Apelin与ADMA在子痫前期患者血清中的表达①

吕敬媛，张园彤

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)



Apelin与ADMA在子痫前期患者血清中的表达①

吕敬媛，张园彤

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)

摘要：目的：通过检测子痫前期患者血清中Apelin及ADMA表达，主要研究在影响NO合成机制方面，各自在子痫前期发病过程中的作用及二者之间的关系。方法：采用酶联免疫吸附实验法(ELISA)分别检测25例正常孕妇(对照组)和35例子痫前期患者(试验组，其中轻度子痫前期15例、重度子痫20例)血清中Apelin及ADMA的水平。结果：① Apelin在实验组患者血清中的浓度高于对照组(P<0.05)，且重度子痫前期组高于轻度子痫前期组。②ADMA在实验组患者血清中的浓度高于对照组(P<0.05)，且重度子痫前期组高于轻度子痫前期。③Apelin和ADMA在子痫前期患者血清中的表达呈正相关,且相关性显著(r=0.77280，P<0.05)。结论：Apelin与ADMA可能在妊娠过程中相互促进表达，影响NO合成导致内皮功能严重损伤，进而加速子痫前期的发生发展。

关键词：子痫前期；Apelin；ADMA

妊娠可以使血压正常的妇女发生高血压，或者加重已存在的高血压。妊高症的特点就是妊娠与血压升高同时存在，这种疾病对母婴的健康有很大危害。该组疾病包括几种类型，分别为妊娠期高血压、子痫前期、子痫、慢性高血压并发子痫前期，妊娠合并慢性高血压，其中子痫前期是妊娠期独有的疾病。妊娠20周以后子痫多发，主要临床表现为高血压、水肿、蛋白尿，可伴有脑、肾脏、肝脏、心血管等多器官功能的损害或衰竭，严重者可出现抽搐、昏迷、视力模糊、甚至死亡。目前，子痫前期的发病机制尚未完全定论，国内外学者对其病因的研究主要集中在“两阶段”学说，其分别为胎盘形成不良学说与胎盘氧化应激学说[1]。研究发现，胎盘缺血缺氧后可释放一系列因子，这些因子使血管内皮细胞的激活和损伤，导致血管内皮细胞受损而引起血管痉挛，而全身小动脉痉挛是子痫前期的基本病理生理变化。由此我们可以认为系统性的血管内皮受损是子痫前期病理生理机制重要枢纽。一氧化氮(NO)作为评判内皮功能的重要因子之一，其表达的减少以及活性的降低与子痫前期的病理过程息息相关[2]。Apelin是新发现血管活性肽，AMDA是内源性NOS抑制剂，都是参与调节L-精氨酸/eNOS/NO通路而影响子痫前期的发病。Apelin具有正性肌力、降低血压、调节胰岛素抵抗、调节脉管系统稳态等[3～6]作用。本实验的目的是通过检测子痫前期患者血清中Apelin及ADMA的浓度，探讨从影响NO合成机制方面，其各自在子痫前期发病过程中的作用及二者之间关系，可能会为子痫前期的病因开辟新的道路，给疾病的预防和治疗提供新的靶点。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014-05～2014-11在佳木斯大学附属第一医院及佳木斯妇幼保健院产科住院的60位孕妇作为研究对象。收集35例子痫前期患者，其中15例为轻度子痫前期患者，20例为重度子痫前期患者。随机选取同时期妊娠晚期且血压正常的25例孕妇作为病例对照组。子痫前期的诊断标准参照《妇产科学》第8版[7]。入选标准：1)所有病例都为单胎初产且行剖宫产终止妊娠；2)既往无高血压、心脏病、糖尿病、甲亢及肝肾疾病史；3)无其他妊娠合并症及并发症，无急、慢性感染及自身免疫性疾病；4)无输血及烟酒嗜好。

1.2 标本采集

要求所有对象均空腹8～10h，后抽取其肘静脉血，至干燥的无菌试管中。室温下放置血标本30min，后置其于4℃、2500r/min下离心15min，分离出血清，将血清保存于-70℃的冰箱中冻存以待检测。

1.3 实验方法

采用ELISA法检测实验对象血清中Apelin及ADMA的浓度，Apelin试剂及ADMA试剂均来自武汉三鹰生物有限公司，具体步骤严格按照说明书上操作。

1.4 统计学方法

2 结果

Apelin与ADMA在子痫前期组血清中的表达均高于正常对照组(P<0.05)，且重度子痫前期组Apelin与ADMA的表达均高于轻度子痫前期组(P<0.05)，见表1，图1～2。

表1　各组孕妇血清ADMA和Apelin水平比较

图1　各组患者血清中ADMA浓度(μmol/L)

图2　各组患者血清中Apelin浓度(ng/mL)

经Pearson进行相关分析：Apelin与ADMA在实验组和对照组血清中的表达呈正相关，且相关性显著，具有统计学意义(r=0.77280，P<0.05)。

3讨论

3.1Apelin及ADMA的生物学特性

Apelin由内皮细胞和脂肪细胞分泌的，是1998年由Tatemoto等[8]应用反向药理学方法，凭借“孤儿受体策略”，从牛的胃中分离并提纯。1999～2003年有研究表明[9～11]人Apelin的原前体肽(preproapelin)均由77个氨基酸组成。现存核酸数据库中分析显示，人 Apelin基因由2个内含子和3个外显子组成，它的mRNA 长度为2673bp，位于染色体Xq25-26.1上。2003年Medhurst等[12]发现人的中枢神经系统中有Apelin mRNA 的表达，在乳腺、肺、心脏、肾、胎盘中也有表达，且表达最多的是胎盘。研究表明 Apelin 是一种新发现的血管活性肽，是由内皮细胞分泌，与其受体结合后激活L-精氨酸/eNOS/NO途径，活化内皮细胞eNOS，刺激产生NO，从而起到调节血压作用；通过参与胰岛素抵抗、影响脂肪细胞的代谢参与代谢平衡；还能通过调节脂肪细胞进程预防动脉粥样硬化的发生；Apelin/APJ系统能调节肾小球的滤过功能、肾脏的血流及维护肾小管的功能。

不对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)是一种内源性一氧化氮合成酶(nitric oxide syn1hetase，N0S)抑制剂，是甲基化蛋白质精氨酸残基产生的一种蛋白代谢产物。ADMA产生的主要部位包括血管内皮细胞、肝脏、肾脏、脑组织等，还包括人体其他多种细胞和组织。研究表明，ADMA作为一种内源性NOS(一氧化氮合酶抑制剂)，通过调节L-精氨酸/eNOS/NO通路，影响NO的合成起到调节血压作用；糖耐量异常患者血浆中ADMA高于正常值，ADMA和胰岛素抵抗有关，从而参与糖尿病的发生及发展；此外，ADMA调节氧化应激反应进而影响肾脏及心血管的疾病。

3.2Apelin及ADMA在子痫前期患者血清中的表达及意义

本研究显示，Apelin在子痫前期患者血清中的浓度明显高于对照组，且随着病情加重而增高，差异具有统计学意义。研究表明，Apelin是最新发现的舒血管物质之一，与AngⅡ受体结构相似，参与血压的调控[13]。在内皮受损情况下，Apelin通过激活PKC使其磷酸化引起血管平滑肌收缩；在血管内皮完整的情况下，使血管内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活，刺激NO的产生及释放，起到舒张血管作用。在Apelin的作用下，血液循环中血管紧张素-1受体自身抗体(AT1-AA)激活NADPH诱导ROS产生导致血管内皮细胞功能障碍。此外，表达在血管组织中 Apelin 还介导氧化应激损伤血管内皮细胞。研究发现，在胰岛素抵抗和高胰岛素血症相关的肥胖症患者中血清Apelin水平显著增加。Apelin通过参与脂质代谢调节，使前列腺素E2和NO的合成减少，血引起管内皮细胞功能障碍。此外，Apelin与免疫调节具有一定关系，它能够一定程度上调节免疫炎症因子白细胞介素-4、白细胞介素-2、干扰素-γ的产生及T，B淋巴细胞的胆碱能活性。炎症介质以及由此产生的氧化应激使血管内皮损伤进而发生子痫前期。本研究还显示，ADMA在子痫前期患者血清中的浓度明显高于对照组，且随着病情加重而增高，差异具有统计学意义。经过大量的动物和人体试验表明ADMA与高血压病、肾脏及心血管及其它疾病的发生及发展关系密切。近年来，国内外文献报道均证实和正常孕妇比子痫前期孕妇血液中ADMA浓度升高，甚至在患者出现临床症状之前外周血中ADMA的水平已经升高[14]。ADMA 可导致NOS 活性解耦联，ADMA竞争性与NOS活性底物结合导致NO合成减少。而DDAH是ADMA的降解酶，ADMA的含量高低主要受其降解酶DDAH的调控。研究已证实氧化应激、炎症反应等一系列病理生理改变可引起DDAH表达减少和(或)活性减弱，导致ADMA水平升高，从而促进内皮功能失调，最终导致系统性血管阻力增加，出现高血压。DDAH是能够增加腺苷3'，5'-环腺苷酸(cAMP)的依赖的蛋白激酶(PKA)磷酸化过程，eNOS的下调PKA的诱导使CREB磷酸化消除。DDAH的表达降低，PKA的活化降低，可能会影响ERK1/2-CREB信号通路，从而eNOS的下调，使NO合成减少，导致内皮功能紊乱。本实验结果显示：Apelin及ADMA在研究对象血清中的表达呈正相关，且相关性显著。有研究证明，大鼠在高浓度ADMA作用下内皮功能遭到破坏，在此种病理条件下，Apelin与平滑肌上APJ受体结合引起强烈缩血管作用，使大鼠血压升高[14]。本实验结果与既往研究相符合。

综上所述Apelin与ADMA均与子痫前期的发生、发展相关，只是两者之间具体的相互作用机制有待进一步研究，因此通过对孕妇血清中两者的检测，可为子痫前期的早期诊断、预测病情及早期治疗提供新的路径。通过对影响Apelin及ADMA活性的酶进行研究，分析其作用机制从而活化或灭活Apelin及ADMA蛋白，可能为某些临床疾病提供新的治疗思路。

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The expressions of Apelin and ADMA in serum of patients with pre-eclampsia and their correlationship

LÜJing-yuan,ZHANGYuan-tong

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003 ,China)

Abstract:Objective: By detecting the expressions of Apelin and ADMA among patients with preeclampsia, to research their effects on the mechanism of NO synthesis, and their role on the pathogenesis of preeclampsia, and the relationship between them. Methods: enzyme-linked immunosorbent experiment method (ELISA) was applied to detect Apelin and ADMA levels in serum of 25 normal pregnant women (control group) and 35 patients with preeclampsia (treatment group, 15 cases with mild preeclampsia, 20 cases of severe preeclampsia). Results:①The concentration of Apelin in serum of patients in experimental group was higher than that in control group(P<0.05), and the concentration in severe preeclampsia group was higher than that in mild preeclampsia group.②ADMA concentration in serum of patients in the experimental group was higher than that in the control group(P<0.05), and the concentration in severe preeclampsia group was higher than that in mild preeclampsia.③The expressions of Apelin and ADMA in patients with preeclampsia were positively and significantly correlated4(r=0.77280,P<0.05). Conclusion: Apelin and ADMA may promote each other to express in the process of pregnancy, which lead to serious damage to endothelial function by influencing the NO synthesis so as to accelerate the development of preeclampsia.

Key words:preeclampsia;Apelin;ADMA

(收稿日期：2014-12-03)

中图分类号：R714.24+5

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2016)01-0104-02

作者简介:吕敬媛(1968～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，副主任医师，硕士研究生导师。通讯作者:张园彤(1988～)女，辽宁丹东人，在读硕士研究生。E-mail:839615067@qq.com。