黄蜀葵中活性成分含量测定

李 永，葛兆宏，段琼辉，于生兰，李勇军，谈祥宇，王 丹

(江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300)



黄蜀葵中活性成分含量测定

李 永，葛兆宏*，段琼辉，于生兰，李勇军，谈祥宇，王 丹

(江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300)

目的：测定黄蜀葵中主要活性成分的含量。方法：采用硫酸-苯酚法测定多糖的含量，采用分光光度法测定总黄酮的含量，采用HPLC法测定槲皮素和金丝桃苷的含量。结果：黄蜀葵中多糖含量为5.68%，总黄酮含量为1.577 5%，金丝桃苷和槲皮素含量分别为1.102%、0.404 1%。结论：黄蜀葵中多糖、总黄酮、金丝桃苷、槲皮素等活性成分含量较高，所选的相应测定方法简便，结果可靠，可作为其质量控制参考。

黄蜀葵；活性成分；含量测定；金丝桃苷；槲皮素；多糖；总黄酮

黄蜀葵始载于《嘉佑本草》，资源丰富，药用历史十分悠久，在民间常用于治疗疔疮、腮腺炎、肺热咳嗽等，其根、茎、叶、花及种子等均可入药，药用最多的部位为花[1]。黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵Abelmoschusmanihot(L.)Medic.的干燥花冠，夏、秋两季花开时采摘，及时干燥即得。其性甘、寒，归肾、膀胱经，具有清利湿热、消肿解毒的功效，临床用于湿热壅遏、淋浊水等症的治疗，外治痈疽肿毒、水火烫伤等[2]。现代研究表明，黄蜀葵的主要化学成分为金丝桃苷等黄酮类和多糖类成分，对肾炎、心肌损伤、脑缺血损伤等具有较好的治疗效果[3-5]。江苏苏中药业集团股份有限公司以黄蜀葵花为主要原料，生产研制的三类新药“黄葵胶囊”已经上市，用于治疗肾炎、类风湿性关节炎等疾病。该药疗效确切，市场前景看好，大力促进了江苏省泰州市黄蜀葵种植业的蓬勃发展，目前在泰州市兴化、泰兴、姜堰、高港等不同地区均有农户种植。为合理科学地评价黄蜀葵药材的质量，笔者分别采用分光光度法和高效液相色谱法对泰州市黄蜀葵花中的活性成分含量进行了测定，以期为该药材的质量控制方法提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪：LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津，SPD-21A型紫外检测器，N2000 色谱工作站)；UNIC 3802双波长紫外-可见分光光度计；IKA HB10旋转蒸发仪；HH-4数显恒温水浴锅；TDZ5台式低速离心机；BP211D电子天平。

1.2 试药

硫酸、苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、磷酸、乙醇等试剂均为分析纯；市售金丝桃苷(批号：111521-201205)对照品、槲皮素(100081-200907)对照品；无水葡萄糖(批号：110833-201205)；芦丁(CEGP-4L70)购自中国食品药品检定研究院；高效液相所用乙腈为色谱纯，水为超纯水(自制)。

黄蜀葵花药材采收自泰州地区黄蜀葵种植户，经江苏农牧科技职业学院李勇军副教授鉴定为锦葵科植物黄蜀葵Abelmoschusmanihot(L.)Medic.的干燥花冠和花萼。药材经低温干燥后，粉碎，过筛，得干燥粉末，备用。

2 方法与结果

2.1 黄蜀葵花中多糖含量测定[6]

2.1.1 葡萄糖标准曲线 精确称取标准葡萄糖溶液(0.1mg/mL)0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL及1.0mL置于容量瓶内，加入相应量的蒸馏水补至2.0mL，然后加入50g/L苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL，迅速摇匀，置于沸水浴中5min，后取出冷却至室温。于485nm波长下测定吸光值，以2.0mL水按同样显色操作作为空白。以葡萄糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，得多糖标准曲线为Y=15.63X-0.006，r=0.999 5。结果表明葡萄糖在0.01～0.05mg/mL浓度范围内与其吸光度值呈良好的线性关系。

2.1.2 样品溶液制备 称取黄蜀葵花粉末适量，置于50mL容量瓶中，加水40mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖用。准确吸取滤液5mL，至于50mL离心管中，加无水乙醇20mL，混匀，静置5min，以3 000r/min离心20min。弃去上清液，残渣用水溶解并定容至25mL，即得。

2.1.3 样品含量测定 取0.5mL样品溶液置于容量瓶中，以蒸馏水补至2.0mL，然后加入50g/L苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL，迅速摇匀，置于沸水浴中5min，取出后流水中冷却5min至室温。于485nm波长处测定吸光值，将吸光度值代入葡萄糖标准曲线，得出黄蜀葵花中多糖含量为5.68%。

2.2 黄蜀葵花中总黄酮含量测定[7]

2.2.1 芦丁标准曲线 精密量取芦丁标准液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，置于试管中，加水至6mL，加1mL 5%NaNO2溶液，摇匀静置6min，再加1mL 10%Al(NO3)3溶液，摇匀静置6min，加氢氧化钠试液10mL，加水定容至25mL。以相应试剂为空白，静置15min后于510nm处测定吸光值A，以吸光值A为纵坐标，对照品质量浓度C(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。得芦丁标准曲线Y=3.495X-0.016，r=0.999。结果表明芦丁在0.036 17～0.180 83mg/mL质量浓度范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系。

2.2.2 样品溶液制备 称取黄蜀葵药材样品约1g，加75%甲醇50mL，超声提取30min，过滤，残渣重复提取1次，过滤，合并两次滤液置于水浴上蒸干，用甲醇溶解定容至25mL，过滤，备用。

2.2.3 样品含量测定 准确吸取样品溶液2mL，按上述硝酸铝法测定吸光度值，设置自身对照，进行测定。根据标准曲线计算黄蜀葵中总黄酮的含量，结果得黄蜀葵花中总黄酮含量为1.577 5%。

2.3 黄蜀葵花中槲皮素和金丝桃苷含量测定[8-9]

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)；洗脱条件：梯度洗脱:0～40min，体积分数A10%～15%；40～60min，体积分数A15%～40%；检测波长：360nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。理论塔板数应不低于3 000。

2.3.2 混合对照品溶液制备 精密称取金丝桃苷对照品12.59mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，作为对照品储备液Ⅰ；精密称取槲皮素对照品12.76mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，作为对照品储备液Ⅱ。精密吸取对照品储备液Ⅰ1mL、对照品储备液Ⅱ1mL于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作为混合对照品溶液，按照上述色谱条件进样测定，结果见图1。

2.3.3 供试品溶液制备 取已经过60目筛的黄蜀葵药材粉末1g，精密称定，置于250mL锥形瓶中，加入体积分数70%乙醇约150mL，超声提取30min，放至室温，转移至500mL容量瓶中，用体积分数70%乙醇定容，振摇均匀，取适量溶液离心10min(12 000r/min)，取上清液作为供试品溶液。

2.3.4 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，依次用甲醇稀释定容至1.0mL，分别精密吸取20μL溶液，按“2.3.1”项下色谱条件，测定金丝桃苷和槲皮素峰面积。以对照品溶液质量浓度X(μg/mL)为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，得金丝桃苷回归方程Y=452.66X+232.46，r=0.999 6；槲皮素回归方程Y=474.93X+134.45，r=0.999 8。结果表明金丝桃苷在5.036～50.36μg/mL，槲皮素在5.104～51.04μg/mL质量浓度范围内与各自峰面积积分呈良好的线性关系。

图1 混标HPLC色谱

注：1.金丝桃苷；2.槲皮素

2.3.5 加样回收率试验 取已知金丝桃苷和槲皮素含量的样品6份，分别精密加入一定量的混合对照品溶液，按照“样品含量测定”项下方法测定，计算加样回收率，测得金丝桃苷和槲皮素平均回收率分别为101.17%和100.08%，RSD分别为1.79%和0.59%。表明该测定方法符合要求。

2.3.6 样品中金丝桃苷和槲皮素含量测定 分别按“供试品溶液制备”方法处理样品各3份，精密吸取供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪测定，将所得峰面积代入标准曲线，求得样品中金丝桃苷和槲皮素的含量分别为1.102%、0.404 1%。见图2。

图2 黄蜀葵花样品HPLC色谱

注：1.金丝桃苷；2.槲皮素

3 讨论

黄蜀葵在我国历代医籍中均有记载，民间使用亦很普遍。黄蜀葵全身都是宝，其茎皮纤维可替代麻制造人造棉；种子、根和花可入药，具有清热解毒、凉血、消肿等功效，根主要含有黏液质、淀粉和糖类等化学成分。现有文献对黄蜀葵花中化学成分的报道较少，且主要集中在以金丝桃苷和槲皮素为代表的黄酮类成分上，对其多糖类成分的报道更少。多糖作为一种具有广泛药理活性的大分子物质，越来越受到关注，而硫酸-苯酚法是较为理想的多糖含量测定方法，因此笔者采用该法对黄蜀葵花中的多糖含量进行了测定。实验结果表明，黄蜀葵中总多糖含量为5.68%。

本试验测定结果表明，黄蜀葵花中总黄酮含量为1.577 5%，而金丝桃苷和槲皮素含量分别为1.102%、0.404 1%，两者含量加和略低于总黄酮含量，究其原因可能与总黄酮测定方法有关。有文献报道采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定总黄酮时，槲皮素-3'-葡萄糖苷、棉皮素-3'-葡萄糖苷和杨梅素这三种黄酮类化合物不显色。因此在510nm处测定黄蜀葵花药材中总黄酮含量时，这3种成分的含量就没有计入总黄酮含量中，且黄蜀葵花中槲皮素-3'-葡萄糖苷含量较高，因此采用该法测得的总黄酮含量略低。

综上所述，黄蜀葵中多糖、总黄酮、金丝桃苷、槲皮素等活性成分含量较高，本研究所选的相应测定方法简便，结果可靠，可作为其质量控制参考。

[1] 居文政.黄蜀葵的本草考证[J]. 时珍国药研究,1994,5(2):6-7.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].第1部.北京：中国医药科技出版社，2010:287.

[3] 谭业华,陈珍,顾种宜.中草药黄蜀葵的研究现状与展望[J].海南师范学院学报:自然科学版,2006,19(2):163-167.

[4] 杨静,李爽,钱芳,等.响应面法优选黄蜀葵花多糖的提取工艺[J].中国药房,2013,24(39):3688-3690.

[5] 刘爽,江蔚新,吴斌.黄蜀葵化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代中药,2010,12(8):5.

[6] 白虹.保健食品功效成分检测方法[M].北京:中国中医药出版社,2011:73-75.

[7] 许海顺,蒋剑平,徐攀,等.白花蛇舌草不同萃取物的抗氧化作用研究[J].甘肃中医学院学报,2012,29(2):48-51.

[8] 徐柏颐,谈献和,朱华云,等.黄蜀葵花HPLC指纹图谱研究[J].中药材,2011,34(6):888-890.

[9] 刘霖,唐海涛,刘汉清,等.黄葵胶囊中5种黄酮类成分的含量测定及其特征图谱研究[J].中药材,2013,36(1):132-136.

(责任编辑：尹晨茹)

Content Determination of Active Constituents in Abelmoschi Corolla

Li Yong,Ge Zhaohong,Duan Qionghui,Yu Shenglan,Li Yongjun,Tan Xiangyu,Wang Dan

(Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College, Taizhou 225300,China)

To determine the content of active constituents in Abelmoschi corolla.Methods:The phenolμsulfuric acid method was employed to determine the content of polysaccharide,the method of spectrophotometry was employed to determine the content of total flavonoids and the HPLC was used to determine the content of hyperfine and quercetin.Results: The content of polysaccharide in Abelmoschi corolla. is 5.68%,The content of total flavonoids in Abelmoschi corolla. is 1.577 5%,The content of hyperfine in Abelmoschi corolla. is 1.102%,The content of quercetin in Abelmoschi corolla. is 0.4041%. Conclusions:The content of active constituents in Abelmoschi corolla. is higher.The methods are simple and can be adopted for the quality control of Abelmoschi corolla.

Abelmoschi Corolla;Active Constituents;Content Determination;Hyperfine;Quercetin;Polysaccharide;Total Flavonoids

2014-09-17

江苏农牧科技职业学院大学生实践创新训练计划项目(201312806023X，201412806028X)

李永(1980-)，男，江苏农牧科技职业学院讲师，研究方向为中药学教育教学与科研。

葛兆宏(1954-)，男，江苏农牧科技职业学院教授。

R284.1

A

1673-2197(2014)22-0016-03