愈疡胶囊对乳腺增生大鼠雌激素影响的实验研究＊

罗伦才 ，黄兰雅，季小平，李列平，邢晋苓 ，刘志康

(1.四川省凉山彝族自治州第二人民医院，四川 凉山 615000;2.雅安职业技术学院药学检验系，四川 雅安 625000)

乳腺增生症的发病原因尚不十分清楚，一般认为与卵巢内分泌功能紊乱有关。目前，西医常采用雌激素类药物和碘制剂等疗法，但效果不甚理想且不良反应较大，外科手术治疗又常引起其他部位的复发，且患者较难接受。愈疡胶囊为医院自制制剂，是由山药、蜂蜡等药物组成，采用特殊炮制和制剂工艺制备而成的纯中药制剂，具有泄壅滞、逐痰积、消肿毒、排脓腐、生肌健脾等功效，临床应用数年来，证明其对乳腺增生有显著疗效。笔者通过实验研究观察了愈疡胶囊对乳腺增生大鼠内分泌激素的影响并探讨其作用机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器、试药与动物

PowerWaveX2型紫外全波长扫描仪(美国Gene有限公司)。大鼠孕酮酶联检测试剂盒(美国UNIONHONEST公司)、大鼠雌二醇受体酶联检测试剂盒(美国USCNLIFE公司)均由武汉中美科技有限公司提供。苯甲酸雌二醇注射液 (天津金耀氨基酸有限公司，批号为0807071，规格为1 mg∶1 mL);黄体酮注射液(浙江仙琚制药股份有限公司，批号为081006，规格为1 mL∶20 mg)。愈疡胶囊(凉山彝族自治州第二人民医院制剂室自制，批号为090104，规格为0.45 g×42粒/瓶，用前加蒸馏水溶解配制成0.09 g/mL的药液备用);乳癖消片(辽宁好护士药业＜集团＞有限责任公司生产，批号为090310，规格为0.32 g×100片/瓶，用前加蒸馏水溶解配制成0.192 g/mL的药液备用)。SD大鼠，SPF级，雌性，体重200～230 g，购自四川大学实验动物中心，合格证号为SCXK川2008-24，于自然光线、自由饮水摄食条件下适应性喂养1周备用。

1.2 方法

取成年雌性未孕大鼠，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组和愈疡胶囊组，每组8只。除空白对照组外，其余各组均肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg，1次/d，连续注射23 d，第24天开始每天肌肉注射黄体酮5.0 mg/kg，连续注射3 d。从造模第1天开始，除模型对照组外，阳性对照组和愈疡胶囊组分别灌胃配制好的乳癖消片或愈疡胶囊药液40 mL/kg，空白对照组灌胃等量生理盐水，每天1次，直至试验结束。最后一次给药后60 min，取股主动脉血，离心，取血清，以酶联免疫吸附法测孕酮水平，于450 nm波长处测定光密度(OD)值，求得孕酮含量。取大鼠第3对乳腺，剪碎，用磷酸盐缓冲液洗涤，去除多余血液，匀浆化后放在20 mL磷酸盐缓冲液中于-20℃放置过夜，反复冻融2次破膜，将匀浆物以5 000 r/min离心5 min，取上清液，采用酶联免疫吸附法测雌二醇受体水平，于450 nm波长处测定 OD值，求得雌二醇受体含量。

1.3 统计学处理

所有数据均应用SPSS 13.0统计软件分析，区间变量以均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析进行组间显著性检验。

2 结果

2.1 血清孕酮与乳腺组织雌二醇受体含量

与正常对照组比较，模型对照组大鼠的血清孕酮含量降低而乳腺组织雌二醇受体水平升高，差异均有极显著性(P＜0.01);与模型对照组比较，愈疡胶囊组大鼠血清孕酮含量升高而乳腺组织雌二醇受体水平降低，差异均有显著性或极显著性(P＜0.05或 P＜0.01)。具体结果见表1。

表1 愈疡胶囊对模型大鼠血清孕酮和乳腺组织雌二醇受体的影响(±s)

表1 愈疡胶囊对模型大鼠血清孕酮和乳腺组织雌二醇受体的影响(±s)

注:与空白对照组比较，#P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05，▲P ＜0.01。

雌二醇受体(ng)8.69±3.42 16.85±3.51#12.51±2.57△9.45±3.41▲组别空白对照组(n=8)模型对照组(n=8)阳性对照组(n=8)愈疡胶囊组(n=8)孕酮(ng/mL)20.33±3.81 14.07±2.66#18.79±5.58△17.81±3.86△

2.2 乳腺组织病理变化

模型对照组大鼠的乳腺小叶腺泡数明显增多，腺泡腔和小叶导管腔明显扩张，腺泡和导管内分泌物增多，表明造模成功。与模型对照组比较，愈疡胶囊组大鼠乳腺导管上皮细胞排列比较整齐，小叶腺泡数、腺泡直径、小叶导管直径、分泌物均明显减少。两组大鼠乳腺组织的病理切片见图1。

图1 乳腺增生大鼠乳腺组织病理切片(×40)

3 讨论

乳腺增生病是乳房的一种非炎症性疾病，又称乳腺小叶增生或慢性囊性乳腺病，临床上是25～40岁女性的多发病与常见病，以乳房肿块和乳房胀痛为主要临床表现。现代医学多认为激素内分泌失调是本病的主要原因。雌激素主要由卵泡细胞产生，是直接刺激乳房生长、发育的最重要激素。在雌激素的作用下，乳腺导管广泛增生、延长，乳腺间质结缔组织增生。孕激素主要由卵巢黄体细胞产生，在雌激素的作用下可使乳腺导管进一步增生和延长，并促进腺泡和腺小叶的形成;另一方面，孕激素可以通过加速雌激素的代谢而降低雌激素水平[1-2]。生理条件下雌激素能对雌、孕激素受体产生正向调节作用，使其数量增多、亲和力增强，但血中激素浓度激烈波动时，机体自我调节使受体向激素改变的相反方向变化[1]。当机体存在雌激素绝对或相对升高，而孕激素绝对或相对不足时，乳腺组织长期处于雌激素刺激增生过度而复旧不全的状态，久而久之就会发生乳腺增生病[3]。乳腺增生时存在的内分泌失调，主要涉及孕酮、睾酮、垂体促乳素和雌二醇的平衡失调，进而影响乳腺组织正常平衡性变化，雌激素的过度刺激使乳腺组织从正常到增生乃至肿瘤形成[4]。

中医认为，乳腺增生病属“乳癖”病范畴，其最主要的临床症状乳房包块和肿痛的形成与痰瘀关系密切。痰瘀互结于乳络，结而不散则肿块形成;阻于络道，气机失调，经脉不通则疼痛。愈疡胶囊精选味甘性平的山药，补气健脾以绝生痰之源，兼治乳癖结块以及诸痛日久[5]而为君药;伍以祛风、攻毒、镇痛、破瘕积聚坚结、消痰破血、开通闭塞、消肿毒的蜂蜡等药味，标本兼顾，可达化痰散结、消肿止痛的目的，是针对该病的病因病机选药组方，故临床能取得显著疗效。

本研究结果显示，在造模过程中，长期大量应用外源性雌二醇启动了应激系统对雌激素不良刺激的抵抗，阻止雌激素进入细胞核与靶基因结合产生生物效应。模型对照组大鼠雌二醇受体的明显升高和孕酮明显降低说明，雌激素的绝对升高和孕酮的相对不足是乳腺组织出现病理性增生的根本原因，HE染色病理学检查结果进一步证明了造模是成功的。造模成功大鼠灌胃愈疡胶囊后，乳腺组织中雌二醇受体含量明显降低，血清中孕酮含量升高;病理学检查结果还显示，愈疡胶囊可抑制乳腺小叶和腺泡增多，抑制导管上皮增生。以上结果表明，对雌激素造模成功的大鼠灌胃具泄壅滞、逐痰积、消肿毒功能的愈疡胶囊，减弱了大量雌激素造成的不良刺激，降低了乳腺组织对雌激素的敏感性，减弱了雌激素在靶细胞上的生物学效应，从而抑制乳腺上皮细胞的增生，保护乳腺结构，且促进孕酮功能的正常发挥，最终产生抑制和治疗乳腺增生的作用。

综上所述，愈疡胶囊能通过调节血清中孕激素、乳腺组织中雌激素受体水平来达到治疗乳腺增生的作用。其作用机制可能是通过调节下丘脑-垂体-卵巢性腺轴的功能，改善机体内分泌功能，纠正异常激素水平使之恢复正常平衡而实现的。但有关愈疡胶囊如何影响下丘脑-垂体-卵巢性腺轴，尚有待进一步的实验研究予以阐明和证实。

[1]Godschalk MF，Unice KA，Bergner D，et al.A trial study:the effect of low dose human chorionic gonadotropin on the symptoms of benign prostatic hyperplasia[J].J Urol，2003，170(4 Pt 1):1 264-1 269.

[2]Foster WG，Younglai EV，Boutross-Tadross O，et al.Mammary gland morphology in Sprague-Dawley rats following treatment with an organochlorine mixture in utero and neonatal genistein[J].Toxicol Sci，2004，77(1):91-100.

[3]林 毅，唐汉钧.现代中医乳房病学[M].北京:人民卫生出版社，2003:103.

[4]Henderson BE，Ross R，Bernstein L.Estrogens as a cause of human cancer:the Richard and Hinda Rosenthal，Foundation award lecture[J].Cancer Res，1988，48(2):246.

[5]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海人民出版社，1977:167.