盐酸安妥沙星片中右旋安妥沙星的测定*

2022-04-19鄢雷娜刘绪平段和祥

化学工程师 2022年3期

陈希，鄢雷娜，刘绪平，段和祥

（江西省药品检验检测研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心,江西南昌 330029）

安妥沙星是通过对左氧氟沙星的分子结构优化，在左氧氟沙星的8 位引入-NH2获得的，是我国拥有自主开发的一类新药，属于手性喹诺酮类药物[1,2]。结构改造后的安妥沙星抗菌作用不但优于氧氟沙星、环丙沙星，且氨基的引入能使安妥沙星有效降低光敏毒性，心脏毒性甚至低于莫西沙星，有较高的安全性[3-5]。安妥沙星为单一左旋体，与右旋安妥沙星是一对对映体，为了控制药品质量，有必要对盐酸安妥沙星片中右旋安妥沙星进行控制，但目前，关于左、右旋安妥沙星测定的论文较少，只有洪建文[6]等采用高效毛细管电泳法实现了左、右旋安妥沙星对映体的拆分，且左、右旋安妥沙星峰未达到基线分离，检测精密度（RSD 大于2%）和检出限均较低。

目前，手性喹诺酮药物对映体的拆分多采用以硫酸铜-手性氨基酸为手性添加剂的方法，该方法用手性喹诺酮与手性氨基酸和Cu2+形成三元非对映体的配位化合物，在较短时间内在C18色谱柱上实现对映体的拆分，已经有文献对莫西沙星、帕珠沙星、氧氟沙星、尤利沙星等手性喹诺酮药物对映体进行了拆分测定[7-12]。本文采用L-苯丙氨酸和CuSO4为手性添加剂实现了左、右旋安妥沙星的拆分，并对盐酸安妥沙星片中右旋安妥沙星进行了测定。

1 实验部分

1.1 仪器

LC-6AD 型高效液相色谱仪，带二极管阵列检测器（日本岛津公司）；METTLER MS205DU 电子天平。

1.2 试剂试药

右旋安妥沙星对照品（批号：130466-201101，含量：90.0% 中国食品药品检定研究院）；左旋安妥沙星对照品（批号：130457-201101，含量：90.9% 中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯，L-苯丙氨酸生化试剂，其余试剂均为分析纯。盐酸安妥沙星片（规格：0.1g，批号190117，平均片重0.181g 安徽环球药业股份有限公司）。

1.3 色谱条件

流动相 L-苯丙氨酸-硫酸铜溶液（8mmol·L-1的L-苯丙氨酸和4 mmol·L-1的CuSO4，用NaOH 溶液调节pH 值至3.5）-甲醇（80∶20），流速：1.0mL·min-1，检测波长：302nm，进样量：10μL，柱温40℃，色谱柱为Welch Ultimate XB-C18（4.6mm×250mm，5μm）。

1.4 溶液的制备

精密称取左旋安妥沙星对照品和右旋安妥沙星对照品各约27mg，置于25mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为左、右旋安妥沙星对照品储备液（左、右旋安妥沙星各约1000μg·mL-1）。精密称取右旋安妥沙星对照品约11mg，置于100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀（右旋安妥沙星约100μg·mL-1）。精密量取上述溶液5mL，置50mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为右旋安妥沙星对照品溶液（含右旋安妥沙星约10μg·mL-1）。

取盐酸安妥沙星片，研细，精密称取细粉约18mg，置10mL 量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液（左旋安妥沙星约1000μg·mL-1）。

2 结果与讨论

2.1 系统适应性实验

取对照品储备液，按上文色谱条件测定，左、右旋安妥沙星峰保留时间分别为11.698 和14.827min，两峰间的分离度为5.618，达到基线分离。

图1 左、右旋安妥沙星对照品色谱图Fig.1 Levorotatory antofloxacin and dextral antofloxacin reference chromatogram

2.2 线性范围

取左、右旋安妥沙星对照品储备液适量，分别加流动相稀释成含左、右旋安妥沙星浓度分别约为500、200、100、50、20、10、2μg·mL-1的标准系列溶液，分别按上述色谱条件测定。以左、右旋安妥沙星的浓度（x）为横坐标，左、右旋安妥沙星的峰面积为纵坐标（y）进行线性回归。安妥沙星两对映体浓度在约2～500μg·mL-1之间与相应对映体峰面积呈良好线性关系。左旋安妥沙星回归方程为y = 4.008×104x+6.723×103，R2=0.99991。左旋安妥沙星回归方程为y = 4.036×104x+8.099×103，R2= 0.99994。

2.3 精密度

取左、右旋安妥沙星浓度约为500μg·mL-1的混合对照品溶液，按上述色谱条件进行测定。对照品溶液连续进样6 针分析，左、右旋安妥沙星峰面积的RSD 为0.1%和0.2%，说明本方法精密度良好。

2.4 重复性

按“1.4”中供试品制备方法，平行制备6 份供试品溶液。取6 份供试品溶液和右旋安妥沙星对照品溶液（右旋安妥沙星约10μg·mL-1），分别按上述色谱条件测定，供试品典型色谱图详见图2。

图2 供试品色谱图Fig.2 Chromatograms of sample

按外标法计算盐酸安妥沙星片中右旋安妥沙星的量，结果为0.0633%、0.0618%、0.0627%、0.0607%、0.0601%、0.0615%，平均值为0.062%，RSD 为2.0%。《中国药典》2020 年版中对待测成分含量约0.1%的重复性RSD 要求小于3%，本方法重复性RSD 为2.0%，说明本方法重复性良好。

2.5 定量限与检出限

取左、右旋安妥沙星浓度约为2μg·mL-1，用流动相稀释成含左、右旋安妥沙星浓度约1.0 和0.3μg·mL-1的溶液，分别按上述色谱条件测定，结果左、右旋安妥沙星峰信噪比均满足10∶1 和3∶1。本方法左、右旋安妥沙星的检出限和定量限分别为1.0μg·mL-1和0.3μg·mL-1。

2.6 准确度

精密称取盐酸安妥沙星片细粉约18mg（9 份），分别加右旋安妥沙星对照品溶液（含右旋安妥沙星约100μg·mL-1）0.5、1.0 和1.5mL（每个浓度平行制备3 份），加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过后照上述色谱条件测定并计算回收率。回收率为98.96%～101.57%，平均回收率为100.0%，RSD 为0.9%，说明本方法准确度良好，结果见表1。