基层兽医猪病料常用采集操作技术

代启树

摘 要：本文就基层兽医猪病料采集的原则进行了介绍，提出了不同病料常用的采集操作技术，希望能够为基层兽医提供参考以及借鉴，不断提高检测结果的准确性。

关键词：基层兽医;猪;病料;采集;原则;技术

基层兽医在日常对猪病诊断过程中，常常会遇到很难通过感官确诊或者定性的疾病，此时需要采取实验室诊断方法确诊。在实验室诊断前，首先需要采集病料，只有掌握猪病料采集技术要点，严格并且严谨的实施病料采集，才可保证疫病监测以及治疗工作的顺利开展。

1 病料采集的原则

1.1无菌采集。在病料采集过程中，必须保证全程无菌操作。尤其是需要进行血清学检查以及微生物检查的样本。所采用容器以及器械等必须经过严格的消毒处理，严格按照相关无菌操作规程进行操作。

1.2典型性。应保证所采集用于检疫的饲料具备代表性以及针对性。结合病害流行的特点明确需要采集病料的种类，在此基础上选择病料组织、分泌物以及排泄物等。

在此过程中需要注意，在选取动物过程中需要遵循典型性原则，保证所选择动物没有经过药物治疗，其临床症状具备代表性，在检查细菌性传染性疾病时尤为重要。

另外，选取病料时也需遵循典型性原则，尽可能选择病原体含量较高的病料。在准备采集病料前，首先需要对感染病害进行初步诊断，重点对常常受到病原体侵害的部位采集。

1.3适时性。应当准确把握病料的采集时间，尤其在夏季需要将采集时间控制在4h以内。如果采集时间过长，常常会导致病料组织发生腐烂现象，很难检测出原有病原组织。如果情况所需，应对早期发病的活体组织进行急宰并采集病料组织[1]。

1.4安全采集。在样本采集过程中，必须保证操作的安全性，在防止人员受到感染的同时避免因病原菌发生扩散而导致感染面积的增大。如果病猪为疑似炭疽病，不得立即为其剖检，而是需要切开其颈静脉处的皮肤，将少量血液抽出后制作压片以开展血片检查。

2 病料采集操作技术

2.1 采集前准备。

2.1.1 人员。在病料采集前，必须对采集人员开展相关业务培訓工作，保证其具备足够的生物安全意识。例如，如果病猪患有疑似非洲猪瘟疫情，采集人员在采集之前必须明确掌握非洲猪瘟传播、感染以及预防相关知识，同时能够对生猪进行熟练保定病采集病料。

2.1.2 物品。结合需要采集的病料制定一个科学合理的采集计划，同时做好所需物品的准备工作。通常情况下，需要为采集操作准备各种类型的手术器械、病料包装袋、容器以及消毒剂等。

对于在病料采集过程中需要使用的各种手术器械，必须提前在121℃下高压灭菌30min。对于注射器、采血针以及采血管等，需要使用一次性无菌制品;如果不具备一次性物品，必须再使用前落实无菌处理。对病料采集过程中需对70%的酒精、福尔马林固定液、保存液、其他消毒液等各种所需溶液进行配制。另外，还需提前准备防护服、防护口罩、无菌手套、病料采集单、记号笔、护目镜以及胶靴等。

2.1.3 环境。在采集病料之前，首先需要选择最为适宜的病料采集位置，同时对病料采集环境进行严格的消毒。严格处理各种废弃物，防止病毒传播扩散，避免发生污染。

在病料采集过程中所使用的手术刀片以及注射器针头等在使用完毕后需要立即置于封闭的锐器盒内，同时进行严格的无害化处理;对于一次性防护用品以及注射器等，则需置入密封袋无害化处理。

在病料采集工作结束后，需要及时采用消毒剂对动物尸体进行喷洒消毒，接着装入密封袋中无害处处理。采集人员需要更衣消毒，对环境进行有效的清洁以及彻底的消毒。

2.2 病料采集方法。采集人员需要严格按照相关操作规程开展病料采集工作。

2.2.1 血液采集。猪只不仅脂肪层较厚，同时具备较厚的肌肉层，通常情况下很难直接触及其血管，因而对其采集血液难度较大。在临床上，血液采集方法较多，但是要想在获取大量血液的同时使采血速度得到保障，通常采用颈静脉采血方式以及前腔静脉采血方式。可以结合猪只大小等各种客观因素灵活选择适宜的采血方法[2]。

（1）颈静脉采血。对猪只进行站立式保定，保证被保定猪只头部处于垂直上举状态，同时身体与头部垂直不存在扭曲现象。操作人员需要从猪只颈静脉沟处将针刺入，对着微偏中心线背部方向抽取血液。

（2）前腔静脉。与颈静脉采血方式采取同样的保定方法。在保定好后，猪只颈根部以及胸骨之间会出现一个凹陷窝。在采血过程中，将针头对着凹陷窝的位置刺入，刺入方向为一侧肩胛骨顶端方向。另外，病猪机体左侧内，心脏以及膈肌内存在着较多的迷走神经，但是其右侧较少。在扎针过程中，一旦碰到迷走神经，常常会导致猪只出现抽搐以及呼吸困难等各种症状。因而，在采血过程中在凹陷窝位置入针以后将插针方向控制在向右肩胛骨方向。

（3）血液处理方法。在病原学检测过程中，需要采用具备抗凝功能的血液。在采集过程中，所采用真空采血管内应当已经加入了枸橼酸钠、EDTA或者肝素等各种抗凝剂，或者抽取果抗凝剂浸润过的注射器。严禁对所采集血液进行冷冻保存，将其保存温度控制在2-10℃，严格控制保存时间，不得超过24h。如果保存时间过长，红细胞极容易发生变形或者破裂，使显微镜的观察受到影响。

如果需要进行血清学检测，在检测之前首先需要制备血清。通常情况下通过离心分离来制备血清，在离心之前，需要将血液保存于温度为4℃的冰箱内2h，以促进血清的析出[3]。离心过程中，将离心机的转速控制在2000r/min，离心时间控制在10min。另外，也可以将血液在采血管内自然放置12-24h从而将血清析出。可以采用冷冻方式对血清进行保存，但是冷冻保存方式保存时间不宜超过7天。在此过程中需要注意，反复冻融会导致血清内物质的活性遭到破坏，使评价工作受到影响。

2.2.2 组织采集方法。在组织病料采集过程中，需要遵循无菌操作，保证一畜一套器械。在采集心脏、淋巴结、肾脏以及脾脏等病变脏器组织时，必须保证操作迅速，尤其是在气温较高的夏季，需要将采集时间控制在4h内，如果采集时间过长，组织器官常常会发生自溶、腐败以及变性等各种情况，使检验效果受到影响。在活体病料采集过程中，如果为多只动物发病，首先对存在明显症状的猪只采集。需要将所采集病料置于50%的甘油缓冲液内保存并送检。如果需要开展病理组织学检查，需要将所采集组织置于95%的酒精中或者福尔马林溶液当中。固定组织以及固定液的体积比为1：10，通常在固定后24h需要对固定液进行1次更换。对待送检病料进行编号，同时做好其记录工作。妥善包装送检病料，例如组织病料以及血液需要冷藏保存，而病理学材料不得冰冻。

2.2.3 尿液。在猪只排尿过程中，采取一次性塑料杯接取其尿液。

2.2.4 粪便。采用无菌棉拭子从猪只直肠内或者肛门内壁部位沾取新鲜的粪便，接着将棉拭子置于密封袋内，在此过程中折断并舍弃手拿捏棉拭子柄的位置，以防所采集粪便受到污染[4]。

2.2.5 鼻分泌物。采用无菌棉拭子沾取猪只鼻腔内或者鼻镜内的黏液。接着采用与粪便采集同样的方式将其置于密封袋内。

2.2.6 皮肤。采用锋利的外科刀具从病变皮肤部位刮取皮屑、结痂以及毛发等并置于容器内。

2.2.7 乳汁。采用消毒液对乳房、乳房附近毛发进行消毒。弃取最初几股乳汁，接着采集10-20ml乳汁并置于灭菌容器当中。

参考文献

[1] 陈峰， 党安坤， 徐淑华， 等. 猪的病料采集方法和注意事项[J]. 现代畜牧科技， 2019， （8）： 15-16.

[2] 伊军. 基层兽医病料采集的要点分析[J]. 畜牧与饲料科学， 2016， 37（5）： 111-112.

[3] 姚奕蕾. 基层兽医之言是样品采集、工作中必须注意的问题与建议[J]. 国外畜牧学—猪与禽， 2016， 36（5）： 93-95.

[4] 尕吉. 动物检疫中病料采集的原则及常用的方法[J]. 中国畜牧兽医文摘， 2016， 32（6）： 103.