盐补骨脂与酒补骨脂的炮制工艺优选及补骨脂生品与炮制品的差异研究

梁丽金，刘权震，覃柳莹，崔婷，汪梅，曹嵌，黄瑶

（广东一方制药有限公司/广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244）

补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifoliaL.的干燥成熟果实，味辛、苦，性温，具有温肾助阳、纳气平喘、温脾止泻、消风祛斑的功效[1]。研究表明，补骨脂生品具有肝毒性[2-8]，而引起肝毒性的潜在成分可能为补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂酚等化学成分，其中补骨脂酚毒性最强[9]。补骨脂生品经炮制后，能缓和其燥毒之性，并可引药入肾，增强补肾纳气的作用[10]。《中国药典》2020 年版一部“补骨脂饮片”项下收载了补骨脂和盐补骨脂饮片，《雷公炮制论》中也有记载“酒补骨脂”饮片的应用：“凡使，性本大燥毒，用酒浸一宿后，漉出，却用东流水浸三日三夜，却蒸，从巳至申，出，日干用”[11]，此外也有文献采用酒焙法和酒浸炒炮制补骨脂[12-13]，这表明个别地方尚保留了酒补骨脂应用。可见，炮制工艺对于补骨脂的“减毒增效”具有重要意义，而补骨脂炮制方法缺乏具体工艺参数，存在较强的主观性。补骨脂生品饮片的性状描述为“表面黑色、黑褐色或灰褐色”，而盐补骨脂饮片的性状描述为“表面黑色或黑褐色”[1]195，说明补骨脂生品与炮制品饮片性状较为一致，肉眼难以准确区分。依据中医辨证论治的用药理论，医生会针对患者病症选用不同的补骨脂炮制饮片组方，因此，为保证临床用药的安全性、准确性以及有效性，有必要加强补骨脂不同炮制品的质量控制，防止临床出现混用的情况。

中药指纹图谱是中药整体化学成分的表征，常用于中药的真伪鉴别、质量评价及生品与炮制品的区分等方面[14-16]。色度值可将中药饮片的颜色进行量化处理，在中药炮制领域已有较为广泛的应用[17-19]。因此，本研究采用正交试验设计结合综合评分法优选盐补骨脂与酒补骨脂的炮制工艺，同时比较补骨脂不同炮制品指标成分质量分数、指纹图谱以及色度值的差异性，以期为补骨脂不同炮制品的工业生产和质量控制提供参考，同时也为补骨脂“炮制减毒”的科学内涵研究奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Thermo Vanquish型超高效液相色谱仪（Thermo公司）；TS7700型分光测色仪（深圳市三恩时科技有限公司），ME204E 型万分之一天平、XP26 型百万分之一天平（Mettler Toledo公司）；111B 型二两装高速中药粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）；数控KQ-500DE 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；H22-X3型电陶炉（杭州九阳生活电器有限公司）；MiliQ Direct 8 型超纯水机（默克密理博公司）。

1.2 试药

补骨脂苷（质量分数98%，批号ST55020105）、异补骨脂苷（质量分数98%，批号ST55030105）、补骨脂酚（质量分数98%，批号ST06860120）对照品均购自上海诗丹德标准技术服务有限公司；补骨脂素（质量分数99.6%，批号110738-202016）、异补骨脂素（质量分数99.4%，批号110739-201918）对照品均购自中国食品药品检定研究院；黄酒（浙江老蔡酒业有限公司），甲醇为色谱纯（默克公司），甲酸为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。补骨脂药材经广东一方制药有限公司孙冬梅主任中药师鉴定均为豆科植物补骨脂Psoralea corylifoliaL.的干燥成熟果实。16批补骨脂药材来源信息见表1。

表1 16批补骨脂样品来源信息表Table 1 Source information of 16 batches of Psoraleae Fructus sample

2 方法与结果

2.1 含量测定方法建立

2.1.1 色谱条件 ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；以甲醇（A）-0.1%甲酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱0~9 min，18%A→30%A；9~18 min，30%A→46%A；18~19 min，46%A→57%A；19~34 min，57%A→77%A；34~42 min，77%A→90%A。柱温：40 ℃；检测波长：246 nm；流速：0.3 mL/min，进样量：1 μL。在此色谱条件下，对照品和供试品溶液中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚3种成分的分离度良好，色谱图见图1。

2.1.2 混合对照品溶液的制备 分别取补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成3 种对照品质量浓度分别为598.596 0、602.165 2、1 378.566 0 μg/mL 的对照品储备液。取各对照品储备液适量置5 mL容量瓶中，加甲醇稀释成补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚质量浓度分别为29.929 8、30.108 3、275.713 2 μg/mL 的混合对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取样品粉末（过3号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率45 kHz）30 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系的考察 分别精密吸取“2.1.2”项下各对照品储备液适量，加甲醇稀释制得7 种不同质量浓度的对照品溶液，以质量浓度（μg/mL）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y）进行线性回归，得到各成分的线性关系良好，结果见表2。

表2 各成分的回归方程及线性范围Table 2 Regression equation and linear range of each component

2.1.5 精密度试验 取混合对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算得到补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚峰面积的RSD 值分别为0.29%、0.34%、0.35%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 重复性试验 取同一批补骨脂粉末（YN2201001）6 份，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进行测定，计算得到补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚质量分数的RSD 值分别为0.34%、0.36%、0.27%，表明方法重复性良好。

2.1.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（YN2201001），按“2.1.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10、12、18、24 h 进样测定，记录峰面积，计算得到补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚峰面积的RSD 值分别为1.42%、1.40%、1.39%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.8 加样回收率试验 取已测定质量分数的样品（YN2201001）约0.25 g，共6份，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进行测定，补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的平均回收率分别为98.70%、95.61%、101.98%，RSD 值分别为0.57%、0.52%、0.52%，表明方法准确性良好。

2.2 补骨脂不同炮制品炮制工艺的优选

以补骨脂素和异补骨脂素总质量分数及补骨脂酚的质量分数为评价指标，在数据处理时参照文献[20]引用指标“隶属度”计算，即高优指标（A1）隶属度=（指标值-指标最小值）/（指标最大值-指标最小值）或低优指标（A2）隶属度=（指标最大值-指标值）/（指标最大值-指标最小值），其中高优指标即指标值越高越好，低优指标即指标值越低越好；补骨脂素+异补骨脂素总质量分数的隶属度按照A1 隶属度计算，有文献报道补骨脂酚具有肝肾毒性[9]129-136，[21]，故补骨脂酚质量分数的隶属度按照A2隶属度计算。补骨脂素和异补骨脂素是2020 年版《中国药典》规定的指标性成分，故规定补骨脂素和异补骨脂素总质量分数指标权重为0.5；有文献报道补骨脂酚具有肝肾毒性，故将补骨脂酚作为补骨脂炮制工艺优选的评价指标之一，基于“效毒平衡”，故规定补骨脂酚质量分数权重为0.5。综合评分值=补骨脂素和异补骨脂素总质量分数隶属度×0.5+补骨脂酚质量分数隶属度×0.5，计算各样品的综合评分值。

2.2.1 盐补骨脂炮制工艺优选 参考2020年版《中国药典》[1]195“补骨脂饮片”【炮制】项下要求“取净补骨脂，照盐炙法（通则0213）炒至微鼓起”，取补骨脂9 份（每100 g 补骨脂，用食盐2 g，水量为投料量的0.2 倍），每份按照正交试验设计进行炮制。根据文献报道[22]，闷润时间、炒制时间和炒制温度对盐补骨脂炮制工艺有一定影响，且现行药典只规定了食盐用量，其余炮制参数没有明确，故选取闷润时间（A）、炮制温度（B）、炮制时间（C）作为考察因素，因素水平表见表3。采用L9（34）正交试验设计，以补骨脂素和异补骨脂素总质量分数及补骨脂酚质量分数为评价指标，取不同炮制的盐补骨脂饮片样品，按“2.1”项下方法测定指标成分质量分数，计算综合评分，优选盐补骨脂炮制工艺，结果见表4，方差分析见表5。由直观分析可知各因素主次影响为：C>B>A；方差分析表明因素A、因素B 和因素C 对试验结果均无显著的影响。同时根据综合评分值最大为0.991，故优选盐补骨脂的炮制工艺为闷润3 h，170 ℃炒制13 min。综上所述，盐补骨脂炮制工艺参数确定为：取净补骨脂，加入盐水（每100 g 补骨脂，用食盐2 g，水量为投料量0.2 倍），搅拌均匀，闷润3 h，170 ℃炒制13 min。

表3 盐补骨脂炮制正交试验因素水平表Table 3 Factor level Table of orthogonal test of salt-processed Psoraleae Fructus processing

表5 方差分析结果Table 5 The results of variance analysis

表6 酒补骨脂炮制正交试验因素水平表Table 6 Factor level Table of orthogonal test of wine-processed Psoraleae Fructus processing

2.2.2 酒补骨脂炮制工艺的优选 参考文献[13]中《洪氏集验方》中补骨脂酒炒炮制的方法，取补骨脂9 份，每份按照正交试验设计加炮制用黄酒量分别为投料量的10%、15%、20%（每100 g 补骨脂，用黄酒10、15、20 g）闷润4 h，随后置于锅内炒制。根据文献报道，黄酒用量、炮制时间和炮制温度对酒补骨脂中指标成分有一定影响[23]，故选取黄酒用量（A）、炮制温度（B）、炮制时间（C）作为考察因素，因素水平表见6。采用L9（34）正交试验设计，以补骨脂素和异补骨脂素总质量分数及补骨脂酚的质量分数为评价指标，取不同批次的酒补骨脂饮片样品，按“2.1”项下方法测定指标成分质量分数，计算综合评分，优选酒补骨脂炮制工艺，结果见表7，方差分析结果见表8。由直观分析可知各因素主次影响为C>A>B；方差分析表明因素C 对试验结果影响有统计学意义，因素A 和因素B 对试验结果影响无统计学意义。同时根据综合评分值最大为0.831，故优选酒补骨脂的炮制工艺为：加投料量的20%黄酒，110 ℃炒制13 min。综上所述，酒补骨脂炮制工艺参数确定为：取净补骨脂，加投料量的20%黄酒（每100 g 补骨脂用黄酒20 g），搅拌均匀，闷润4 h，110 ℃炒制13 min。

表7 酒补骨脂炮制工艺考察的质量分数测定结果及综合评分值Table 7 Mass fraction determination results and comprehensive score values of wine-processed Psoraleae Fructus processing technology investigation

表8 方差分析结果Table 8 The results of variance analysis

2.3 补骨脂不同炮制品的制备

2.3.1 净补骨脂饮片的制备 取“1.2”项下16 批补骨脂药材（B1－B16），除去杂质，得净补骨脂饮片，编号S1－S16备用。

2.3.2 盐补骨脂饮片的制备 取16 批净补骨脂饮片（S1－S16），按“2.2.1”项下优选的盐补骨脂炮制工艺进行炮制，得盐补骨脂饮片，编号T1－T16，备用。

2.3.3 酒补骨脂饮片的制备 取16 批净补骨脂饮片（S1－S16），按“2.2.2”项下优选的酒补骨脂炮制工艺进行炮制，得酒补骨脂饮片，编号J1－J16，备用。

2.4 补骨脂不同炮制品指标成分的质量分数测定

取补骨脂不同炮制品，按“2.1”项下方法测定补骨脂素和异补骨脂素的总质量分数及补骨脂酚的质量分数，结果见表9。结果显示，补骨脂经炮制后，补骨脂素和异补骨脂素总质量分数呈上升趋势，补骨脂酚质量分数呈下降趋势。

表9 补骨脂不同炮制品质量分数测定结果Table 9 Results of mass fraction determination of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,) w/%

表9 补骨脂不同炮制品质量分数测定结果Table 9 Results of mass fraction determination of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,) w/%

注：同一列中，标字母a的表明与补骨脂比较，P<0.05。

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2.5 指纹图谱的检测方法

2.5.1 色谱条件 同“2.1.1”项下色谱条件。

2.5.2 供试品溶液的制备 同“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法。

2.6 方法学考察

2.6.1 精密度试验 取同一盐补骨脂供试品溶液（YH2103003），按“2.5.1”项下色谱条件连续进样6次，以补骨脂素色谱峰为参照峰（S），计算得到各特征峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD 值分别小于0.43%、2.00%，表明仪器精密度良好。

2.6.2 重复性试验 取同一批盐补骨脂（YH 2103003）粉末6份，精密称定，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件分别进行测定，以补骨脂素色谱峰为参照峰（S），计算得到各特征峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD 值分别小于0.29%、2.73%，表明该方法重复性良好。

2.6.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（YH2103003），按“2.5.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10、12、18、24 h进样测定，以补骨脂素色谱峰为参照峰（S），计算得到各特征峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD 值分别小于0.18%、2.94%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 指纹图谱的建立及共有峰的确定

取16批净补骨脂、盐补骨脂和酒补骨脂饮片样品，分别按照“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进行测定，记录各特征峰的峰面积，并计算补骨脂不同炮制品“峰面积/称样量”值（缺失的色谱峰峰面积以0 计），结果见表10。分别将补骨脂、盐补骨脂和酒补骨脂饮片指纹图谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”软件进行处理，其中补骨脂标识17 个共有峰，盐补骨脂和酒补骨脂均标识21 个共有峰。结果见图2－4。通过对照品比对，指认了峰1、2、5、6、21分别为补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚，如图5－6所示。

图2 16批补骨脂的UPLC指纹图谱叠加图Figure 2 Superimposed chromatograms of UPLC fingerprints of 16 batches of Psoraleae Fructus

图3 16批盐补骨脂的UPLC指纹图谱叠加图Figure 3 Superimposed chromatograms of UPLC fingerprints of 16 batches of salt-processed Psoraleae Fructus

图4 16批酒补骨脂的UPLC指纹图谱叠加图Figure 4 Superimposed chromatograms of UPLC fingerprints of 16 batches of wine-processed Psoraleae Fructus

图5 盐补骨脂样品（a）及混合对照品溶液（b）的UPLC图谱Figure 5 UPLC chromatograms of salt-processed Psoraleae Fructus sample（a）and mixed reference substance（b）

图6 酒补骨脂样品（c）及混合对照品（d）的UPLC图谱Figure 6 UPLC chromatograms of wine-processed Psoraleae Fructus sample(c)and mixed reference substance(d)

表10 补骨脂不同炮制品指纹图谱共有峰的峰面积与称样量比值的对比结果Table 10 Comparison of the ratio of the peak area of the common peak and the weight of the sample in the fingerprints of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,)

表10 补骨脂不同炮制品指纹图谱共有峰的峰面积与称样量比值的对比结果Table 10 Comparison of the ratio of the peak area of the common peak and the weight of the sample in the fingerprints of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,)

注：同一行中，标字母a 的表明与补骨脂比较，P<0.05；标字母b的表明与盐补骨脂比较，P<0.05。

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2.8 补骨脂不同炮制品色度值的测定

采用测色仪测定补骨脂不同炮制品粉末的色度值（L*、a*、b*），平行测定3 次，取平均值，结果见表11。色度值L*表示颜色深浅明暗，即黑白色；a*值表示红绿色轴，b*值表示黄蓝色轴。L*的数值为正表示偏白，反之表示偏黑；a*的数值为正表示偏红，反之表示偏绿；b*的数值为正表示偏黄，反之表示偏蓝。

表11 补骨脂不同炮制品色度值测定结果Table 11 Determination results of colorimetric value of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,)

表11 补骨脂不同炮制品色度值测定结果Table 11 Determination results of colorimetric value of different processed products of Psoraleae Fructus(n=16,)

注：同一列中，标字母a 的表明与补骨脂比较，P<0.05；标字母b的表明与盐补骨脂比较，P<0.05。

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结果表明，补骨脂经炮制后，饮片色度值L*变小，炮制品颜色变暗变深；色度值a*增大，表明炮制品颜色偏红。其中色度值a*增大比较明显，而色度值b*变化不明显。

2.9 方差分析和非参数检验

采用SPSS 20 软件对补骨脂不同炮制品的质量分数、指纹图谱和色度值数据进行正态性及方差齐性检验，符合正态分布和方差齐性的采用方差分析，不符合的采用非参数检验，结果见表9－11。

结果表明，补骨脂与盐补骨脂的补骨脂素和异补骨脂素总质量分数差异具有统计学意义（P<0.05），补骨脂不同炮制品的补骨脂酚质量分数无统计学差异，但相对于补骨脂生品饮片，炮制后的盐补骨脂和酒补骨脂中补骨脂酚的质量分数均有所下降，故推测炮制后可能具有减毒功效。除了峰12、13、17、峰20 外，补骨脂生品与炮制品的其余特征峰均差异具有统计学意义（P<0.05）；盐补骨脂与酒补骨脂指纹图谱中峰13 差异具有统计学意义（P<0.05）。此外，补骨脂经炮制后，峰1、2、9、15、16、21 的峰面积均有所下降，峰5、6、19 的峰面积均有所增加，且峰3、4、7、14为补骨脂炮制后新产生的特征峰，故峰3、4、7、14 可作为鉴别补骨脂生品与炮制品的专属性特征峰。色度值结果表明，补骨脂生品与炮制品的色度值a*差异具有统计学意义（P<0.05）；补骨脂与盐补骨脂、盐补骨脂与酒补骨脂的色度值L*差异具有统计学意义（P<0.05）；不同炮制品的色度值b*无明显差异。

2.10 聚类分析

采用SPSS 20.0 软件对补骨脂不同炮制品中21个特征峰峰面积和色度值数据进行聚类分析，聚类方法选择ward 法，测量区间选择平方Euclidean 距离，结果见图7。结果显示可将样品分成两大类，其中补骨脂样品（S1-S16）聚为一类；盐补骨脂（T1-T16）和酒补骨脂（J1-J16）聚为另一类，说明建立的补骨脂不同炮制品指纹图谱及色度值可区分补骨脂生品与炮制品，但难以区分盐补骨脂与酒补骨脂。

2.11 补骨脂不同炮制品的正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)

采用SIMCA 13.0软件，对补骨脂不同炮制品指纹图谱中21 个特征峰峰面积和色度值进行正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA），OPLS-DA 得分图见图8，得出24 个指标的VIP 值结果见表12。其预测模型的Q2 为0.58，大于0.5，说明建立的预测模型有效。据文献报道可根据模型中变量权重重要性（VIP），选取VIP 值>1.0 的因素作为差异性标志物，故选取VIP 值>1.0 的因素作为引起补骨脂不同炮制品差异的重要特征指标。由表12 结果可知，VIP值>1.0的指标有峰2、3、4、7、9、13、14、15、16、19、21的峰面积以及色度值L*、a*、b*，故上述14 个指标是鉴别补骨脂不同炮制品的差异性特征指标。

表12 补骨脂不同炮制品的各指标VIP值Table 12 VIP value of each index of different processed products of Psoraleae Fructus

2.12 相关分析

采用SPSS 20.0 软件对补骨脂不同炮制品的色度值（L*、a*、b*）与VIP 值>1.0 的色谱峰（峰2、3、4、7、9、13、14、15、16、19、21）及峰1、峰5、峰6、补骨脂素和异补骨脂素总质量分数、补骨脂酚质量分数数据进行正态性检验，符合正态分布采用Pearson相关分析，否则采用Spearman 相关性分析，结果见表13。结果显示，色度值L*与峰2、9、15、16、21、1 呈现正相关且具有统计学意义，即随着炮制过程L*值减小，峰2、9、15、16、21、1 的峰面积均减小；色度值L*与峰3、7、14、19、5、6、补骨脂素和异补骨脂素总质量分数呈现负相关且具有统计学意义，即随着炮制过程L*值减小，峰3、7、14、19、5、6 的峰面积及补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均增加；色度值a*与峰3、4、7、14、19、5、6、补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均呈正相关且具有统计学意义，即随着炮制过程a*值增大，峰3、4、7、14、19、5、6 的峰面积及补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均增大；色度值a*与峰2、9、15、16、21、1 均呈负相关且具有统计学意义，即随着炮制过程a*值增大，峰2、9、15、16、21、1的峰面积均减小；色度值b*与峰2、13、15、1 均呈正相关性且具有统计学意义，与峰5、6、补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均呈负相关性且具有统计学意义。

表13 相关性分析结果Table 13 Results of correlation analysis

2.13 补骨脂不同炮制品峰面积和色度值范围的确定 为实现补骨脂生品与炮制品的快速区分鉴别，根据统计学差异分析和OPLS-DA 分析结果，选取VIP值>1.0且补骨脂不同炮制品中差异具有统计学意义的指标作为差异标志物，并制定相应的标准范围，结果见表14。结果显示，补骨脂生品与炮制品的峰2、16、19 的峰面积以及色度值a*的范围均没有交集，表明除炮制后新增的峰3、4、7、14 外，共有峰2、16、19 和色度值a*亦可作为鉴别补骨脂生品和炮制品的关键指标。盐补骨脂与酒补骨脂中各指标范围均存在交集，二者难以区分。

表14 峰面积与称样量的比值及色度值范围Table 14 The ratio of peak area to weighing sample and the range of chroma values

3 讨论

传统“辨色论质”是通过药材外观色泽特点来判断药材的真伪优劣，中药外观颜色往往反映了其内在成分的有无和质量分数，而且与药理活性相关。本研究通过研究色度值与色谱峰、指标成分质量分数的相关性，可预测色度值与色谱峰、成分质量分数之间的关系，为补骨脂及炮制品质量评价体系提供新方法。补骨脂不同炮制品色度值结果显示补骨脂经炮制后，饮片色度值L*变小、色度值a*增大，其中色度值a*增大比较明显，而色度值b*变化不明显。结合相关分析结果可知，炮制后，饮片色度值L*变小，应与峰2、9、15、16、21、1 的峰面积均减少及峰3、7、14、19、5、6的峰面积及补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均增加有关；色度值a*增大，应与峰3、4、7、14、19、5、6 的峰面积及补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均增大及峰2、9、15、16、21、1 的峰面积均减小有关；色度值b*变化与峰2、15、1 的峰面积均减小及峰5、6的峰面积及补骨脂素和异补骨脂素总质量分数均增大有关。

本研究对补骨脂不同炮制品进行差异性研究，发现指纹图谱中峰3、4、7、14 为补骨脂经炮制后新增的特征峰，可作为区分补骨脂生品与炮制品的专属性特征峰；同时补骨脂生品与炮制品指纹图谱中峰2、16、19 的峰面积范围存在较大差异，亦可用于生品与炮制品的区分鉴别。此外，补骨脂生品与炮制品饮片粉末的色度值a*的范围不存在交叉，在实际生产检验中，可采用色度仪测定饮片的色度值a*，达到快速区分补骨脂生品与炮制品的目的。除峰13 和色度值L*外，盐补骨脂和酒补骨脂各指标差异没有统计学意义，聚类分析也将盐补骨脂和酒补骨脂聚为一类，表明盐补骨脂和酒补骨脂的化学成分和色泽差异不大，同时也反映出酒补骨脂的性效与盐补骨脂基本相似。对于盐补骨脂和酒补骨脂的鉴别还需深入研究，且峰13是否与不同辅料炮制对补骨脂功效有不同影响有关，也有待进一步研究。

补骨脂生品具有温肾助阳、纳气平喘、温脾止泻功效，盐炙后其补肾作用增强，但补骨脂生品性燥，易伤阴助火，具有一定的毒副作用[21]50-58，[24-25]，因此临床上多使用其炮制品，在“炮制减毒”的基础上更能增强其功效。据文献报道[3，9]，补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂酚等化学成分可能是引起肝毒性的潜在成分。本研究结果显示，相对于补骨脂生品饮片，炮制后的盐补骨脂和酒补骨脂中补骨脂酚的质量分数均有所下降，且炮制品指纹图谱中峰1（补骨脂苷）、2（异补骨脂苷）、9、15、16 的峰面积较生品明显下降，表明以上所述成分的变化可能是补骨脂“炮制减毒”的机理之一。此外，补骨脂炮制品指纹图谱中峰3、4、7、14、19 的峰面积显著增加，推测这些成分的变化可能与其炮制后补肾作用增强有关。同时，补骨脂经炮制后，补骨脂素和异补骨脂素总质量分数增加，指纹图谱中峰1（补骨脂苷）和峰2（异补骨脂苷）的峰面积降低的实验结果与文献报道[26]补骨脂苷和异补骨脂苷会向补骨脂素和异补骨脂素转化的结果相一致。综上可知，补骨脂酒炙和盐炙均能达到炮制减毒作用，但目前炮制规范中炮制工艺仅是简单的定性描述，易使各地炮制工艺参数不一致，造成市售补骨脂炮制品质量参差不齐，故有必要统一炮制工艺，建立参数明确、过程可控、稳定性好的补骨脂炮制工艺，保证临床用药有效性和安全性。而现行药典只记载盐补骨脂，其原因可能是中药炮制理论提到入盐走肾，补骨脂盐制后不仅能降低其燥性，而且能够引药入肾，来增强其温肾壮阳的功效，故在临床应用中也主要以其盐制品为主。

本研究在优选的补骨脂炮制工艺的基础上，构建了补骨脂不同炮制品的指纹图谱，同时对补骨脂不同炮制品外观颜色进行定量表征，建立了补骨脂生品与炮制品的鉴别方法。本研究可为补骨脂的炮制工艺、生品与炮制品的区分鉴别以及补骨脂的物质基础研究提供参考。