

2.3.1 供试品溶液制备 精密吸取吉祥草雾化吸入液10mL，置于分液漏斗中，用石油醚萃取6次(每次分别为15mL、10mL、10mL、10mL、10mL、10mL)，弃去石油醚层，水层用水饱和正丁醇萃取4次(每次分别为15mL、10mL、10mL、10mL)，合并正丁醇层，并用正丁醇饱和水溶液20mL洗涤，减压回收正丁醇至干，残渣用甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，作为供试品溶液。

2.3.2 对照品溶液制备 精密称取薯蓣皂苷对照品0.001 2g，置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为1.2mg/mL的对照品溶液。

2.3.3 测定波长选择 分别精密吸取对照品溶液1.5mL、供试品溶液0.6mL置于10mL具塞试管中，挥干甲醇，分别加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，摇匀，密塞，60℃水浴中显色15min，取出后立即用冰水冷却5min，再加入5mL冰醋酸稀释，摇匀，静置10min，在200～900nm范围内进行扫描，结果见图2、图3。两者均在460nm处有最大吸收峰。

图2 对照品溶液波长扫描

图3 供试品溶液波长扫描

2.3.4 标准曲线制备 分别精密吸取薯蓣皂苷对照品溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2mL，置于10mL具塞试管内，挥干甲醇，分别加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，摇匀，密塞，60℃水浴中显色15min，取出后立即用冰水冷却5min，再加入5mL冰醋酸稀释，摇匀，静置10min，于460nm处测定其吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，质量浓度(C)为横坐标进行线性回归。结果表明：薯蓣皂苷在4.0～44.0μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为：A=0.145 9C-0.055 8，r=0.999 4。

2.3.5 精密度试验 精密吸取对照液0.4mL，共6份，按“2.3.3”项下操作方法显色，于460nm处测定吸光度，计算RSD=0.69%，结果表明该方法的精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 精密吸取样品溶液0.6mL，按“2.3.3”项下操作方法显色，分别于0、15、30、45、60、90、120min时于460nm处测定吸光度，结果表明样品液显色后在120min内稳定，吸光度RSD=0.06%。

2.3.7 重复性试验 精密称取同一批气雾剂6份，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.3”项下操作方法显色，于460nm处测定吸光度，计算RSD=0.14%，结果表明该方法的重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验 精密吸取已知总皂苷含量的样品溶液0.1mL于具塞试管中，加入对照品溶液0.2mL(0.12mg/mL)，按“2.3.3”项下操作方法显色，于460nm处测定吸光度，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2.3.9 样品总皂苷含量测定 按照“2.3.1”项下操作方法，制备3批供试品溶液，精密吸取0.2mL，按“2.3.3”项下操作方法显色，于460nm处测定吸光度，结果见表2。

表2 样品总皂苷含量测定

3 讨论

用于治疗COPD的吉祥草雾化吸入剂是通过肺部给药，其药物颗粒大小需要进行严密控制，因此该实验采用的微孔滤膜孔径大小为0.22μm。吉祥草雾化吸入剂中主要含有皂苷类成分，本实验通过水提醇沉法制备吉祥草雾化吸入剂，其提取过程较为经济，容易操作，仪器设备易得。采用薄层色谱法对吉祥草进行定性鉴别；采用紫外分光光度计法，以薯蓣皂苷为对照品，采用香草醛-高氯酸法显色，可对吉祥草气雾剂中的总皂苷含量进行测定。该法操作简单、准确性高、重复性好，为吉祥草气雾剂的质量控制研究提供了新的有效手段。

[1] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[S].贵阳:贵州科学技术出版社,2003:150.

[2] 刘炜.苗药吉祥草雾化吸入治疗痰热郁肺型COPD急性加重期临床观察[J].中国民族医药杂志,2012,8(8):5-6.

[3] 汤玥,朱家壁,陈西敬.新型肺部给药系统——吸入粉雾剂[J].药学学报,2009,44(6):571-574.

[4] 聂垣东,柴天川.辛芷气雾剂制备和质量标准研究[J].时珍国医国药,2010,21(6):1396-1397.

[5] 刘亮,杜江,潘炉台,等.苗药观音草中总皂苷的含量测定[J].中国民族民间医药,2011,4(2):2.

[6] 邱德文,杜江,李江,等.贵州十大苗药研究[M].北京:中医古籍出版社,2008:507.

(责任编辑：尹晨茹)

Preparation and Quality Control ofReineckiaCarnea(Andr.) Kunth Aerosol for COPD

Huang Shiya, Li Jiang*, Ma Guoxin

(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002,China)

Objective:To prepareReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol and establish its quality standard.Methods:We used the water extracting and alcohol precipitation techniques, extracting effective part andReineckiacarnea(Andr.) Kunth was identified by thin-layer chromatography(TLC),Total saponin of the aerosol was determined by UV spectrophotometry.Results:The quality ofReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol was repeatable and the TLC was reliable. The linear correlation of diosgenin was good in the range of 4.0～44.0μg·mL-1(r=0.999 4),and the range of the spotting recovery rate was 98.79%(RSD=0.44%). Conclusion:The preparation technology ofReineckiacarnea(Andr.) Kunth aerosol is reasonable and the quality standard is reliable.

Reineckiaarnea(Andr.) Kunth; Aerosol;Quality Specification; Preparation

2014-07-25

贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究项目(QZYY2013-110)

黄诗娅(1988-)，女，贵阳中医学院硕士研究生，研究方向为药物新制剂及新剂型。

李江(1973-)，男，博士，贵阳中医学院教授，硕士生导师，研究方向为中医方剂配伍和民族药系统研究与开发。

R283

A

1673-2197(2014)22-0019-02