顶空毛细管气相色谱法测定马来酸桂哌齐特中的残留溶剂

魏 莉，姜建国，宋更申

（1.河北省食品药品监督管理局药品审评认证中心，河北 石家庄 050091； 2.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011）

马来酸桂哌齐特（cinepazide maleate）为新一代哌嗪类药物，在欧洲、日本等发达国家应用广泛，已成为治疗心脑血管疾病的一线药物[1]。关于其残留溶剂的研究，尚未见国内文献报道。马来酸桂哌齐特在合成过程中使用了二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶等有机溶剂，本试验根据人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）[2]的指导原则和2005年版《中国药典（二部）》[3]的相关规定，采用顶空气相色谱法，以水为溶剂，同时测定上述4种溶剂。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 6890型气相色谱仪（FID检测器）；Agilent 7694E型顶空进样器；Sartorius BP211D型电子天平。二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均为色谱纯（美国Tedia公司）；试验用水为超纯水；马来酸桂哌齐特（国内某公司，批号分别为 0801001，0801002，0801003）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 HP-FFAP 毛细管柱（30 m ×530 μm，1 μm）；柱温为130℃；FID检测器，检测器温度250℃；分流进样，分流比1∶1，进样口温度200℃；载气为氮气，流速3.5 mL/min；顶空进样，平衡温度90℃，平衡时间30 min，顶空瓶加压时间0.2 min，进样时间1 min，定量环体积1 mL，定量环温度100℃，传输线温度110℃。

2.2 溶液制备

精密称取二氯甲烷60 mg、乙腈41 mg、甲苯 89 mg、吡啶 20 mg，置同一100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5 mL，取无水硫酸钠约1 g，精密称定，置同一20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，即得对照品溶液。取样品约0.5 g，无水硫酸钠1 g，精密称定，置同一20 mL顶空进样瓶中，精密加水5 mL，密封，振摇使溶解，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行分析，记录色谱图，见图1。结果表明，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶分离度均大于1.5，理论塔板数均不低于5 000。

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备液 10，10，5，5，5，2 mL，分别置 10，25，25，50，100，100 mL 量瓶中，分别用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，按2.1项下色谱条件进行分析，以峰面积A为纵坐标、质量浓度 C为横坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n=6）

精密度试验：精密量取对照品溶液5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，共6份，密封，摇匀，按2.1项下的色谱条件进行分析。结果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面积的 RSD分别为1.1%，2.3%，0.9%，1.8% （n=6）。

重现性试验：取样品（批号为0801001）约0.5 g，精密称定，置20 mL顶空进样瓶中，依法分析。结果乙醚含量为0.02%，RSD为1.1% （n=6），二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均未检出。

回收率试验：精密称取已知各溶剂含量的样品（批号为0801001）0.5 g，置20 mL顶空进样瓶中，共9份，分别精密加入对照品贮备液0.40，0.50，0.60 mL，各3份，再分别用水稀释至5.0 mL，依法分析，按外标法计算。结果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的平均回收率分别为 98.1%，96.6%，98.5%，99.0%，RSD分别为1.1% ，2.5%，1.4%，1.9% （n=9）。

稳定性试验：精密量取2.2项下对照品溶液，于室温下放置0，1，2，4，8，12 h，分别依法分析。结果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面积的 RSD分别为1.3%，2.6%，2.1%，1.8%（n=6），表明溶液在12 h内稳定。

2.4 检测限试验

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的最低检出限。结果最低检出限分别为2.23，9.85，0.84，3.83 μg/mL。

2.5 样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行分析，按外标法计算4种有机溶剂的含量。结果样品中二氯甲烷的残留量均为0.010%，甲苯的残留量均为0.013%，乙腈、吡啶均未检出。

3 讨论

色谱柱选择：试验中先后选择了DB-1，HP-5，HP-FFAP等不同极性的色谱柱，以在HP-FFAP柱上的峰形和分离度最佳。

顶空条件选择：考察了不同的顶空温度和顶空平衡时间对样品测定的影响，结果表明，样品在70，80，90℃的顶空温度下均稳定，为了提高检测灵敏度，故选择90℃作为顶空温度；本品在30，40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，故选择30 min作为顶空平衡时间。研究中发现顶空瓶中溶液的体积对色谱峰面积有较大影响，分别考察了20 mL顶空瓶中溶液的体积分别为2，3，5，6 mL，以及 10 mL 顶空瓶中溶液的体积分别为 1，2，3 mL，发现选择20 mL顶空瓶中溶液的体积为5 mL时，各色谱峰的峰面积最大。有关最佳气液平衡状态还有待于进一步研究。

无水硫酸钠盐析效应：在未添加无水硫酸钠的情况下，乙腈和吡啶的灵敏度较低，加入无水硫酸钠后，由于盐析作用灵敏度上升，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的灵敏度分别提高了1.1，1.1，1.2，2.4倍，盐析作用对吡啶灵敏度的提高最明显。

[1]张小霞，韩培红.马来酸桂哌齐特的药理作用及临床应用研究[J].中国药房，2007，18（26）：2 060.

[2]ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求-质量部分[M].周海钧，译.北京：人民卫生出版社，2006：79.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：附录54.