反相离子对高效液相色谱法测定盐酸溴己新及其片剂的含量
2010-06-01王玉红
郑 凯 ，王玉红 ，杨 阔
（1.辽宁省朝阳市药品检验所，辽宁 朝阳 122000； 2.中国药科大学，江苏 南京 212000）
盐酸溴己新及其片剂的现行药品质量标准[1]中分别用非水滴定法和紫外分光光度法测定含量，操作步骤烦琐。笔者改用反相离子对高效液相色谱（RP-IP-HPLC）法进行测定，现报道如下。
1 仪器与试药
SP8810型高效液相色谱仪，包括SP 100型紫外检测器，N2010型色谱工作站。盐酸溴己新对照品（批号为100427-200301，中国药品生物制品检定所）；盐酸溴己新原料（武汉鑫华远科技发展有限公司，批号分别为20071202，20071105，20080112）；盐酸溴己新片（扬州中宝制药有限公司，批号分别为080416，080615，080526）；甲醇（色谱纯）；磷酸、三乙胺、庚烷磺酸钠（分析纯），水（重蒸馏水）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：KromasilC18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相[2]：水 -甲醇-三乙胺（含5 mmol庚烷磺酸钠，用磷酸调pH至3.4，30∶70 ∶0.3）；流速：0.8 mL/min；柱温：室温；检测波长：249 nm；进样体积：20 μL。理论塔板数以盐酸溴己新计不低于5 000。
2.2 溶液制备
精密称取对照品20.10 mg，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取原料适量（约相当于盐酸溴己新20 mg），置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为原料供试品溶液。取样品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸溴己新20 mg），置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为片剂供试品溶液。称取处方量的空白辅料，按供试品溶液制备方法制备，作为阴性对照品溶液。
2.3 方法学考察
阴性干扰试验：取2.2项下4种溶液各20 μL，进样并分析。结果表明，在该法色谱条件下空白辅料不干扰样品测定（图1）。
专属性试验：取盐酸溴己新片粉4份，经碱、酸、强热及光照破坏，将其破坏产物照供试品溶液制备，依法进样。结果在该法色谱条件下盐酸溴己新与各降解产物能很好地分离。
线性关系考察：精密量取对照品贮备液 1，2，5，10，15，20 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。以进样量（μg）为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=397.96+261 165.93 X，r=0.999 9（n=6）。结果表明盐酸溴己新进样量在0.080 4～1.608 μg范围内与峰面积线性关系良好。
图1 高效液相色谱图
精密度试验：取对照品溶液，连续重复进样。结果平均峰面积为105 180，RSD=0.62%（n=6），表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取同一供试品溶液，在室温条件下放置，分别于0，4，8，12，24 h 时测定。结果平均峰面积为 105 398，RSD 为0.71%（n=5），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
重现性试验：精密称取同一批样品，依法测定含量。结果平均含量为98.3%，RSD为0.66%（n=6），表明方法重现性良好。
加样回收试验：精密称取已知含量的样品6份，分为3组，每组分别精密加入对照品适量，配成低、中、高3个质量浓度，按片剂供试品溶液制备，依法测定并计算回收率。结果见表1。
2.4 样品含量测定
取对照品溶液、原料供试品溶液和片剂供试品溶液各20 μL，进样测定，按外标法计算含量。结果3批原料中盐酸溴己新含量分别为99.6%，99.8%，99.8%；3批片剂中盐酸溴己新含量分别为99.3%，98.3%，99.6%。
表1 盐酸溴己新加样回收试验结果（n=6）
3 讨论
紫外扫描发现，以流动相为溶剂，盐酸溴己新的紫外光谱在249 nm波长处有最大吸收峰，故在此波长处测定含量。
利用RP-IP-HPLC法测定盐酸溴己新及其片剂的含量，通过加入离子对试剂庚烷磺酸钠，使保留时间由2.9 min延长至6.9 min，有利于杂质峰与主峰很好地分离。
经破坏试验验证，在该法色谱条件下，主峰与降解产物能达到良好分离，能够排除降解产物的干扰，专属性较强。
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：585.
[2]陈 睿，田 兰，刘惠军，等.高效液相色谱法测定盐酸溴己新及其片剂的含量和有关物质[J].药物分析杂志，2007，27（1）：132.
