脂必泰胶囊中红曲的含量测定＊

温中明 ，张 法 ，黄 毅 ，谢 静 ，罗江秀 ，魏照星 ，原文鹏

(1.广东省深圳市光明新区公明人民医院药剂科，广东 深圳 518106;2.广东省深圳市沙湾医院药剂科，广东 深圳 518114;3.广东省深圳市人民医院·暨南大学第二临床医学院药学部，广东 深圳 518020)

红曲为禾本科植物稻 Oryza satira L.的种子经人工接种紫红曲霉菌 Monascus Purpureus Went.发酵后打粉而成，在我国食品和医药上的应用至少有1 800年的历史[1-2]。近年来，我国应用现代科技手段模拟古代红曲生产工艺，以红曲发酵而得的特制红曲提取物生产了一些新制剂并应用于临床。脂必泰胶囊是我国开发的含红曲的新型中药制剂，对高脂血症的临床疗效肯定[3]，其调血脂的主要有效成分已明确为在发酵过程中产生的天然成分洛伐他汀(lovastatin)[4]。笔者建立了测定脂必泰胶囊中洛伐他汀含量的高效液相色谱法，对于确保制剂质量、充分发挥其疗效具有重要意义，现报道如下。

1 仪器与试药

戴安Ultimate 3000型高效液相色谱仪;Diode Array二极管阵列检测器;XS205型电子天平(瑞士梅特勒-托利多集团);KQ2200B型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。洛伐他汀对照品(中国药品生物制品检定所，含量为99.4%，批号为100600-200301);脂必泰胶囊(成都地奥九泓制药厂，批号分别为080105，090103，090204);甲醇为色谱纯，乙醇等试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

取脂必泰胶囊6粒，将内容物混合均匀，取约0.15 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇约80 mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)10 min，取出，冷至室温，加75%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取洛伐他汀对照品0.011 83 g，置25 mL量瓶中，加入75%乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.473 2 g/L的对照品溶液。取按处方及制法制成缺红曲的阴性对照样品，取相当于供试品0.15 g的量，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2 样品处理方法选择

2.2.1 提取方法和提取时间

取脂必泰胶囊(批号为080105)6粒，倾出内容物混合均匀，取约0.15 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加75%乙醇80 mL，分别超声处理(功率500 W，频率40 kHz)10，20，30 min和回流提取20，40，60 min，取出，放冷，加75%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，分别测定洛伐他汀的含量。结果见表1。可见，超声20，40，60 min所得供试品溶液中洛伐他汀含量无明显差异，而超声10 min与回流提取20 min结果相当，因此选择超声提取10 min。

表1 样品提取方法和时间考察

2.2.2 提取溶剂

取脂必泰胶囊(批号为080105)内容物约0.15 g，精密称定，置100 mL量瓶中，分别加30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇溶剂各20 mL，超声(功率500 W，频率40 kHz)处理10 min，取出，冷至室温，加相应溶剂至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，分别测定洛伐他汀的含量。结果采用30%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、甲醇为提取溶剂时，洛伐他汀的含量分别为 2.9，8.0，7.5，8.4 mg/粒。从环境保护和资源节约角度考虑，选取75%乙醇作为提取溶剂。

2.3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，即Dionex-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -水(75∶25);流速:1 mL/min;柱温:22℃;检测波长:236 nm;进样量:10 μL;定量方法:外标法。在此色谱条件下，洛伐他汀峰无杂质干扰，峰形对称，保留时间适中，色谱图见图1。

2.4 方法学考察

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液25，50，100，250，500，1 000 μL，置1 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各10 μL，依次进样、测定，记录峰面积积分值(A)，以峰面积积分值为纵坐标、进样质量浓度(C)为横坐标，得洛伐他汀回归方程 A=531.97 C-0.506 2，r=0.999 9(n=3)。结果表明，洛伐他汀质量浓度在0.011 83～0.473 2 g/L范围内与峰面积积分值线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验:取样品(批号为080105)内容物约0.15 g，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果样品中洛伐他汀含量为8.3 mg/粒，RSD为1.0%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取样品(批号为080105，含量为8.344 mg/粒)约0.075 g，共6份，分别精密加入2.502 g/L的对照品溶液1 mL，按含量测定方法测定，计算回收率。结果见表2。

表2 洛伐他汀加样回收试验结果(n=6)

稳定性考察:取样品(批号为080105)约0.3 g，依法制备供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10 h 时进样测定。结果平均峰面积为30.466 3，RSD为0.8%(n=6)，表明供试品溶液在制备后10 h内基本稳定。

2.5 样品含量测定

取样品3批，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依法测定，用外标法计算洛伐他汀的含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

用二极管阵列检测器采集3D数据，洛伐他汀对照品溶液和供试品溶液色谱图中，洛伐他汀色谱峰的最大吸收波长为235.9 nm。综合考虑，选用236 nm为检测波长。用二极管阵列检测器采集3D数据，检查峰纯度，结果供试品溶液色谱中洛伐他汀峰的纯度因子在±50%峰宽处值均大于比阈值900，表明该峰纯度良好，出峰位置无其他杂质。

参照文献[5]以甲醇-水-磷酸(72∶28∶0.5)为流动相Ⅰ，参考文献[6]以甲醇-水(75∶25)为流动相Ⅱ，分别进行色谱分析，结果对照品溶液及供试品溶液中洛伐他汀色谱峰纯度均达到要求，对照品峰均能达到基线分离、峰形对称。鉴于流动相Ⅱ配制简便，且甲醇较乙腈价廉、毒性小，故选择流动相Ⅱ。

对样品采用直接的处理方法，与文献[5-6]相比更简单，虽未过中性氧化铝柱和碱化处理，但分离效果较好且基线平稳，谱峰尖锐，测定结果较满意。

脂必泰胶囊是复方中药制剂，国家药品标准[7]规定含量测定指标是熊果酸。但脂必泰胶囊中治疗高脂血症的主要成分是红曲，红曲中调血脂活性成分主要是洛伐他汀[4]。因此，对洛伐他汀进行含量测定是控制脂必泰胶囊质量的必然方法。本试验建立的方法样品的处理简单，操作简便、重复性好、结果准确，适用于脂必泰胶囊中洛伐他汀的含量测定。

[1]李 东，刘 源，谢 静，等.红曲的起源、分类学及生药学鉴定[J].中国药业，2009，18(3):1-2.

[2]李 东，谢 静，王 敏，等.红曲起源新考[J].中药材，2007，30(4):484-487.

[3]鲁卫星，王俊显，朱建贵，等.脂必妥胶囊治疗高脂血症多中心临床试验[J].中国新药与临床杂志，1999，18(6):365-367.

[4]宓鹤鸣，宋洪涛，陈 磊，等.红曲中降血脂活性成分的研究[J].中草药，1999，30(3):172-174.

[5]罗仁才，孙开奇，谢申猛，等.红曲中洛伐他汀总量的测定方法[J].卫生研究，2003，32(2):157-158.

[6]张小茜，周富荣，石济民.高效液相色谱法测脂必泰胶囊及红曲中洛伐他汀的含量[J].中国中药杂志，1997，22(4):222-224.

[7]WS3-119(Z-119)-2004(Z)，卫生部颁国家药品标准[S].