补虚颗粒对乙酰苯肼和环磷酰胺致血虚小鼠的补血作用研究

李春雷 ，刘 菁 ，朱雪松 ，李 鹏 ，郑 芳 ，朱 瑜 ，周丹丹

(1.湖北医药学院附属东风医院中药分析实验室，湖北 十堰 442008;2.湖北医药学院药检学院2005级学生，湖北 十堰 442000)

补虚颗粒由黄芪、当归、牛膝、防风4味中药制成，具补气养血、活血化瘀以及调节产妇分娩后虚证等功效。为了阐明该制剂的药理作用，为临床应用提供依据，笔者通过小鼠皮下注射乙酰苯肼和环磷酰胺建立小鼠血虚模型，研究补虚颗粒对血虚模型小鼠的“补虚”功效。

1 材料与方法

1.1 动物、试药与仪器

昆明种SPF级小鼠，雌性，体重(20±2)g/只(湖北医药学院动物实验中心，动物质量合格证号为NO00001675);补虚颗粒(湖北医药学院附属东风医院自制，每1 g相当于生药3 g，批号为071229)，复方阿胶浆(山东阿胶股份有限公司，批号为080212)，乙酰苯肼(上海三爱试剂有限公司，批号为20020920)，环磷酰胺(江苏恒瑞制药有限公司，批号为07120721);POCH-100i型全自动血液分析仪(日本Sysmex)。

1.2 方法

试验方法参照文献[1]，稍有改动。将60只小鼠随机分成6组，即正常对照组(A组)、生理盐水组(B组)、复方阿胶浆组(C组)和补虚颗粒低、中、高剂量给药组(D，E，F组)，每组10只。A组小鼠予正常饮食和水，不作任何处理;B组(阴性对照组)予生理盐水0.03 mL/g，灌胃给药;C组予复方阿胶口服液0.03 mL/g，灌胃给药;D组(5 g/kg)予补虚颗粒0.03 mL/g，灌胃给药;E组(10 g/kg)予补虚颗粒0.03 mL/g，灌胃给药;F组(20 g/kg)予补虚颗粒0.03 mL/g，灌胃给药。分组标记后，均连续给药7 d。除A组外，各组小鼠分别于第2天、第4天皮下注射乙酰苯肼20 mg/kg和40 mg/kg，第4天腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg，连续4 d。末次给药2 h后从各组小鼠眼眶静脉取血，检测其白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)和血小板(Plt)变化。用脊椎脱臼法将小鼠全部处死，取其胸腺和脾脏，称重，根据公式计算胸腺指数和脾脏指数。胸腺或脾脏指数=胸腺或脾脏湿重(mg)/体重(g)×100%。

1.3 统计学方法

数据应用SPSS 11.5软件统计分析，各组数据结果以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用 t检验。

2 结果

2.1 对血虚小鼠体重、胸腺、脾脏的影响

随着所予乙酰苯肼和环磷酰胺量的增加，各组小鼠呈现不同程度的精神萎靡，活动减少，聚堆，蜷卧，嗜睡，饮食减少，毛色失去光泽，皮肤呈现不同程度的苍白，尾色苍白，阴性对照组血虚症状最明显。阴性对照组小鼠的给药后体重、胸腺指数和脾脏指数均较正常对照组低，具有统计学差异(P＜0.05)，说明环磷酰胺发挥了免疫抑制作用，小鼠血虚模型成功建立;与阴性对照组比较，复方阿胶浆组和补虚颗粒部分剂量组的给药后体重、胸腺指数、脾脏指数有统计学差异(P＜0.05)，表明补虚颗粒能够改善免疫抑制剂对血虚小鼠免疫器官的抑制作用。结果见表1。

表1 补虚颗粒对化学损伤性血虚小鼠体重、胸腺、脾脏的影响(±s)

表1 补虚颗粒对化学损伤性血虚小鼠体重、胸腺、脾脏的影响(±s)

注:与 A组比较，＊P＜0.05;与B组比较，△P＜0.05(下表同)。

组别A组(n=10)B组(n=10)C组(n=10)D组(n=10)E组(n=10)F组(n=10)给药前体重(g)21.60±3.02 22.16±2.72 22.35±2.10 23.22±1.40 22.60±1.74 23.45±2.75给药后体重(g)28.18±2.75 24.68±2.70＊25.75±1.59 26.44±1.60 26.34±1.37 27.85±1.34△胸腺指数0.245 7±0.03 0.196 9±0.05＊0.238 1±0.02△0.240 8±0.05△0.212 6±0.07 0.231 8±0.08△脾脏指数0.372 7±0.05 0.221 9±0.03＊0.617 7±0.08△0.602 6±0.13△0.565 5±0.11△0.594 7±0.03△

2.2 对血虚小鼠外周血的影响

试验完毕检测小鼠外周血常规各项指标，结果见表2。与正常对照组比较，阴性对照组各项指标均低于正常对照组，具有统计学差异(P＜0.05)，说明环磷酰胺和乙酰苯肼显著抑制了小鼠的造血功能，本试验所建立的血虚小鼠模型是可靠的。与阴性对照组比较，复方阿胶浆组和补虚颗粒中、高剂量组小鼠的外周血红细胞、血红蛋白、白细胞和血小板计数均明显升高，具有统计学差异(P＜0.05)，提示补虚颗粒能够改善免疫抑制剂对小鼠外周血的破坏作用，具有一定的补血功效。

表2 补虚颗粒对化学损伤性血虚小鼠的外周血的影响(±s)

表2 补虚颗粒对化学损伤性血虚小鼠的外周血的影响(±s)

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3 讨论

中医血虚的临床证候与现代医学的贫血症状有相似之处，血虚与贫血的主要临床指征红细胞计数和血红蛋白值之间均存在着相关性[2]。因此，常采用现代手段模拟中医血虚研究补虚的机理或药物等。环磷酰胺作为细胞毒药物，可以损伤外周血细胞和骨髓细胞，特别是白细胞损伤更明显，乙酰苯肼能够缓慢而专一地损伤红细胞，两者联用共同损伤机体的血液系统，小鼠皮下注射两药能较好地反映中医血虚的症候。从试验结果分析，联合应用环磷酰胺和乙酰苯肼所建立的小鼠血虚模型是成功的，而补虚颗粒能改善化学物质致血虚小鼠的外周血常规，具有补血的功能。胸腺是机体内重要的免疫器官，脾脏既是免疫器官，也与造血有一定联系，当机体失血时，脾脏可代偿性地造血，致使脾脏体积扩大，质量增加[3]。因此以胸腺指数和脾脏指数作为小鼠免疫功能的观察指标，观察补虚颗粒对小鼠免疫功能的影响。结果显示，补虚颗粒能够改善小鼠胸腺指数和脾脏指数，可能对小鼠胸腺和脾脏的形态大小产生影响;能够增强小鼠胸腺和脾脏的免疫活性，对免疫抑制所致小鼠血虚后的免疫功能具有一定作用。现代中药药理研究也显示，补虚颗粒成分中的黄芪、当归和牛膝均具有免疫增强功能。黄芪是扶正固本的常用中药，黄芪多糖可从多方面发挥免疫增强作用[4];当归一般被认为是补血佳品，具有补血活血、调经止痛的功效，研究显示当归多糖是当归发挥免疫促进功能的主要成分，主要表现在促进机体的细胞免疫功能[5];牛膝具有活血祛瘀、补肝肾、强筋骨等功效，临床用于月经不调、痛经以及产后淤阻腹痛等症，不仅具有免疫增强活性，对生殖系统也有一定影响[6];防风能解表祛风、胜湿、止痉，具有抗炎镇痛等药理作用[7]。黄芪补气固本，当归补血，牛膝活血祛瘀，防风抗炎镇痛，4味中药组方制成的补虚颗粒治疗妊娠女性产后的体虚症，相得益彰，能增强产妇机体免疫功能。综上所述，补虚颗粒能够改善化学物质所致血虚小鼠的造血功能，同时具有一定的免疫增强功能，从而达到扶正固本功效，但其补血和促进免疫功能的机理需要进一步研究。

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[5]何 立.当归对神经和免疫系统作用的研究现状和展望[J].时珍国医国药，2007，18(9):2 282-2 283.

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