槐定碱微球的质量评价

王瑞琳，樊彦会，侯伟娜，董雪婷

哈尔滨商业大学英才学院(哈尔滨 150076)

槐定碱(Sophoridine，SR)是从豆科植物苦豆子和山豆根中获得的单一生物碱。槐定碱有抗心律失常，抗肿瘤微生物和肉毒素等药理作用[1]。在药理研究和临床试验中，槐定碱对肺癌、绒癌、恶性葡萄胎和消化道癌有一定治疗作用[2-3]，槐定碱注射液作为一种新型广谱抗癌药物，在临床试验中发现其在体内分布广泛，消除快，因而限制了其临床应用。随着研究的深入，其新剂型越来越多。制备槐定碱微球可以提高槐定碱的耐药性，延长槐定碱药物在体内的作用时间，从而提高抗癌效果，同时，槐定碱微球新剂型的研究也可以为生物碱的开发利用提供实验数据。

1 实验材料

1.1 药物与试剂

槐定碱(纯度>98%)、槐定碱对照品(纯度>98%)、壳聚糖(脱乙酰度95%，黏度100～200mpa)、司盘80(分析纯度)、戊二醛50%(分析纯度)、液体石蜡、异丙醇(分析纯度)、甲醇(色谱纯)。

1.2 实验仪器

KH-35A电恒温干燥箱；AXTGL18M安信离心机；Waters 1525高效液相色谱仪；QUANTA-200型扫描电镜；FTIR-650傅里叶变换红外光谱仪；BL-22显微镜；79-2型双向磁力搅拌器。

2 实验方法

2.1 槐定碱微球制备

通过查阅相关文献[4-6]，用乳化交联法制备槐定碱微球。制备工艺[7]如下：精密量取一定量的液体石蜡和0.63g乳化剂司盘-80，将两种试剂作为油相放入烧杯中，在40℃下用磁力搅拌器将其混合均匀。取壳聚糖50mg于烧杯中，用稀醋酸溶解，静置脱气。将40mg槐定碱原料药溶于水，与壳聚糖混合，用磁力搅拌器将其混合均匀，作为水相。磁力搅拌器升温至40℃后，将水相缓慢加入油相。乳化30min后加入0.3mL戊二醛固化，交联3.5h。静置后，取该溶液的上清液，用丙酮洗涤后再过滤。将上清液和洗涤液混合后得到合并液，洗涤后部分干燥得到微球。在制备槐定碱微球时，油相和水相的比例为3∶1。

2.2 制剂学评价

2.2.1 形态、粒径及粒径分布 在电子显微镜下观察槐定碱微球的形态，采用显微计数法[8]，计算槐定碱微球的平均粒径[9]，统计其粒径分布。

2.2.2 红外光谱测定 对槐定碱原料药、空白壳聚糖微球、槐定碱微球、槐定碱与空白壳聚糖微球物理混合物的红外光谱进行测定并比较。

2.2.3 差示扫描量热测定 机器预热15min，用两个空白铝坩埚平衡机器，分别取适量样品粉末(槐定碱、空白壳聚糖微球、槐定碱微球)约3～5g，轻轻放入右侧坩埚中测量。分析气体：氮气，升温速度：10℃/min，扫描范围：25～250℃[10]。

2.2.4 外释放度考察 色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：0.05mol/L，磷酸二氢钾(含0.2mL/L三乙胺)溶液-乙腈(90∶10)，流速：1mL/min，柱温：30℃，进样量：10μL，检测波长：208nm。

2.2.5 稳定性初步考察 以光照、温度和湿度为变量对槐定碱微球进行影响因素试验；以槐定碱微球的外观、包封率和载药性为指标对其进行稳定性试验和加速试验。

3 实验结果与分析

3.1 形态、粒径及粒径分布

槐定碱微球的形态如图1所示(A、B为不同倍数下槐定碱微球样品的SEM图)，其球形圆整，分散性良好。由图2微球的粒径分布直观图可以看出微球的直径大多数为4～12μm，利用显微计数法测定约500个粒子粒径，计算平均粒径=8.951μm。

图1 微球的粒径分布直观图

图2 微球的粒径分布直观图

3.2 槐定碱红外光谱

由图3可看出槐定碱原料药在1622cm-1处有明显的槐定碱特征峰(三级酞胺Ⅰ带峰)；壳聚糖在3429.74cm-1有CS的主要吸收峰(O-H伸缩)，经比较，槐定碱微球的图谱与空白壳聚糖微球的图谱一致，未出现槐定碱的特征峰，存在壳聚糖主要特征吸收峰，而物理混合物中槐定碱特征峰与壳聚糖特征峰均明显，且无新峰生成、无峰位移。说明槐定碱被壳聚糖微球包进微球里，包裹的方式为机械包裹，两者未发生化学变化。

图3 槐定碱原料药、槐定碱壳聚糖微球、壳聚糖空白微球、槐定碱与空白微球混合物的红外光谱图

3.3 差示扫描量热法测定结果

由图4的DSC图谱可以看出，槐定碱原料药在100～125℃间有吸热峰，且峰形明显，空白壳聚糖微球和载药壳聚糖微球均在50～100℃间有吸热峰，将槐定碱原料药和槐定碱微球的吸热峰位置作比较，槐定碱微球在100～125℃间无槐定碱原料药吸热峰出现，即槐定碱被壳聚糖微球物理包埋。

图4 DSC图谱

3.4 体外释放度考察结果

通过专属性实验、精密度实验、稳定性试验、加样回收率实验，表明槐定碱微球的专属性、精密度、稳定性均良好，由体外释放度实验数据可知槐定碱原料药释放速率很快，4h内基本释放完全，而槐定碱微球在初期快速释放，半个小时后释放缓慢，24h内累计释放量近75%，结果比较，说明槐定碱微球具有缓释作用。

3.5 初步稳定性结果

通过研究光照、温度、湿度对微球稳定性影响，得出槐定碱微球应在室温环境中避光且干燥的条件下保存。将载药微球置于密闭容器内，室温放置三个月后，微球的外观、包封率、载药量和粒径基本无变化，说明微球可以在室温下密封保存。

4 结语

实验以壳聚糖为载体将槐定碱制备成槐定碱微球，通过壳聚糖的修饰增了强靶向性，槐定碱与微球相互包埋减少了药物的毒性，提高了药物的稳定性。通过最优处方制备的槐定碱微球稳定性和分散性良好，体外释放实验表明槐定碱微球具有缓释作用，可减少用药周期。槐定碱微球的制备为临床提供了一种低毒高效的靶向制剂，也为生物碱单体的用药方式提供了可靠的经验。