马传染性贫血琼扩试验中琼脂配比浓度及温度因素对琼脂板制作的影响

赵怡雯

马传染性贫血病，简称马传贫，二类传染病，由反转录病毒科慢病毒亚科中的马传染性贫血病病毒引起的马、骡、驴传染病。1974年在委内瑞拉召开的国际马传贫座谈会上决定， 将琼脂扩散试验作为国际通用诊断方法。琼扩试验的成功的关键因素是琼脂板及琼脂孔的成功制作，因为在琼脂板的制作及打孔过程中很容易形成微小的裂隙，这样容易导致假阳性的产生导致误判，严重可直接导致试验失败。国标中琼脂板是按照1%的琼脂浓度进行制作，对琼脂板的制作及打孔过程中的温度并未作出规定。所以本次实验将琼脂进行不同浓度配比，并在不同温度下进行琼脂板制作及打孔比较，寻找琼脂板制作及打孔的最佳条件。

1 材料

pH为7.2的0.02摩尔/升的磷酸盐缓冲液（PBS）、琼脂、平皿。

2 主要仪器

水浴锅、天平。

3 方法

本次实验将琼脂和缓冲液按照不同浓度配制并在12℃和20℃两个温度下分别进行（見表1和表2），进行热水浴加热混匀。将15～18毫升的琼脂液倒入水平桌上的平皿中，厚度约2.5毫米，冷凝后加盖倒置。按照7孔型对琼脂进行打孔，将切下的琼脂取出，并注意不要使琼脂膜与平皿面离动。

4 结果分析

经过实验操作发现，在12℃、1%琼脂浓度和在20℃、1.15%琼脂浓度条件下即平皿1和平皿9，制备琼脂板打孔步骤中挑出切下琼脂块的难易度最为接近，也最易成功，不易碎裂。这与潘蕙文等进行的琼脂凝胶强度和琼脂溶液黏度试验结果也相符合，同时这两份琼脂板经过琼扩试验验证，取得了满意的结果。通过此次实验，对国标中未尽之处作了补充，同时也有助于提高试验的成功度与准确度。建议在试验过程中，根据温度环境的不同灵活调整琼脂浓度。