引起宁都黄鸡支气管栓塞病原菌的分离鉴定
2021-03-20钟敏胡艳邱光忠苏州钟如意孔智伟刘瑞平
钟敏, 胡艳,邱光忠,苏州,钟如意,孔智伟 ,刘瑞平
(赣州市畜牧研究所,江西赣州341401)
支气管栓塞是近年来肉鸡群中流行的常见呼吸道疾病,以10~30 日龄肉仔鸡为主要发病对象,病鸡出现体温升高、食欲减退、咳嗽、流涕、喘息、高度呼吸困难等症状,常急性死亡,秋末、冬春季节常发。该病主要通过呼吸道进行传播,空气中带有病原体的尘埃和飞沫随呼吸过程进入呼吸道引起鸡只发病,常造成肉仔鸡生长缓慢,料肉比升高,如不及时治疗死淘率达到35%以上[1]。
2020 年赣州市某宁都黄鸡养殖场发生了支气管栓塞病,病鸡表现精神沉郁、食欲废绝,排黄白色、绿色稀薄粪便,剖检可见病鸡支气管内有干酪样纤维素性渗出物堵塞,肺脏水肿出血,肺泡内有泡沫样或干酪样物质,气囊混浊、增厚,病死鸡可见纤维素性肝周炎、纤维素性心包炎、腹膜炎。笔者采集病料进行了病原菌的分离鉴定,并对分离到的病原菌进行了耐药性分析,为临床防治提供指导。
1 材料与方法
培养基:营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基等,购自北京中海生物科技有限公司;微量生化管、药敏试纸等购自杭州天和微生物试剂有限公司;鉴定血清与标准菌株:大肠杆菌标准抗O 血清购自中国兽医药品监察所。
2 诊断方法
2.1 病原菌镜检与分离纯化
2.1.1 病料中的病原菌镜检。无菌采集9 只发病鸡的肺、肝、心脏等实质器官,进行病料的触片革兰氏染色、镜检[2]。
2.1.2 分离培养及纯化。将观察到大量明显细菌的病料样品,分区划线接种于营养琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板和麦康凯琼脂平板上,37℃培养18~24h,挑取在麦康凯琼脂平板上生长的单个红色的典型菌落,在普通营养琼脂斜面上进行纯培养,37℃培养 18~24h。如此反复纯化 3~4 代,直到获得单菌落为止,挑取单个灰白色菌落进行涂片、干燥、固定后进行革兰氏染色、镜检,观察细菌的形态和染色特性[3]。
2.2 生化鉴定
取分离纯化的单个菌落,分别接种各种细菌微量生化管进行生化鉴定,37℃培养24h。
2.3 血清型鉴定
将营养琼脂平板上的纯培养物用少量0.5%石炭酸生理盐水洗下,制成菌悬液,121℃灭菌处理2h,破坏K 抗原,抗原和大肠杆菌标准抗O 血清各取一白金耳,在载玻片上作凝集试验,同时抗原与生理盐水进行反应作为对照,以排除自身凝集反应。通过对分离菌株作血清型的检测,鉴定 O 血清型[4]。
2.4 耐药性分析
无菌操作条件下分别将每个分离到的菌株挑取适量的纯培养物接种于普通营养琼脂斜面,37℃培养18~24h,再用灭菌生理盐水将细菌洗下制成0.5 麦氏单位的菌悬液。用灭菌的涂布器将待检病原菌均匀涂布在营养琼脂平板上,采用纸片扩散法,进行药敏试验[5]。
3 结果
3.1 镜检与分离纯化
3.1.1 镜检结果。对采集的支气管栓塞发病鸡病料直接触片,用革兰氏染色,镜检发现,9 份病例中有7 份观察到大量散在的两端钝圆、无荚膜的革兰氏阴性小杆菌,疑似大肠杆菌。
3.1.2 分离纯化结果。将在显微镜下观察到大量细菌的7 份病料样品进行细菌分离,可分别在麦康凯培养基上培养出表面光滑、边缘整齐、圆形、隆起的红色菌落,在伊红美蓝琼脂平板上培养出深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽的菌落,经培养纯化后获得单菌落,共分离到7 株细菌,经涂片,革兰氏染色,镜检,结果发现,分离株均为革兰氏阴性的中等大小的杆菌,初步判定这些细菌为大肠杆菌。
3.2 生化试验结果
分离到的7 个菌株均符合大肠杆菌的特征,发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、果糖,产气产酸,不发酵蔗糖,VP 试验阴性,MR 试验阳性,三糖铁底层产酸,产生靛基质,尿素酶试验阴性,结果见表1。
3.3 血清型鉴定
经细菌分离培养及生化鉴定,所分离到的病原菌确定为大肠杆菌。应用微量平板凝集试验鉴定分离株的O 抗原血清型,结果显示均属于O78血清型。
表1 分离株生化鉴定结果
3.4 耐药性分析
耐药试验结果显示,7 个分离株对头孢西丁、头孢吡肟高度敏感,对大多数抗生素耐药,其中对强力霉素的耐药性最强。结果见表2。
表2 7 株分离菌耐药性试验结果
4 讨论
宁都黄鸡是江西省优良地方鸡种,支气管栓塞是近年来该鸡种常发的疫病之一,主要流行于季节交替时期。一般情况下,雏鸡患病后死亡率较高,给养殖户带来一定的经济损失。由于肉鸡没有明显而完整的膈,其肺脏小巧,又与气囊相通,病原微生物很容易沿着呼吸道进入肺和气囊,导致气囊发炎,而气囊壁很薄,血管少,很多药物在气囊内难以有效停留发挥药效,造成病程持久引发支气管栓塞。另外,许多养殖场因为要为鸡群保温,经常紧闭门窗忽视通风,密闭的环境令鸡舍内氨气浓度越来越高,造成病原菌入侵呼吸道引发支气管栓塞[6]。在生产实践中养殖户要加强对本病的防治,以减少损失,提高养殖经济效益,可采用以下综合防治措施:
一是处理好通风与保温的关系。一般1~2 周龄以保温为主,3~4 周龄时适当通风,4 周龄后以通风为主。另外,在进风口外侧加一个可加温的缓冲间是防止冷应激的好办法。
二是加强饲养管理,搞好环境卫生、及时清粪,定期消毒,保持适宜的湿度,减少室内氨气等有害气体浓度;降低饲养密度,平衡营养,减少应激,提高抵抗力,尽量减少发病诱因。
三是科学免疫接种,饮水中添加电解多维,提高机体抵抗力,减少应激反应和混合感染,控制继发感染。
四是药物防治。许多研究报道表明,肉鸡支气管栓塞往往是多种疾病混合感染的结果,对发病病例进行病原的分离及鉴定发现,分离率较高的是H9 亚型禽流感病毒和不同血清型的禽致病性大肠杆菌[7]。疾病前期主要表现在呼吸道上,症状为支气管栓塞,后几天才会出现流感和大肠杆菌的症状。因此,治疗上需采用联合用药,采取有效的抗病毒药和敏感抗生素联合用药,可以起到较好的治疗效果,大肠杆菌极易产生耐药性,所以临床治疗最好使用经药敏试验筛选的敏感性药物以合理的治疗剂量作治疗性用药。本试验通过对分离株进行耐药性分析,筛选敏感药物,同时结合抗病毒药物使用,加强对症治疗,祛痰、平喘、降低体温,使发病鸡场疫情得到及时控制。