HPLC法测定牛黄上清胶囊中黄芩苷含量*

薛士梅

(天津市滨海新区大港中医医院， 天津 300270 )

牛黄上清胶囊是由人工牛黄、薄荷、黄连、黄柏、黄芩等19味药材制成的中药制剂，具有清热泻火、散风止痛的功效，用于热毒内盛、风火上攻所致的头痛眩晕、目赤耳鸣、咽喉肿痛、口舌生疮。在国家标准中未有该项定量分析，为了有效控制产品质量，本文采用HPLC法对黄芩苷进行含量测定，以作为该制的质量控制指标。

1 仪器与试药

LC-2010C高效液相色谱仪(日本岛津)，LC-Solution色谱仪工作站。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所， 批号110715-201016，含量94.0%)；甲醇、磷酸均为色谱纯，水为纯化水。牛黄上清胶囊(江西天施康弋阳制药有限公司，批号12030902、12060801、12070502)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相甲醇-0.2%磷酸溶液(48∶52)；检测波长280 nm；流速1.0 ml/min；柱温35 ℃；进样量10 μl。分离度不小于1.5，理论板数按黄芩苷峰计算不低于5000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品10.35 mg，置100 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,作为对照品贮备液(97.3 μg/ml)。精密量取贮备液10 ml,置25 ml量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,即得浓度为38.9 μg/ml的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品10粒的内容物混匀，取约0.38 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml,称定重量，超声处理(功率150 W，频率40 kHz)30 min，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀,滤过，取续滤液即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备 取除黄芩外按处方量配制的样品，按供试品溶液制备的方法制成阴性对照溶液。

2.2.4阴性对照试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液10 μl注入色谱仪，记录色谱图。结果阴性对照溶液在黄芩苷峰位置上没有干扰峰。见图1。

1.黄芩苷

2.3线性关系考查 取黄芩苷对照品贮备液(97.3 μg/ml)，分别精密量取1、2、3、4、5和6 ml，置10 ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀。按“2.1”项下色谱条件测定，记录各自峰面积。以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得回归方程为Y=40 235.7X-10 435.6(r=0.999 96)。结果表明黄芩苷在9.73～58.38 μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好。

2.4精密度试验 取按“2.2.1”项下制备的对照品溶液，重复进样6次，测定黄芩苷峰面积，其RSD为0.03%。

2.5重现性试验 取同一批样品(批号12030902)6份，按“2.2.2”项下方法制备，依法测定。结果黄芩苷含量为2.115 mg/粒，RSD为0.3%，表明本法重现性良好。

2．6稳定性试验 取同一批样品(批号12030902)溶液，分别于0、2、4、8、12和24 h测定，其黄芩苷峰面积RSD为0.7%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2．7回收率试验 精密称取同一批已知含量的样品(批号12030902，含量2.115 mg/粒)约0.19 g，共6份，分别精密加入1.2161 mg/ml黄芩苷对照品溶液25 ml，按“2.2.2”项下方法制备所需溶液，依法测定，计算黄芩苷的平均回收率为99.43%，RSD为0.8%。见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2．8样品测定 分别取3批供试品，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。精密量取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,分别注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算即得。见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1黄芩苷在《中国药典》测定方法中检测波长分别为277和280 nm[1]，本品于277 nm波长处测定，其分离效果及峰形不好，选用280 nm波长处测定取得了较好的分离效果，与《中国药典》中黄芩药材的HPLC法测定波长相同。

3.2本实验对提取溶剂及提取时间进行了考查，以纯甲醇、50%甲醇和70%甲醇作溶剂，超声提取30 min，结果表明70%甲醇提取效果较好[2]。又以70%甲醇超声提取20、30和40 min，结果表明超声30 min样品中黄芩苷含量与超声40 min提取结果相当。故最终选择70%甲醇超声30 min作为提取条件，此法提取成分含量较高，且操作简便。

1 中国药典[S].一部.2010：282，487

2 张囡，陈双璐，钱宇坤.HPLC法测定清肺丸中黄芩苷和柚皮苷含量[J].天津药学，2011，23(6)：6