动物源性食品中兽药残留的快速筛查

何冲，王彬，孙亚南

陕西省产品质量监督检验研究院（西安 710048）

兽药残留[1]是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。兽药残留既包括原药，也包括药物在动物体内的代谢产物和兽药生产中所伴生的杂质。若长期食用兽药残留物质超标的动物源性食品，会引起毒害作用，造成人体免疫力下降，发生过敏反应，甚至可能致畸、致癌、致突变[2]，对人体危害极大。随着人们生活水平的不断提高，科技的不断发展和普及，消费者对食入体内的食品要求越来越高，对动物源食品从需求型转变为质量型，兽药残留的研究已逐渐成为全世界关注的一个焦点。为保障食品质量安全，需加大对畜禽防疫检疫的监管力度，进而兽药残留检测分析成为保障食品安全的重要手段[6]。目前，大部分兽药残留均采用LC-MS/MS法来检测，但大部分检测方法的前处理十分复杂，步骤繁琐，目标物回收率过低[3-5]。同时不同基质也无法同时处理[7-9]，时间、试剂和耗材的消耗量过大，使得现有方法难以实现大批量样品的快速检测[10-12]。

此次试验分别研究了不同基质中喹诺酮类、β-受体激动剂类以及硝基咪唑类等药物残留的检测，结果表明该方法极大程度地缩短了样品前处理的步骤，同时该方法检出浓度低，回收率和精密度高，完全满足目前兽药残留检测的基本要求，适用于不同基质多种兽药残留的快速筛查。

1 试验部分

1.1 仪器与设备

Thermo Fisher TSQ & Endura超高效液质联用仪[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]；BSA224S电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；VOrtex Genie2T漩涡混合器（Scientific IndustriesVortex Genie 2T）；TDZ5-WS离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；FV64氮吹仪（得泰仪器科技有限公司）。

1.2 试剂和耗材

甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯；所用水为超纯水；沙丁胺醇（Salbutamol）、克伦特罗（Clenbuterol）、甲硝唑（Metronidazole）、地美硝唑（Dimetridazole）恩诺沙星（Enrofloxacin）、沙拉沙星（Sarafloxacin）、甲硝唑-D3（Metronidazole）：均为First Standard；沙丁胺醇-D3（Salbutamol-D3）、克伦特罗-D9（Clenbuterol- D9）：均为Bepure标准溶液。

1.3 标准曲线的配制

用甲醇分别将标准物质及同位素内标配制成质量浓度为10 μg/mL的储备液（-18 ℃避光保存）；分别精确吸取一定量的储备液配制成质量浓度为200 ng/mL的混合标准溶液和混合内标溶液；用10%的甲醇水稀释成质量浓度为1，2，5，10，20，50和100 ng/mL的标准工作溶液；每1 mL该标准工作溶液中含有沙丁胺醇-D3、克伦特罗-D9、甲硝唑-D3各10 ng；现配现用。

1.4 样品前处理

准确称取2 g（精确至0.01 g）试样置于50 mL具塞离心管中，加入200 μL混合同位素内标液，涡旋混匀；再加入10 mL纯乙腈，涡旋5 min后转移至振荡器充分振摇30 min，在高速离心机上以5 000 r/min的速度离心5 min；最后取5 mL上清液，在45 ℃下氮吹至干，准确加入1 mL 10%甲醇水超声复溶，过0.22 μm滤膜，上机待分析。

空白基质中分别加入一定量标准溶液，使其浓度水平为1，2，5和10 μg/kg，样品前处理同上。同时做空白试验。

1.5 液相色谱-串联质谱检测

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.1 mm× 100 mm，2.7 μm）或性能相当者；流动相：A为含0.1%甲酸水溶液，B为甲醇；梯度洗脱程序见表1；流速：300 μL/min；柱温：40 ℃；进样量：5 μL。

表1 梯度洗脱程序

1.5.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI+）；检测方式：多反应监测（MRM）；喷雾电压：3.5 kV（ESI+）；离子传输管温度：350 ℃；雾化器温度：300 ℃；鞘气压力：30 Arb；辅助器压力：10 Arb；扫气压力：0 Arb。

1.6 定性与定量

在相同试验条件下测定试样和浓度相近的标准工作溶液，记录试样和标准工作溶液中的色谱保留时间，以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子的相对离子丰度。若试样中检出与标准溶液中兴奋剂保留时间一致的色谱峰，且其定性离子与浓度相当的标准溶液中相应的定性离子的相对丰度相比，偏差不超过表2规定的范围，可以确定试样中检出相应的目标物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

根据试样中目标物的含量情况，选取浓度相近的混合标准工作液进行液相色谱-质谱/质谱分析。混合标准工作液和待测液中目标物的响应值均在仪器线性响应范围内。以色谱峰面积按内标法和外标法分别定量。

2 结果与讨论

图1为6种兽药残留以及其相对应的内标的标准溶液总离子流图谱（标准物质浓度均为10 ng/mL，内标浓度为10 ng/mL）。可以看出，目标物在该色谱条件下分离度较好，质谱响应值完全满足信噪比要求，液相和质谱条件均能满足后续试验要求。

图1 6种兽药残留标准物质及内标总离子流图谱

2.1 线性关系

2.2 准确度和精密度

选取动物源性食品中具有代表性的猪肉和鱼肉两种基质，在样品中添加不同浓度水平的6种兽药残留标准物质进行回收率试验，结果见表4。试验结果表明方法在1～10 μg/kg添加浓度范围内，回收率为60.2%～105.2%。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。

表3 6种兽药残留标准物质标准曲线

表4 6种兽药残留回收率和精密度

3 结论

试验分别对猪肉和水产样品进行了低浓度下目标物的平行试验、精密度测试和加标试验。综合不同基质的复杂性，得出3种兽药残留在1～100 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数R2均大于0.999。回收率范围为60.20%～105.2%，相对标准偏差范围为1.08%～ 7.21%。与目前国内通用方法相比，研究在满足对检出限、回收率和精密度要求的前提下极大地简化了试验步骤，缩短了样品前处理的时间。该方法操作简便，分析速度快，回收率高，稳定性好，同时试验对动物源性食品中一次性检测出不同药物残留量都进行了检测研究，结果表明该方法还具有广泛的应用性。该方法解决了现有方法中针对大批量、快速地检测动物源性食品中处理方法的问题。