顶空气相色谱法测定阿齐沙坦酯原料药中有机残留溶剂的残留量*

2013-04-18王家明

天津药学 2013年4期

苏旭，王家明

(1.天津市中心妇产科医院，天津 300100； 2.工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457)

阿齐沙坦酯(azilsartan medoxomil，TAK-491)，是由日本武田公司开发的新一代选择性 AT1亚型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，为阿齐沙坦(azilsartan)的前药，临床前和临床研究证实其有平稳持久的抗高血压作用。 2011年2月美国FDA批准阿齐沙坦酯(商品名为Edarbi)用于治疗成人高血压。临床前研究显示，阿齐沙坦酯作为新一代双重功能ARBs不仅拮抗血管紧张素Ⅱ的1型受体(AT1受体)，还可能通过多种机制降低心血管疾病及糖尿病的风险[1]。在产品生产过程中，需要用到甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯5种有机溶剂，这些溶剂会对人体健康造成危害，在生产过程中完全去除比较困难，但必须确保产品中的这些溶剂残留量是人体可以接受的，《中国药典》和ICH对各类溶剂残留量有严格的规定[2, 3]。

本实验首次建立了毛细管柱顶空气相色谱法，测定阿齐沙坦酯工艺中用到的5种溶剂，并进行了方法学研究。结果显示，该方法准确，灵敏度高，可用于阿齐沙坦酯原料药中残留溶剂的检测。

1 仪器与试药

HP 6890N 气相色谱仪(Agilent公司)，7694E 顶空进样器(Agilent公司)，Agilent气相工作站(Agilent公司)。甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均购买于天津康科德试剂公司。阿齐沙坦酯原料药(中央药业提供，批号20121203、20121204、20121205)，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性 DB-624毛细管柱(30.0 m×0.53 mm×3.00 μm)(6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷共聚物)，50 ℃维持10 min，载气N2，流速4.0 ml/min。7694E顶空瓶进样器，进样体积1 μl，进样口温度为200 ℃，分流比为5∶1；顶空瓶温度80 ℃，定量环温度90 ℃，传输管线温度100 ℃/瓶，加热时间20 min，顶空瓶体积10 ml，加入被测液体1 ml，加盖密封。火焰离子化检测器(FID)温度250 ℃，氢气流速 40 ml/min，空气流速 400 ml/min，尾吹30 ml/min。

2.2溶液制备

2.2.1对照储备溶液的配制分别精密移取甲醇71 μl、乙醇119 μl、异丙醇119 μl、二氯甲烷9 μl和乙酸乙酯104 μl到装有适量水的50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

2.2.2对照溶液的配制吸取上述对照储备溶液1 ml置25 ml量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。残留限度见表1。

表1 溶剂残留限度表

2.3空白溶剂试验取3 ml水置顶空瓶中，加盖密封，顶空进样测定，记录色谱图。结果表明：空白溶剂对甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的测定不干扰。色谱图见图1。

2.4专属性试验精密量取上述对照溶液，按上述色谱条件进样测定，出样顺序：甲醇(RT=2.670)、乙醇(RT=3.381)、异丙醇(RT=4.020)、二氯甲烷(RT=4.489)、乙酸乙酯(RT=6.950)。5个成分之间分离度均大于3.0，且理论塔板数均大于10 000，对称性好，色谱图见图1。

1. 甲醇 2. 乙醇 3. 异丙醇 4. 二氯甲烷 5. 乙酸乙酯

2.5检测限试验分别精密移取甲醇70 μl、乙醇20 μl、异丙醇20 μl、二氯甲烷3 μl和乙酸乙酯6.8 μl到装有适量水的50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀；精密量取此液10 μl置25 ml量瓶中，用水稀释到刻度。在本试验条件下，各色谱峰响应值约为基线噪音的3倍。甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯的最低检测浓度分别为0.4435、0.1264、0.1256、0.0318和0.048 96 μg/ml。

2.6线性关系测定分别移取对照贮备液0.4、0.8、1.0、1.2和1.8 ml置25 ml量瓶中，用水稀释到刻度，混匀，配成不同浓度的测试溶液；分别取各溶液3 ml置10 ml顶空瓶中，加盖密封，依次进样测定。分别以色谱峰面积(Y)为纵坐标，以各自的浓度X(mg/ml)为横坐标，进行线性回归。结果见表2。

2.7精密度试验取对照溶液3 ml置10 ml顶空瓶中，加盖密封。依次连续进样测定，以峰面积计算，对照溶液中甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯峰面积的RSD分别为1.93%、2.83%、3.94%、8.05%和4.29%。

2.8稳定性试验分别于0、2、6、8和24 h取标准溶液3 ml置10 ml顶空瓶中，加盖密封，顶空进样测定，记录色谱图。计算各溶剂峰面积的RSD。甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷和乙酸乙酯色谱峰积分面积的RSD分别为2.14%、3.76%、5.19%、18.89%和7.64%，表明甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯对照溶液在24 h内基本稳定，二氯甲烷对照溶液在24 h内不稳定。

表2 线性关系试验结果

2.9回收率试验分别移取对照贮备液0.8、1.0和1.2 ml到25 ml量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，配成三种浓度的回收率溶液(80%、100%和120%)。取20121203批样品45 mg共9份，精密称定，分别加入上述溶液3 ml，密封后混匀，进行测定。结果见表3。甲醇的平均回收率为103.96%，RSD为2.66%；乙醇的平均回收率为97.51%，RSD为3.71%；异丙醇的平均回收率为101.19%，RSD为4.75%；二氯甲烷的平均回收率为95.06%，RSD为6.99%；乙酸乙酯的平均回收率为97.50%，RSD为6.18%。

2.10样品测定分别取20121203、20121204和20121205批样品，精密称取45 mg到顶空瓶中，加水3 ml溶解，加盖密封，按上述色谱条件以外标法进行测定。结果见表4。