不同剂量叶酸对丙戊酸钠致畸作用的干预效果研究

李云霞 郑丽娜 阚淑娟 杨建春

我国癫痫的患病率为4% ～6%，25%的癫痫患者是生育年龄的女性，每年有0.3% ～0.4%的新生儿来自患有癫痫的母亲［1］。癫痫孕妇的后代畸形发生率高于一般女性的2～3倍，而抗癫痫药是造成胎儿畸形的主要原因［2］。丙戊酸钠(VPA)作为传统的抗癫痫药物，对妊娠妇女有一定的致畸危险性。国外多数研究认为，VPA可拮抗叶酸(FA)代谢，使血浆红细胞及脑脊液的叶酸盐水平降低。临床研究证实，较低的FA浓度是胎儿畸形的危险因素［3］，随着FA剂量的增多，神经管等畸形危险性下降［4］。2010年我国卫生部公布的《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》中规定:“按每人每天服用4 mg剂量向高危待孕女性(服用抗癫痫药者)发放FA，保证孕前至孕早期3个月服用量”。本实验以小鼠为研究对象，观察低、中、高剂量叶酸拮抗VPA致畸作用的差异性，从而为临床上服用VPA控制癫痫症状的生育期女性需补充大剂量FA预防胎儿畸形的说法提供动物实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与材料 SPF级昆明种小鼠，雌雄比例2∶1，雌性体重(21.7 ±1.8)g;雄性体重(22.5 ±1.9)g，北京华阜康生物科技股份有限公司实验动物中心提供，合格证号:SCXK(京)2009-0004。每笼15只(雌10只，雄5只)。自然光照，自由饮水进食，适应性饲养1周。FA(北京北大药业有限公司，0.4 mg/片，批号:S090528);VPA(湖南省湘中制药有限公司，每片200 mg/片，批号:080607);上述所用药物均用蒸馏水配制成所需浓度，剂量相当于成人临床等效剂量的10倍(成人按60 kg)。

1.2 动物分组及给药 实验共设5组，每组30只，雌性20只，雄性10只。分别为:(1)空白对照组:每天灌胃蒸馏水，容量为10 ml/kg体重;(2)VPA组:每天200 mg/kg VPA经口灌胃;(3)VPA+FA低剂量组:每天VPA经口灌胃剂量同(2)，同时添加0.07 mg/kg FA;(4)VPA+FA中剂量组:每天VPA经口灌胃剂量同(2)，同时添加0.35 mg/kg FA;(5)VPA+FA高剂量组:每天VPA经口灌胃剂量同(2)，同时添加0.7 mg/kg FA［5组给药剂量均相当于成人等效剂量的10倍(成人按60 kg)］。上述5组小鼠于分组后次日，雌性鼠开始灌胃各药物，按上述方法给药，直至妊娠结束。

1.3 观察指标 每日清晨定时检查雌鼠阴栓，以阴栓出现日为妊娠零天。检出阴道栓的雌鼠单笼饲养，并密切观察腹部增大情况、妊娠期体重，有否流产、死胎、畸形及活胎数等指标。对未分娩者于妊娠第22天处死，检查子宫内胚胎数及其发育状况。

2 结果

2.1 对孕鼠平均体重的影响 孕鼠于妊娠第12、18天各称体重1次，以观察药物对孕鼠平均体重的影响。妊娠第12天时孕鼠平均体重，与正常对照组比较，VPA组、VPA+FA低剂量组显著降低(P＜0.05);与VPA组比较，VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组显著升高(P＜0.01);与VPA+FA高剂量组比较，VPA+FA低剂量组显著降低(P ＜0.05)，其余各组差异无统计学意义(P＞0.05)。妊娠第18天时孕鼠平均体重，与正常对照组比较，VPA组、VPA+FA低剂量组显著降低(P＜0.01);与VPA组比较，VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组显著升高(P＜0.01);与VPA+FA高剂量组比较，VPA+FA低剂量组、VPA+FA中剂量组显著降低(P ＜0.05)，其余各组差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 药物对孕鼠孕期平均体重的影响±s

表1 药物对孕鼠孕期平均体重的影响±s

注:与对照组比较，*P ＜0.05，#P ＜0.01;与 VPA 组比较，△P ＜0.05，☆P ＜0.01;与 FA 高剂量组比较，▲P ＜0.05，★P ＜0.01

组别 第12天 第18天33.9 ±1.1 43.8 ±1.5 VPA 组(n=15) 29.8 ±1.0# 38.3 ±2.5#VPA+FA 低剂量组(n=18) 30.7 ±1.5＊▲ 39.4 ±1.0#△★VPA+FA 中剂量组(n=18) 33.5 ±1.0☆ 42.9 ±1.0☆▲VPA+FA 高剂量组(n=19) 33.7 ±1.0☆ 43.9 ±1.5对照组(n=20)☆

2.2 对孕鼠活胎率、吸收胎率、死胎率的影响 与对照组比较 ，VPA组、VPA+FA低剂量组活胎率显著降低，死胎率、吸收胎率显著升高(P＜0.01)。与VPA组比较，VPA+FA低剂量组、VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组活胎率显著升高，吸收胎率显著降低(P＜0.01);VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组死胎率显著降低(P＜0.01)。与VPA+FA高剂量组比较，VPA+FA低剂量组活胎率显著降低，死胎率、吸收胎率显著升高(P＜0.01);其余各组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 2。

表2 5药物组对孕鼠活胎率、吸收胎率、死胎率的影响只(%)

2.3 对胎鼠平均体重、致畸作用的影响 与对照组比较，VPA组、VPA+FA低剂量组、VPA+FA中剂量组胎鼠平均体重显著降低(P ＜0.01)，畸形鼠显著升高(P ＜0.05)。与VPA组比较，VPA+FA低剂量组、VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组胎鼠平均体重显著升高(P＜0.05)，VPA+FA中剂量组、VPA+FA高剂量组畸形鼠显著降低(P＜0.01)。与VPA+FA高剂量组比较，VPA+FA低剂量组、VPA+FA中剂量组胎鼠平均体重显著降低(P＜0.01)，畸形鼠显著升高(P＜0.01)，其余各组差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表3。

表3 5组对胎鼠平均体重、致畸的影响

3 讨论

VPA可使孕鼠数、活胎数、孕鼠及胎鼠平均体重减少，仔鼠死胎、吸收胎数目增加，并致胎鼠畸形。FA对VPA的致畸效应具有拮抗作用，并且与剂量相关，高剂量FA对VPA致畸效应的拮抗效应更明显。FA对VPA诱发的小鼠致畸性具有明显拮抗作用的剂量是 0.70 mg·kg－1·d－1。

VPA可干扰FA代谢，癫痫母亲在妊娠期间服用此药，母体及胎儿体内的FA水平将降低，使胎儿发生神经管、心血管、唇裂及尿道等缺陷的概率上升［5］。国外多数研究认为，VPA对FA有拮抗作用，使服用VPA孕妇用药风险增加［6］。本研究表明丙戊酸钠可使孕鼠数、活胎数、孕鼠及胎鼠平均体重减少(P＜0.05)，孕鼠死胎吸收胎数目增加(P ＜0.05)。

FA为细胞生长和分裂所必需的物质，参与体内核酸和氨基酸的合成，并与维生素12共同促进红细胞的增殖和成熟［7］。临床研究表明，FA缺乏与胎儿畸形有关;动物实验发现，FA缺乏的鼠胎发育异常、生长迟缓、神经管扭曲打结、贫血，而补充叶酸后可以促进其生长、减少畸形［7］。妊娠期孕妇新陈代谢活跃，蛋白质合成加速，使FA需要量增加;而妊娠期胃酸分泌减少，肠蠕动减弱使叶酸吸收障碍;加之肾小管再吸收减少，叶酸排泄增加［8］。本研究表明，叶酸对戊酸钠诱发的致畸效应具有拮抗作用，并具与剂量相关，高剂量叶酸能更有效地拮抗VPA的致畸效应。人体既无合成FA的功能，亦无储存FA的功能，主要靠从外界摄取，所以对于服用具有拮抗FA作用的抗癫痫药的孕妇，在孕前和孕早期要补充FA，剂量比非癫痫孕妇(0.4 mg/d)要高，建议为 4 mg/d［9］。

1 欧阳华，刘弋戈.抗癫痫药物不良反应分析.儿科药学，2005，11:57.

2 彭超，杨慧霞.治疗精神疾病类药物对母儿的影响评价.中国实用妇科与产科杂志，2009，8:587-589.

3 中原.抗癫痫药物易致胎儿畸形.医药经济报，2003.6.18第A4版.

4 Werler MM，Shapiro S，Mitohell AA.Periconceptional folic acid exposure and risk of occurrent neuran tube defects.JAMA，1993，269:1257-1261.

5 Hemandez-Diaz S，Werler MM，Walker AM，et al Folicacid antagonists during pregnancy and the risk of birth defect.N Engl J Med，2000，343:1608-1614.

6 Morrell MJ.Folic acid and epiiepsy.Epilepsy Currents，2002，2:31-34.

7 曾艳，褚燕琦，王育琴.抗癫痫药致胎儿畸形的研究进展.药物不良反应杂志，2007，9:305-310.

8 孙绍春.补充叶酸对妊娠期高血压疾病的影响.河北医药，2010，32:2030-2031.

9 Shorvon S.Antiepileptic drug therapy during pregnancy the ne urologists perspective.J Med Genet，2002.39:248-250.