归一饮加减方对2型糖尿病大鼠血糖、血脂和血液流变学的影响

代 莲，许珈齐，游平平，柯媛媛，吕辉鸿，黄 琼

（福建中医药大学附属第三人民医院，福建 福州 350108）

2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）主要病因是胰岛素敏感性下降引起的胰岛素抵抗，症状表现为胰岛素代偿、高血糖以及高血脂，长期发展将引起不可逆转的并发症［1］。胰岛素抵抗不仅触发高血糖的发生，其所引起的血脂异常、血液黏度异常等一系列的变化在糖尿病发生、发展中更扮演着重要的角色［2］。

中药治疗糖尿病具有明显的优势，首都医科大学附属北京天坛医院张东教授创立的归一饮加减方广泛应用在糖尿病治疗中，取得了良好的治疗效果［3］，但临床研究较少，缺乏研究基础，治疗糖尿病的机制不明。故本研究建立糖尿病大鼠模型，观察归一饮加减方干预后糖尿病模型大鼠血糖、血脂、血液流变学、胰岛素抵抗指数的变化，进一步探索归一饮加减方治疗糖尿病的疗效及机制，为临床应用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 实验动物 清洁级雄性Wistar 大鼠60 只，约2 月龄，体质量（200±20）g，购于浙江医学科学院，生产许可证号：SCXK（浙）2019-0002。饲养于福建中医药大学实验动物中心，许可证号：SYXK（闽）2014-0005，饲养在室温22～25 ℃，相对湿度40%～70%的环境中。

1.2 实验药材 归一饮加减方由炙甘草12 g，干姜9 g，附子6 g，葛根10 g，天花粉10 g 组成，原药材饮片由安徽省万生中药饮片有限公司提供。

1.3 实验试剂 链脲佐菌素（STZ，美国Sigma 公司）；血糖试剂盒（北京北化康泰临床试剂有限公司）；胰岛素放免试剂盒（北京北方生物技术研究所）；胆固醇（TC）生化试剂、三酰甘油（TG）生化试剂（北京中生生物工程高技术公司）；低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）生化试剂、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）生化试剂（北京北免东雅生物技术研究所）；基础饲料配方由福建中医药大学动物实验中心提供；高热量饲料购于福州诺敦斯生物科技有限公司，按基础饲料∶奶粉∶蔗糖∶炼猪油∶鸡蛋＝63∶4∶30∶20∶2 的比例配制。

1.4 实验仪器 数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司，型号：HH-4）；高速离心机（德国EPPen⁃dorf 公司，型号：5810R）；全自动生化仪（美国Beck⁃man 公司）；全自动酶标仪（美国BioTek 公司，型号：ELX800）；全自动血液流变仪（北京普利生生物科技开发有限公司，型号：LBY-N7500B）。

2 实验方法

2.1 STZ试剂配制 柠檬酸2.1 g加入双蒸水100 mL中配成A 液，柠檬酸钠2.94 g 加入双蒸水100 mL 中配成B 液，取A 液22.8 mL、B 液17.2 mL 混合均匀，最后称定300 mg STZ 粉末溶于40 mL A、B 混合液中即得。

2.2 实验药物混悬液制备 归一饮加减方：称取上述中药1 剂（共47 g），药材先用清洁自来水清洗2 遍，随后加蒸馏水没过中药，浸泡0.5 h 后再进行煎煮，煎煮1 h 后过滤取药液；再次加蒸馏水煎煮后过滤取药液，合并2 次药液，以武火加热浓缩至体积为47 mL，相当于1.0 g/mL 生药量浓度，置于4 ℃冰箱保存，使用前1 h 于室温中恢复至常温。盐酸二甲双胍、阿托伐他汀片剂研粉后以蒸馏水稀释混匀，分别配制成61、1.6 mg/mL 混悬液，置于4 ℃冰箱贮藏。

2.3 T2DM 模型制备 将60 只大鼠适应性喂养1周，随机抽取10只为正常组，喂以基础饲料。余下50 只为造模组，造模组给予高热量饲料喂养。1 个月后造模组按25 mg/（kg·d）一次性腹腔注射STZ。

2.4 T2DM 模型成功判定 注射STZ 溶液72 h 后，尾静脉取血测定大鼠空腹血糖（FBG）。若大鼠空腹血糖≥11.1 mmol/L，即确定T2DM 造模成功［4］。

2.5 分组及给药 将造模成功大鼠随机分为模型组、归一饮组、二甲双胍组、阿托伐他汀组，每组10 只。模型组予10 mL/（kg·d）蒸馏水灌胃，每日9：00—10：00 灌胃1 次（以下各组灌胃时间相同）；归一饮组以成人每日1 剂原方原量，实验动物用量按《中药药理实验方法学》中“人和动物按体表面积折算等效剂量比率表”计算［5］，予归一饮混悬液3.9 mL/（kg·d）灌胃；二甲双胍组予二甲双胍混悬液3 mL/（kg·d）灌胃；阿托伐他汀组予阿托伐他汀混悬液3.1 mL/（kg·d）灌胃。以上4 组在干预间仍饲以高热量饲料，正常组不予任何药物干预，饲以基础饲料。各组均喂养8 周。

2.6 指标测定

2.6.1 体质量、FBG 测定 开始干预后每隔2 周测定大鼠体质量，剪尾测定FBG，测前需禁食不禁水12 h。

2.6.2 糖耐量（OGTT）测定 各组大鼠干预8 周后剪尾取血行OGTT 测定。末次给药前1 d 禁食不禁水12 h，以40%葡萄糖液2 g/kg 对大鼠灌胃，于灌胃后0、30、60、120 min 分别检测血糖值。

2.6.3 血液指标测定 末次干预后大鼠禁食不禁水12 h，给予戊巴比妥钠50 mg/kg 体质量腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清，-20 ℃保存。采用放射免疫法检测空腹胰岛素（FINS）并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；全自动生化仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平；全自动血液流变仪检测血液流变学指标，包括全血黏度、血浆黏度、血沉、红细胞聚集指数。

2.7 统计学方法 运用SPSS 22.0 软件进行统计分析。计量资料属正态分布的以（±s）表示，采用单因素方差分析。

3 结 果

3.1 各组大鼠体质量比较 见表1。

表1 各组大鼠体质量比较（±s） g

表1 各组大鼠体质量比较（±s） g

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与阿托伐他汀组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他汀组n 10 10 10 10 10给药第2周385.80±17.19 379.63±16.23 382.71±14.60 388.23±8.76 383.47±6.89给药第4周395.70±18.13 351.52±15.171）360.38±10.601）372.86±9.631）2）3）350.93±7.891）给药第6周406.80±16.79 316.23±18.341）327.45±9.601）2）3）341.37±8.961）2）3）310.18±5.881）给药第8周418.69±27.98 271.78±15.831）324.31±11.731）2）3）322.43±10.211）2）3）275.36±4.381）

3.2 各组大鼠空腹血糖比较 见表2。

表2 各组大鼠空腹血糖比较（±s） mmol/L

表2 各组大鼠空腹血糖比较（±s） mmol/L

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与阿托伐他汀组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他汀组n 10 10 10 10 10干预第2周4.25±0.12 17.38±1.231）11.76±1.601）2）3）10.23±1.761）2）3）16.47±1.891）干预第4周4.36±0.13 18.52±1.171）8.38±1.602）3）8.86±0.632）3）16.93±1.891）干预第6周3.76±0.19 16.29±1.341）6.45±0.622）3）7.37±0.962）3）15.18±0.881）干预第8周3.54±0.12 17.93±1.131）5.23±0.132）3）4.72±0.462）3）16.92±1.141）

3.3 各组大鼠OGTT 比较 见表3。

表3 各组大鼠OGTT 比较（±s） mmol/L

表3 各组大鼠OGTT 比较（±s） mmol/L

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与阿托伐他汀组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他汀组n 10 10 10 10 10灌胃后0 min 3.54±0.12 17.93±1.131）5.23±0.132）3）4.72±0.462）3）16.92±1.141）灌胃后30 min 6.59±0.43 29.57±0.231）9.54±0.342）3）9.31±0.212）3）28.27±0.491）灌胃后60 min 6.51±0.70 25.67±1.451）8.72±0.812）3）8.27±0.782）3）23.66±1.441）灌胃后120 min 5.91±0.65 21.78±1.491）6.80±0.512）3）7.26±0.832）3）19.97±1.491）

3.4 各组大鼠FINS 和HOMA-IR 比较 见表4。

表4 各组大鼠FINS 和HOMA-IR 比较（±s）

表4 各组大鼠FINS 和HOMA-IR 比较（±s）

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与阿托伐他汀组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他汀组n 10 10 10 10 10 FINS/（mIU/L）15.17±1.27 32.55±13.421）15.07±5.852）3）16.58±7.252）3）32.53±13.431）HOMA-IR 2.25±0.49 23.10±0.621）3.49±0.162）3）3.63±0.162）3）23.07±0.611）

3.5 各组大鼠血清TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比较 见表5。

表5 各组大鼠TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比较（±s） mmol/L

表5 各组大鼠TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比较（±s） mmol/L

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与二甲双胍组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他组n 10 10 10 10 10 TC 1.13±0.17 2.07±0.381）1.44±0.312）3）2.06±0.391）1.46±0.782）3）TG 0.55±0.16 1.18±0.311）0.76±0.272）3）1.14±0.301）0.68±0.522）3）LDL-C 0.61±0.22 1.06±0.431）0.66±0.152）3）1.03±0.421）0.65±0.172）HDL-C 0.68±0.15 0.38±0.24 0.35±0.13 0.37±0.23 0.63±0.26

3.6 各组大鼠血液流变学指标比较 见表6。

表6 各组大鼠血液流变学指标比较（±s）

表6 各组大鼠血液流变学指标比较（±s）

注：与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与二甲双胍组比较，3）P＜0.01。

组别正常组模型组归一饮组二甲双胍组阿托伐他汀组n 10 10 10 10 10全血黏度/（mPa·s）4.15±0.57 6.73±1.541）4.37±0.352）3）5.91±1.441）4.22±0.332）3）血浆黏度/（mPa·s）2.21±0.76 3.70±1.031）2.57±1.022）3）3.52±0.881）2.43±0.752）3）血沉/（mm/h）1.21±0.22 2.46±0.431）1.31±0.152）3）2.35±0.171）2.25±0.11红细胞聚集指数1.47±0.15 2.98±0.231）2.79±0.13 2.83±0.261）1.93±0.252）3）

4 讨 论

T2DM 病理生理基础是胰岛素抵抗和胰岛β 细胞功能缺陷。T2DM 患者往往伴随着肥胖，尽管体质量管理对于糖尿病人非常重要，但也并非降得越低越好。本研究结果显示：归一饮加减方可使糖尿病大鼠的体质量及对葡萄糖的耐受性增加，这使得机体对葡萄糖吸收利用率提高，无需过度地分解脂肪和蛋白质，减少了患者疲乏无力、营养不良、免疫力下降等健康问题的发生几率［6］。

本研究结果还显示：糖尿病模型组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TG、LDL-C 水平明显高于正常组，这与CALIMIOGLU 等［7］研究结果基本一致，表明糖尿病模型组大鼠存在脂代谢紊乱。长期的脂代谢紊乱可使血脂浓度升高，影响葡萄糖的氧化、摄取和糖异生及胰岛素分泌［8］，甚至可干扰胰岛素信号转导系统而加剧机体的胰岛素抵抗，从而加重糖尿病［9］。归一饮加减方可改善大鼠血脂水平，使大鼠血液中代谢产生的三酰甘油减少，一定程度上减少了脂毒性对胰岛细胞的损害，减轻了肝脏和外周组织的胰岛素抵抗；另外，归一饮加减方可改善T2DM 大鼠血液流变学指标，其作用有可能与改善胰岛素抵抗有关，但具体机制还有待于进一步研究。本研究中治疗后二甲双胍组与模型组比较，LDL-C、TG 指标有下降趋势，但差异无统计意义，考虑可能与样本数量较少且治疗时间较短有关。综上，归一饮加减方对糖尿病大鼠的血脂、血液流变学指标有改善作用，提示其在降低血糖的同时，可能兼有预防糖尿病的心血管疾病以及高血压、微血管病变、脑血栓等并发症作用，使糖尿病得到全面的改善，这将是我们下一步研究的方向。