应用鱼油预防大鼠慢性放射性肠炎的研究

薛 华，杨 阳，黄孝伦，邓绍平

(四川省医学科学院·四川省人民医院 a.细胞移植中心，b.呼吸内科，四川 成都 610072)

慢性放射性肠炎有较高的致死率和致残率，目前还缺乏有效的预防措施［1］。进行性闭塞性动脉内膜炎和间质纤维化是慢性放射性肠炎的主要病理特征［2］。鱼油具有维护血管正常功能的作用［3］。我们拟从保护肠壁血管免受放射线损伤的角度，来寻求慢性放射性肠炎的防治措施，于2010年4月至2011年5月进行了实验研究，观察了鱼油对慢性放射性肠炎的预防作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 雄性SD大鼠30只(苏州大学实验动物中心提供)，体重180～200 g，标准饲料喂养，适应环境1周后用于实验。采用随机数字表法将大鼠分为3组，每组10只。实验组放射前7天每天定时予鱼油(0.6 ml/100 g)灌胃1次。对照组放射前7天每天定时予生理盐水(0.6 ml/100 g)灌胃1次。正常组不予放射，同期予生理盐水(0.6 ml/100 g)灌胃7天。

1.2 实验材料 PRIMUS-M型直线加速器(德国西门子公司);SIMULIX-HO型模拟定位机(荷兰核通公司);鱼油(Sigma公司);大鼠白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，ELISA 试剂盒和内毒素ELISA试剂盒(RB公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 照射前准备 2%戊巴比妥钠溶液(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。将大鼠仰卧，四肢展开，固定于木板上。模拟机下定位照射野:上至剑突，下至耻骨联合，侧至腹壁，其余部位用铅块遮挡屏蔽。3组大鼠都给予相同照射前准备处理。

1.3.2 照射条件 直线加速器7 MeV电子线，放射源到皮肤距离100 cm，照射野面积5.5 cm×5.5 cm，垂直单次照射，每只大鼠照射剂量10 Gy。照射后自由进食。实验组和对照组大鼠给予照射，正常组大鼠不给予照射。

1.3.3 检测方法 放射8周后处死大鼠，无菌操作获取标本。左侧髂总动脉采血2 ml，入抗凝管，20℃放置2小时，离心(5000 rpm，5 min)，取上层血浆，-70℃保存待测。切取距回盲部5～10 cm间肠段，10%福尔马林液保存，留作病理观察。ELISA法测定血浆IL-1、IL-6、TNF-α和内毒素含量。按试剂盒说明进行。

1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差表示，多组间方差齐性分析采用F检验，两组间差异性比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组大鼠肠壁病理改变情况 正常组大鼠肠绒毛结构茂盛，可见大量杯状细胞，黏膜下层无淋巴细胞浸润(图1)。对照组大鼠肠黏膜变薄，局部肠绒毛消失，腺体扁平，杯状细胞明显减少，黏膜下层大量淋巴细胞浸润，部分形成生发中心样结构(图2)。实验组大鼠肠黏膜厚度基本正常，肠绒毛稍矮于正常组，杯状细胞减少不明显，黏膜下层少量淋巴细胞浸润(图3)。

图1 正常组大鼠肠黏膜病理(HE×200);图2 对照组大鼠肠黏膜病理(HE×200);图3 实验组大鼠肠黏膜病理(HE×200)

2.2 3组大鼠血浆 IL-1、IL-6、TNF-α及内毒素含量比较 对照组大鼠血浆IL-1、IL-6、TNF-α及内毒素含量明显高于正常组和实验组(均P＜0.01)。实验组大鼠血浆IL-1含量约为对照组的1/2，IL-6含量约为其1/3，TNF-α含量约为其1/4，内毒素含量约为其1/2。3组血浆 IL-1、IL-6、TNF-α及内毒素含量比较见表1。

表1 3组血浆IL-1、IL-6、TNF-α及内毒素含量比较 (pg/ml)

3 讨论

进行性血管炎导致微动脉和小动脉闭塞，是慢性放射性肠炎的病理学基础［2］。其进行性发展导致肠壁缺血，黏膜萎缩变薄，出现肠狭窄、梗阻、穿孔和瘘等临床表现［4］。本实验发现放射8周后对照组大鼠出现肠黏膜变薄，局部肠绒毛消失等慢性放射性肠炎表现，与文献报道一致［5］。鱼油组大鼠肠黏膜厚度基本正常，提示鱼油可减轻放射线对肠壁的损伤，对慢性放射性肠炎有预防作用。

放射线导致肠壁损伤，肠屏障功能障碍，出现细菌易位，刺激免疫细胞释放过量 IL-1、IL-6和TNF-α等炎性介质，使肠壁血管内皮细胞活化，促发慢性炎症反应，导致肠壁动脉闭塞性血管炎，血管炎再次加重肠壁损伤，形成肠屏障功能障碍—细菌移位—炎症反应—血管炎—肠屏障功能障碍恶性循环，进行性发展，最终导致肠狭窄、梗阻、穿孔和瘘等慢性放射性肠炎临床病变［6～8］。本实验发现，对照组大鼠血浆内毒素、IL-1、IL-6和TNF-α含量明显高于正常组大鼠，印证了细菌易位和炎症反应是慢性放射性肠炎的基础病理生理过程。肠壁血管内皮细胞是慢性放射性肠炎病程发展的重要参与者［5］。我们推测保护内皮细胞正常功能，降低炎症反应，减轻血管炎的措施可能阻断慢性放射性肠炎的病程。鱼油的主要成分二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)具有对抗有害因素刺激内皮细胞活化［9］，减少内皮细胞炎性介质合成［10］，维护血管正常功能的作用［3］，我们曾揭示其机制与鱼油阻断内皮细胞细胞内信号传导有关［11］。本实验发现，鱼油组大鼠血浆内毒素含量明显低于对照组，证实鱼油有维护受放射大鼠肠屏障功能，减少细菌易位的作用。鱼油组大鼠血浆 IL-1、IL-6和TNF-α含量明显低于对照组，证实鱼油对受放射大鼠有抗炎作用，这可能得益于其对血管内皮细胞的保护作用。

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