润燥合剂治疗去势雄兔干眼模型实验研究

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(南京中医药大学，江苏 南京 210029)

润燥合剂治疗去势雄兔干眼模型实验研究

刘莉，何慧琴*

(南京中医药大学，江苏 南京 210029)

目的：观察去势雄兔前后泪液分泌量的改变及泪膜稳定性的变化，比较润燥合剂与必嗽平治疗去势雄兔干眼症疗效上的差异。方法：取健康雄兔18只，随机分为空白对照组、必嗽平组和润燥合剂组,每组6只。空白对照组和治疗组制作成干眼模型。分别于去势前和去势后第1、2、3、4、6、8周检查造模组的泪液分泌量、泪膜破裂时间(BUT)情况。必嗽平组与润燥合剂组在去势4周后开始给予药物治疗。结果：去势2周后，造模雄兔出现干眼症状；去势6周后，必嗽平组和润燥合剂组2组雄兔泪液分泌量比较于治疗前明显增加，泪膜破裂时间延长；去势8周后,统计表明润燥合剂组雄兔治疗效果优于必嗽平组，必嗽平组与润燥合剂组组间差异有统计学意义(Plt;0.01)。结论：润燥合剂和必嗽平都能够缓解干眼症状，但润燥合剂对该病因引起的干眼针对性更强，疗效优于必嗽平。

干眼模型;润燥合剂;雄兔平;鬼针草;赤芍;川芎;地龙;茯苓

干眼症是由于泪液质和量的异常或泪液动力学的异常而引起的泪膜不稳定，并伴有眼部不适的眼表疾病。临床研究发现，由于激素水平紊乱而导致干眼症的发病率也在逐年升高。本研究的主要目的是观察家兔去睾丸后，随着激素水平的下降而引发干眼症的病理变化及润燥合剂的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组方法 取健康成年雄兔18只，雄性，体质量(2.0±0.5)kg，喂养于无特殊病菌的恒温条件下(由南京中医药大学动物实验中心提供)。将18只雄兔随机分成3组，空白对照组6只、润燥合剂组6只、必嗽平组6只。

1.2 药品制剂及主要实验仪器 20%乌拉坦、4%甲醛(南京中医药大学实验中心提供)、2%利多卡因、2%荧光素钠、润燥合剂(组成鬼针草、赤芍、川芎、地龙、茯苓、山药、黄精7味药)、西药必嗽平(由南京市中医院提供)。裂隙灯、常规HE染色组织学研究仪器、日本BX-40显微镜、SSOOPP半自动生化分析仪、2035切片机、玻璃棒、2.5 mL注射器、102型定性滤纸。

1.3 动物模型的制作 除正常组外，其余家兔用20%的乌拉坦(5 mL/kg)沿耳缘静脉注射全身麻醉，并加用2%利多卡因局麻后固定于兔架上，先后将双侧睾丸挤入阴囊，且同时捏紧，勿使其滑入体内，在阴囊上切一小口，尽力挤出睾丸，结扎精索静脉及输精管，切除睾丸及附睾，连续缝合阴囊皮肤后局部涂碘酊预防感染。喂食高脂饲料，同时减少喂水。

1.4 治疗方法 润燥合剂组与必嗽平组在去势4周后开始给药。2组雄兔每次给药剂量根据雄兔体质量的比率(1 mL/kg)灌肠给药，每天给药1次，连续给药1个月。

1.5 检查方法和标本采集 实验雄兔均由同1人检查，每次检查时间、地点、照明亮度、湿度及温度相同，分别于去势前与去势后1、2、3、4、6、8周行Schirmer I试验、泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素染色检查。Schirmer I试验方法用102型定性滤纸(35 mm×6 mm)，前段5 mm反折置于下眼睑颞侧结膜囊内,检测记录5 min后试纸泪液浸润的长度(不包括反折)。角膜荧光素染色:用玻璃棒蘸荧光素滴于兔下眼结膜囊内，瞬目后于裂隙灯下观察角膜上皮的染色情况。泪膜破裂时间检测(BUT):用玻璃棒蘸荧光素滴于兔下眼结膜囊内，瞬目后于裂隙灯下记录从最后1次瞬目后睁眼至角膜第1个黑斑出现的时间。饲养8周后检查造模组家兔泪液分泌量、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色情况，检查后对雄兔行耳静脉推注空气处死，立即取其泪腺、角膜浸泡于4%甲醛液中,常规石蜡切片及HE和PAS染色，然后在光学显微镜下观察角膜上皮变化。

2 结果

2.1 泪液分泌量的检查及泪膜破裂时间测定 见表1，表2。

表1 4组雄兔Shirmer I试验试纸浸湿长度测定比较 mm

注：与空白对照组比较，##Plt;0.01；与必嗽平组比较，△Plt;0.05。

表2 4组雄兔泪膜破裂时间测定比较 mm

注：与空白对照组比较，##Plt;0.01；与必嗽平组比较，△Plt;0.05。

从上述实验数据中发现,去势2周后，模型组雄兔泪液分泌量及泪膜破裂时间明显低于正常组,模型组去势前与去势2周后比较有统计学意义(Plt;0.01)。空白对照组去势6、8周泪流量与BUT无明显改善；去势4周开始给药至6周后，润燥合剂组与必嗽平组雄兔泪液分泌量及泪膜破裂时间均比较于治疗前有所好转；润燥合剂组与必嗽平组组间泪液分泌量和BUT检查的差异分别有统计学意义。去势8周后，治疗组泪液分泌量及泪膜破裂时间与去势前差异明显缩小，润燥合剂组与必嗽平组组间差异有统计学意义。

2.2 病理学观察 空白对照组角膜上皮层细胞增生，排列紊乱，各层细胞轻度水肿，基底层细胞增生变厚；治疗组角膜上皮层细胞和基底层细胞轻度增生，排列尚整齐。

3 讨论

干眼症是临床上常见的眼表疾病之一。Krenzer等[1]研究表明，雄激素降低是主副泪腺分泌功能降低的主要因素，激素调控分泌泪液的腺体和睑板腺功能。研究[2]发现，泪腺上皮细胞为雄激素的靶细胞，雄激素可使泪腺细胞合成和分泌小片显著增加，促进IgA抗体在泪腺组织中聚集。罗丰年等[3]在相关动物实验研究中证明，睾酮对泪腺分泌有调节作用，泪腺组织中存有睾酮受体，这种受体在泪腺分泌泪液的功能中起到一定的调节作用。中医的《五轮学说》中认为胞睑对应脏腑为脾胃，脾胃湿热，气机不利，运化功能失调，津液不能上濡胞睑而蕴湿成痰，湿滞热蒸化瘀，且肝开窍于目，肝主疏泄，肝主藏血，肾藏精，精血同源，如肝血充沛，肝气调达，则能运行血液上达于目，滋养濡润目珠，因此眼部的营养与肝肾两脏也有关。润燥合剂方以活血化瘀，祛湿化痰，补益肝肾为主要治疗原则。方中君药鬼针草又名婆婆针，除了治疗疟疾、腹泻、痢疾等，鬼针草还可有引起“流泪”的不良反应[4]。鬼针草中植物碱能够增强泪腺与副泪腺肌上皮细胞的收缩功能，促进腺胞内泪液的排空，从而增加泪液的分泌量。临床研究[5-6]也表明鬼针草是一种植物雄激素，可明显改善干眼的症状；赤芍、川芎同入肝经，辅助鬼针草活血化瘀；茯苓味甘淡平，以健脾利水祛湿为主；淮山药味甘平，以补益脾肾，益气养阴为主，并同黄精助以茯苓健脾化痰祛湿的功效；地龙具有清邪热、通经络的作用。本实验结果表明，润燥合剂能够有针对性的改善泪膜的稳定性和角膜上皮的完整性，增加泪液分泌量。笔者在治疗过程中发现，药物治疗能最大程度上的缓解干眼症状，但达不到完全治愈效果。对于干眼症的治疗还需进一步深入研究。

[1]Krenzer KL,Dana MR,Uilman MD,et al.Effect of androgen deficiency on the human meibomian gland and ocular surface[J].Clin Endocriaol Metab,2000,85:4874-4882.

[2]刘超,张振华,耿燕.去势雄兔干眼症模型泪腺组织NFKBp65亚基及NO2表达[J].齐鲁医学杂志,2009,24(1):43-44.

[3]罗丰年,张汗承,孙叙清.去势雄兔泪液分泌及泪膜稳定性改变[J].中华眼科杂志,2001,37(6):458-459.

[4]江苏新医学院.中医药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1997:694.

[5]王黎.鬼针草雾化治疗干眼症的临床研究[D].南京:南京中医药大学,2011.

[6]李桥,施伟,王育良,等.鬼针草治疗局部滴用阿托品的兔干眼疗效评价[J].江苏中医药,2009,41(5):74-75.

R285.5

A

1007-4813(2013)03-0396-02

刘 莉(1984-)，女，硕士。研究方向：干眼症。

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何慧琴，女，主任医师，硕士研究生导师,E-mail:178270133@qq.com。

2013-02-22)