盐生海芦笋抗菌内生细菌的筛选与鉴定

冉火苗，孔望君，蒋会芳，史雅凝，辛志宏

(南京农业大学 食品科技学院，江苏 南京，210095)



盐生海芦笋抗菌内生细菌的筛选与鉴定

冉火苗，孔望君，蒋会芳，史雅凝，辛志宏*

(南京农业大学 食品科技学院，江苏 南京，210095)

摘要以抗菌活性为指标，从野生海芦笋中筛选与鉴定具有抗菌活性的内生细菌。采用平板分离与斜面纯化的方法，从海芦笋中分离到13株内生细菌，经过对8株病原菌抗菌活性测试，菌株HLS-7和HLS-8对大肠杆菌(Escherichia coli)、金色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)和白假丝酵母(Candida albicans)均显示了较强的抑制活性，其抑菌圈直径均>10 mm；对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella penumoniae)均显示了中等抗菌活性，表现出广谱的抑菌活性。PCR扩增这2株菌的16S rDNA区域，单克隆后测序进行同源性分析，构建系统发育树，结合形态学观察和生理生化实验，将菌株HLS-7和HLS-8分别鉴定庆生芽孢杆菌(Bacillus qingshengii)和甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。通过电喷雾质谱分析这2株菌的发酵产物，结果显示,菌株HLS-7可产生脂肽类化合物Fenycin和Iturin，菌株HLS-8可产生脂肽类化合物Iturin，提示这2株菌的抗菌活性可能源于脂肽化合物。

关键词海芦笋；内生细菌；抑菌活性；筛选鉴定；脂肽化合物

植物内生菌是天然生物活性物质的资源宝库，特别是食药两用植物。研究表明，植物内生菌与宿主植物长期的生活过程中，形成了互惠互利的共生关系，能够产生与宿主植物相似或相同的生物活性物质，如环肽类抗生素、皂苷、生物碱等。这为发现新型活性物质，保护稀有野生植物与可持续发展提供了有效途径。MILLER等[1]从草本植物叶子和组织内发现了对微荚膜新隐球酵母(Cryptococcusneoformans)和白色念珠菌(Candidaalbicans)等病原菌有较强抑制作用的黄绿假单胞菌(Pseudomonasviridiflava)。该菌能产生两种新型的脂多肽类抗生素Ecomycins，分子质量分别为1 153 Da和1 181 Da。何红等[2]从辣椒体内分离到1株能在辣椒、白菜等植物体内定殖传导并对多种植物病原真菌具有较强拮抗作用的枯草芽孢杆菌。该菌能够产生一种环脂类抗菌肽，对多种植物病原真菌和细菌有较强的拮抗作用。因此，植物内生细菌是一类亟待开发的微生物资源，在生物防控、食品、制药、农业生产等领域具有潜在的应用价值。

海芦笋(Salicornia bigelovii Torr.)又称海蓬子、海鹿茸、海虫草、富贵菜等，为藜科盐角草属的1年草本盐生植物，在我国、韩国和欧美均有分布[3]。海芦笋有茎无叶耐盐能力极强，其内茎的可溶性盐分含量高达37%[4]。研究表明，海芦笋营养丰富，含有多种必需氨基酸、维生素、微量元素、植物碱和植物盐[5]。食用后其中的植物碱可与人体血液中的脂肪酸中和，能够清除血管壁上的胆固醇，具有降血脂作用[6-8]。特别有趣的是海芦笋不被虫子捕食，提示其中可能含有较强的抗菌活性物质。

本研究以野生盐生海芦笋为研究对象，从中分离内生细菌，筛选具有抑菌活性的内生细菌，进一步探索海芦笋内生菌与宿主之间的关系并深入挖掘具有抗菌活性的物质。

1材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1材料、试剂与培养基

野生盐生海芦笋，采自新疆盐湖。

Taq酶及PCR相关试剂(包括dNTP与PCR Buffer等)，天根生化科技(北京)有限公司；Omega真菌基因组试剂盒(Fungal DNA Kit 50)及引物(16S F/16S R)，上海捷瑞生物工程有限公司；其他分析纯试剂，南京寿德试剂器材有限公司。大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、耻垢分枝杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)、产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)、单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapenumoniae)和白假丝酵母(Candidaalbicans)，均购自于中科院微生物菌种保藏中心。

LB固体培养基：NaCl 10 g，酵母提取物5 g，胰蛋白胨10 g，琼脂20 g，pH自然，蒸馏水1 000 mL。

牛肉膏蛋白胨培养基(NA培养基)：牛肉浸膏3 g，蛋白胨5 g，葡萄糖2.5 g，pH (7.0±0.1)，蒸馏水1 000 mL。

1.1.2仪器与设备

Microfuge 22R台式微量冷冻离心机，美国Beckman公司；TP600型梯度PCR仪，日本TaKaRa公司；DYCP-31DN电泳仪，北京市六一仪器厂；JS-380C全自动数码凝胶成像分析仪，上海培清科技有限公司；Agilent 5975C型MS仪，美国安捷伦科技有限公司。

1.2实验方法

1.2.1内生细菌的分离纯化

在无菌操作下，取1根野生海芦笋，依次经过75%乙醇、1%次氯酸钠和75%乙醇各浸泡1 min，然后用无菌水漂洗3次，无菌吸水纸干燥。用灭菌后的剪刀将其剪成7～9 mm小段，放在LB平板上，每板3～5根，于37 ℃恒温培养至茎末端长出菌落，将细菌转移到新的平板培养基上划线分离得到单个菌落，然后转移到LB斜面试管中，4 ℃保存，备用。

1.2.2抑菌活性测定(滤纸片法)

将分离得到的菌株活化后挑取单菌落接种于NA培养基中，37 ℃，120 r/min下振荡发酵培养6 d。将发酵液用80%丙酮-水(v/v)溶液浸泡提取1 h，过滤后的菌丝体再用丙酮-水溶液重复提取2次后，合并提取液，减压浓缩至不含丙酮后，用蒸馏水溶解，过滤后测试抑菌活性，平行重复3次，同时，分别以制霉素和链霉素作为阴性对照及阳性对照，将上述平板于37 ℃培养24 h 后观察并测量抑菌圈的直径。

1.2.3形态学观察

从保藏菌种的斜面培养基中挑取菌落转接到LB平板培养基中间位置，37 ℃培养1～3 d，观察菌落大小、颜色、质地等形态特征。

1.2.4菌株生理生化特性测定

参考文献([9-11])测定菌株的生理生化特征。

1.2.5基因组DNA的提取

挑单菌落接种到10 mL LB培养基中37 ℃振荡过夜培养。取2 mL培养液到2 mL Eppendorf管中，8 000 r/min离心2 min后倒掉上清液。加140 μL TE打散细菌，再加入60 μL 10 mg/mL的溶菌酶。37 ℃放置10 min。加入400 μL Digestion Buffer，混匀。再加入3 μL Protein K，混匀，55 ℃温育5 min。加入260 μL乙醇，混匀，全部转入UNIQ-10柱中。10 000 r/min离心1 min，倒去收集管内的液体。加入500 μL 70%乙醇(Wash Solution)，10 000 r/min离心0.5 min。重复上一步骤。再10 000 r/min离心2 min彻底甩干乙醇。吸附柱转移到一个新的1.5 mL的离心管。加入50 μL预热(60 ℃)的洗脱缓冲液，室温放置3 min。12 000 r/min离心2分钟，收集DNA 滤液。提取的基因组DNA 在1%琼脂糖凝胶中电泳检测(120 V，30 min)，EB(溴化乙锭)染色。4 ℃保存备用，或于-20 ℃环境下长期保存。

1.2.616S rRNA基因片段的PCR扩增

16S区域的扩增选择细菌16S rRNA的通用扩增引物16S(F)(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’) /16S(R)(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)，PCR反应条件为预变性94 ℃ 3 min，变性94 ℃ 30 s，退火45 ℃ 1 min，延伸72 ℃ 1 min 40 s，共35个循环，最后延伸72 ℃ 7 min[12]。

1.2.716S rRNA序列克隆测序

采用TaKaRA DNA提取试剂盒Ver 3.0回收PCR产物，纯化的PCR产物与pMD19-T载体连接，然后转化至大肠杆菌DH5α制备的感受态细胞中。在-70 ℃保存的100 μL感受态细胞E.coli DH5α中加入10 μL连接产物，冰中放置30 min，取出后42 ℃热激90 s，加入890 μL LB液体培养基37 ℃振荡培养1 h。菌液涂布于含氨苄青霉素AMP(100 μg/mL)的LB培养基平板，倒置过夜培养，挑取白色单菌落培养。取0.5 μL菌液直接做PCR，引物为M13RV和M13-47，电泳检测是否含有目的片段。PCR采用25 μL的反应体系，包括13.75 μL ddH2O，7.5 μL PCR Buffer(10×，Mg+plus)，2 μL dNTP(2.5 mmol/L each)，0.5 μL Primer-F(20μmol/L)，0.5 μL Primer-R(20μmol/L)，0.5 μL DNA，0.25 μL Taq polymerase(5U/μL)。

1.2.8目的DNA序列的测序和系统发育学分析

PCR扩增菌株的16S r DNA，切胶回收目的条带与载体连接后于感受态细胞中表达，挑取阳性克隆子送上海美吉生物有限公司测序。将获得的序列于EzTaxon[13](http://eztaxon-e.ezbiocloud.net)数据库中进行同源性搜，下载同源性最高的基因序列，利用ClastalX(1.83)软件[14]进行多重比对分析，使用MEGA6.0软件[15]和Neighbor-Joining(N-J)法[17]构建系统发育树，自展值1 000。

1.2.9质谱测定方法

将分离得到的菌株发酵7 d，丙酮提取发酵产物，过滤后直接进样分析。质谱参数：电喷雾离子源(ESI)，离子源温度500 ℃，气帘气25.0 psi，喷雾电压5 500.0 V，离子源气1: 55.0 psi，离子源气2: 50.0 psi。

2结果与分析

2.1海芦笋内生菌分离及抑菌活性筛选结果

采用表面消毒方法从海芦笋植株样本中分离出13株内生细菌，用滤纸片法[18]对内生细菌次生代谢产物的抑菌活性进行测试，结果如表1所示。在13株测试菌株中，菌株HLS-7和HLS-8对大肠杆菌、金色葡萄球菌、耻垢分枝杆菌和白假丝酵母表现出较强的抑制活性，其抑菌圈直径均>10 mm(图1)，提示这2株菌可能产生具有抗菌作用的活性物质。

2.2菌株形态学鉴定

菌株HLS-7幼龄菌落为圆形，表面和边缘光滑，呈白色不透明状。30 ℃培养3d后，菌落呈凸状隆起，颜色仍为白色。菌株HLS-8幼龄菌落为圆形，表面和边缘光滑，呈白色，不透明，37 ℃培养3d后，菌落形状不规则，边缘不整齐，表面干燥褶皱，菌落颜色略微变黄(见图2)。

表1　海芦笋内生细菌抑菌试验结果(n=3)

注: A-大肠杆菌; B- 枯草芽孢杆菌; C- 金色葡萄球菌; D-耻垢分枝杆菌; E-产气肠杆菌; F-单增李斯特菌; G-肺炎克雷伯菌; H-白假丝酵母;- : 无活性; + : 抑菌圈直径< 10 mm; + + : 抑菌圈直径10 ～ 15 mm; + + + : 抑菌圈直径> 15 mm。

a-大肠杆菌; b-金色葡萄球菌; c-耻垢分枝杆菌; d-白假丝酵图1　内生细菌的抗菌活性Fig.1　Antibacterial activity of the fermentation broth of endophytic bacteria

图2　内生细菌的菌落特征Fig.2　The morphological characters of the endophytic bacteria

2.3菌株生理生化特性

2.3.1碳源的利用

菌株HLS-7、HLS-8对碳源的利用情况如表2所示。从中可见菌株HLS-7能利用D-葡萄糖、蔗糖、甘露醇、D-乳糖和D-木糖，不能利用D-果糖和半乳糖。菌株HLS-8能利用D-葡萄糖、蔗糖、甘露醇、D-果糖、半乳糖和D-木糖，不能利用D-乳糖。通过与文献比较，发现菌株HLS-7和HLS-8分别与B. qingshengii[19]和B. methylotrophicus[20—21]的碳源的利用情况基本一致。

2.3.2理化指标

菌株HLS-7、HLS-8的生理生化实验结果如表3所示。从中可见菌株HLS-7为革兰氏阳性菌，无运动性，最适生长温度为30 ℃，最适pH为7，耐盐范围为2%～10%；氧化酶、接触酶、酪素水解、淀粉水解、柠檬酸利用和明胶液化反应均为阳性；甲基红、V-P试验和硝酸盐还原反应为阴性。菌株HLS-8为革兰氏阳性菌，有运动性，最适生长温度为30 ℃，最适pH为7，耐盐范围为2%～7%；氧化酶、接触酶、酪素水解、淀粉水解、明胶液化反应、V-P试验和硝酸盐还原均为阳性，甲基红、柠檬酸利用反应为阴性。通过与文献比较，发现菌株HLS-7 和HLS-8分别与B. qingshengii[19]和B. methylotrophicus[20-21]的生理生化指标基本一致。

表2　菌株HLS-7和HLS-8与模式菌株B. qingshengii和

注“+”表示利用；“-”表示不利用；“NR”表示未见报道。

表3　菌株HLS-7和HLS-8与模式菌株B. qingshengii和

注“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应；“NR”表示未见报道。

2.4菌株 HLS-7、HLS-8 的16S rDNA 基因序列

扩增菌株 HLS-7、HLS-8的 16S rDNA 基因序列，得到了长度约 1.5 kb 的扩增片段，其电泳结果如图 3 所示。目的片段经克隆后测序，测得菌株 HLS-7的16S rDNA为1392 bp，菌株 HLS-8的16S rDNA为1583 bp，与普通细菌的16S rDNA 基因片段大小基本一致。将二者序列分别于GenBank数据库中注册，获得序列号分别为KT999392和KT999393。

图3　菌株HLS-7、HLS-8的16S rRNA基因片段扩增图谱Fig.3　PCR production of a fragment of 16S rRNA from HLS-7，HLS-8

2.5系统发育学分析

将菌株HLS-7的16S rRNA序列在EzTaxon数据库中进行同源性搜索，下载同源性较高菌株的16S rRNA基因序列，使用ClustalX (1.83) 软件进行多序列分析，并通过MEGA 6.0 软件构建系统进化树(图4)。从系统发育树中可以看出，菌株HLS-7与B.qingshengiiG19T(JX293295)聚为一枝，表现出较近的亲缘关系，相似度为100%。因此将其初步鉴定为庆生芽孢杆菌(B. qingshengii)。

图4　基于16S rRNA 基因序列构建的系统发育树Fig.4　Neighbor-Joining phylogenetic tree based on partial 16S rRNA sequences

将菌株HLS-8的16S rRNA序列在EzTaxon数据库中进行同源性搜寻，下载同源性较高菌株的16S rRNA基因序列，使用ClustalX (1.83) 软件进行多序列分析，利用MEGA 6.0 软件构建系统进化树(图5)。从系统发育树中可以看出，菌株HLS-8与B. methylotrophicus CBMB205T(EU194897)聚为一枝，表现出较近的亲缘关系，相似度为100%。因此将其初步鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(B. methylotrophicus)。

综合形态学鉴定、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果，将菌株HLS-7鉴定为细菌界Bacteria、厚壁菌门Firmicutes、细菌纲Bacilli、芽孢杆菌目Bacillales、芽孢杆菌科Bacillaceae、芽孢杆菌属Bacillus、庆生芽孢杆菌B. qingshengii；将菌株HLS-8鉴定为细菌界Bacteria、厚壁菌门Firmicutes、细菌纲Bacilli、芽孢杆菌目Bacillales、芽孢杆菌科Bacillaceae、芽孢杆菌属Bacillus、甲基营养型芽孢杆菌B. methylotrophicus。

2.6抗菌产物成分初步分析

将株菌HLS-7和HLS-8发酵7 d后，丙酮提取发酵产物浓缩蒸干后，用适量蒸馏水溶解，于ESI-MS进行分析，结果如图6所示。从图6A中可见，菌株HLS-7的粗提物在m/z 1 135.7、1 020.9、1 034.9、1 035.9处出现碎片离子峰，为Iturin类化合物的特征分子离子质量，提示发酵产物中可能存在Iturin类化合物，另外，在m/z 1 480.9处出现碎片离子峰，可能是Fenycin的分子离子质量，提示发酵产物中可能存在Fenycin类化合物。从图6B中可见，菌株HLS-8的发酵产物在m/z 1 020.9、1 034.9、1 035.9 处出现碎片离子，为Iturin类化合物的特征分子质量，提示发酵产物中可能存在Iturin类化合物。

3讨 论

内生菌能够产生结构新颖、活性多样的生物活性物质，这为利用微生物培养与发酵技术挖掘新型活性物质提供了有效途径。1993年STIERLE[24]首次从短叶红豆杉(Taxusbreviflia)中分离得到1株能合成抗癌物质紫杉醇的内生真菌Taxomycesandreanae，从其发酵产物中提取到紫杉醇。这为解决红豆杉生长缓慢且紫杉醇产量低的问题提供了新的途径。WICKLOW等[24]从玉米种分离得到1株内生真菌Acremoniumzeae，首次从该菌中分离出抗菌物质pyrrocidines A和B。此类抗生素对黄曲霉和枯萎病菌有抗菌活性，可防止霉菌污染，有效提高玉米产量。张俊楠等[24]从盐生海芦笋中分离得到1株具有抑菌活性的内生真菌Fusariumtricinctum，对其发酵产物进行分离提取，从中得到化合物fusartricin(1)、fusarielin B(2)和enniatin B(3)，其中fusartricin(1)是一种新型的倍半萜醚类化合物，对E.aerogenes，M.tetragenu和C.albicans有较强的抑制活性，fusarielin B(2)和enniatin B(3)也均显示出广谱抑菌活性，这为挖掘对人体有益的活性物质提供了理论基础。因此，从植物中分离内生菌，挖掘活性次级代谢产物已经成为农业、生物制药与功能食品研究领域的热点。

从植物内生菌分离出的生物活性物质中约有51%的新型化合物，其中多种化合物具有广谱抑菌活性，这对开发新型抗菌物质极具研究价值[26]。芽孢杆菌作为一种常见的植物内生细菌，也是活性化合物的重要来源。芽孢杆菌能够对热、紫外线、盐碱环境和某些化学药品产生强抗性的芽孢，因此能够忍受很多不良的生长环境[27]。由于这些特殊的生物学特征，芽胞杆菌能够产生多种活性物质，如多肽、环肽、脂肽、脂肽抗生素、蛋白酶类、大环内酯类及香豆素类等，其中，有些活性物质已广泛应用于医药业及工农业[28]。

本研究从野生海芦笋中分离纯化得到13株内生细菌。采用滤纸片法对内生细菌次生代谢产物的抑菌活性进行评价，筛选得到2株对8种受试致病菌具有较强抑制活性的内生细菌HLS-7和HLS-8，通过培养特征、生理生化特征观察与分子生物学相结合的方法，对分离自海芦笋的2株具有广谱抑菌活性的内生细菌进行鉴定。提取菌株基因组DNA后，扩增16S rDNA基因片段并测序，测序结果在EzBioCloud数据库进行有效种的序列相似性搜索，构建16S rDNA基因序列进化树。根据进化树结果，结合培养特征、生理生化特征，将菌株HLS-7鉴定为庆生芽孢杆菌B.qingshengii，HLS-8鉴定为甲基营养型芽孢杆菌B. methylotrophicus。但目前国内外对于这两类菌株的报道均较少。

图5　基于16S rRNA 基因序列构建的系统发育树Fig.5　Neighbor-Joining phylogenetic tree based on partial 16S rRNA sequences

图6　HLS-7 (A)和HLS-8 (B)发酵产物质谱图Fig.6　Mass spectrum diagram for HLS-7 (A) and HLS-8(B)

B.qingshengii是XI等[19]在2014年从风化岩(凝灰岩)表面分离出1株芽孢杆菌属的新成员，该菌株为需氧菌，呈革兰氏阳性，棒状，形成内生孢子，表现为过氧化氢酶和氧化酶阳性。目前该菌种仅在岩石表面分离得到[19]，本研究首次以盐生海芦笋为来源分离出该菌，发现其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多株病原菌有良好的抑菌活性，通过对其发酵产物的初步鉴定，推测该菌株能够产生具有显著抗菌活性的脂肽类化合物Fenycin和Iturin，提示B.qingshengii的抗菌活性可能源于抗菌脂肽。

B.methylotrophicus是1株极具开发前景的微生物菌株，近年来受到广泛关注。研究发现该菌具有特殊的代谢机制，能够产多种抑菌活性物质。姜云等[29]发现B.methylotrophicus能够产生一种具有抗紫外线、耐热、耐酸碱和耐蛋白酶降解的抗菌蛋白，而且，该蛋白对人参锈腐病菌有较强拮抗作用，能够有效防治人参锈腐病。吕倩等[30]从南海深海中分离出1株B.methylotrophicus，该菌能够产生多种抗菌脂肽，具有较强抑制黄瓜炭疽病菌、立枯丝核菌、黄瓜枯萎病菌等植物病原真菌的作用。本研究首次从盐生海芦笋中分离鉴定到该菌，发现其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多株病原菌有较强的抑菌活性，通过对其代谢产物初步分析，推测该菌能够产生脂肽类化合物Iturin，提示B.methylotrophicus的抗菌活性可能源于抗菌脂肽。

海芦笋内生细菌由于生活在高盐环境，在长期的进化过程中，形成了独特的代谢机制，能够产生具有特殊生物活性的酶类，催生结构新颖、活性独特的次级代谢产物。本研究以抑菌活性为指标，对盐生海芦笋中的内生细菌发酵液进行抑菌作用研究，其目的在于筛选出能够产生较强抑菌活性物质的菌株HLS-7和HLS-8。今后将这2株菌的次级代谢产物进行大量发酵，通过分离纯化技术，进一步研究其中的单体化合物结构，为深入揭示内生细菌和宿主海芦笋之间的关系以及挖掘新型抗菌活性物质提供理论依据。

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Isolation and identification of endophytic bacteria fromSalicorniabigeloviiTorr. and their antimicrobial activities

RAN Huo-miao, KONG Wang-jun, JIANG Hui-fang, SHI Ya-ning, XIN Zhi-hong*

(College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

ABSTRACTBased on the antimicrobial bioassay-guided screening, 13 endophytic bacteria were isolated from Salicornia bigeloviiTorr. by spread plate and slant culture methods. The antimicrobial activities of these isolates were tested against 8 strains of pathogens. Among the 13 tested isolates, the isolate HLS-7 and HLS-8 showed strong inhibitory activities against E. coli, S. aureus, M. smegmatis and C. albicans with the inhibition zone diameters more than10 mm, meanwhile showed a broad-spectrum antimicrobial activities against B. subtilis, E. aerogenes, L. monocytogenes and K. penumoniae. The 16S rDNA region of these two isolates were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and were subjected to monoclone，sequencing and homology analysis， their phylogenetic trees were established as well. Combined with physiological and biochemical experiments, these two isolates were identified as B. qingshengii and B. methylotrophicus, respectively. The electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) analysis of the fermentant products indicated that the isolate HLS-7 could highly produced cyclic lipopeptides Fengycin and Iturin，whereas the strain HLS-8 produced Iturin，suggesting that the antimicrobial activities of these two isolates probably derived from cyclic lipopeptides．The current study lays the foundation for further revealing of the relationship between the endophytes and its host as well as mining of active components with antimicrobial activities.

Key wordsSalicornia bigelovii Torr.; endophytic bacteria; antimicrobial activity; identification; lipopeptide

收稿日期：2015-10-21，改回日期：2015-12-03

基金项目：2015年农产品质量安全风险评估项目(GJFP2015012)

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201603014

第一作者：硕士研究生(辛志宏教授为通讯作者，E-mail：xzhfood@njau.edu.cn)。