原研和国产仿制药阿托伐他汀钙片的溶出曲线比较和评价

章建富，邵淑蓉，叶朝辉

阿托伐他汀钙为羟甲戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂类调血脂药，临床主要用于高胆固醇血症、冠心病合并高胆固醇血症或混合型血脂异常的患者，是全球处方量最多的降胆固醇药物和排名第一的处方药。阿托伐他汀钙片由辉瑞公司生产，1997年首先在英国上市，商品名为“立普妥”，1999年国内上市，规格为10、20和40 mg。2011年底，原研药立普妥专利保护到期后，阿托伐他汀钙仿制药逐步进入市场，截至目前国内已有6个厂家获得仿制药批准文号。阿托伐他汀钙极微溶于水，随着水溶液pH值上升溶解度增大，当pH值低于5.0时几乎不溶[1]，属于生物药剂学分类系统Ⅱ类药物[2]，溶出是影响其吸收的限速步骤。张启明等[3]指出溶出度试验技术是评价口服固体制剂内在质量的一种重要手段，可为建立体内外相关性提供基础数据，在多种pH值溶出介质中溶出曲线的测定更是评估不同来源的同一制剂内在质量差异上的可靠手段。本文以原研药立普妥为参比制剂，考察阿托伐他汀钙片仿制药在不同介质中的溶出曲线，采用相似因子法评价溶出行为，为进一步保障临床用药提供质量依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 DGU-20A3高效液相色谱仪（岛津）；ZRS-8L智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；FA2104电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）。阿托伐他汀钙片（商品名：立普妥，辉瑞制药有限公司，批号X83161）、（商品名：优力平，浙江乐普药业股份有限公司（A厂），批号20180904A）、（商品名：阿乐，北京嘉林药业股份有限公司（B厂），批号BA181069）、（商品名：山乐汀，山德士（中国）制药有限公司（C厂），批号HK5407）；阿托伐他汀钙对照品（中国药品生物制品检定所，批号100590-200501，含量为95.2%）；甲醇、乙腈为色谱纯，盐酸、醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾等均为分析纯；水为纯化水。

1.2 方法

1.2.1 溶液的配制

1.2.1.1 溶出介质 按照《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》[4]分别配制4种溶出介质，分别为pH值1.0盐酸溶液、pH值4.5醋酸盐缓冲液及pH值6.8磷酸盐缓冲液和水。

1.2.1.2 对照品溶液 取阿托伐他汀钙对照品约10 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解后稀释至刻度，摇匀，配成浓度约1 mg/ml的对照品储备液，并按需要稀释成不同浓度的对照品溶液。

1.2.2 方法学考察

1.2.2.1 色谱条件 色谱柱：Welch Ultimate XB-C18色谱柱（4.6×250 mm，5 m）；流动相：乙腈-1%醋酸（65∶35）；检测波长：244 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：常温；进样量：20 l。

1.2.2.2 稳定性试验 取“1.2.1.2”项下对照品溶液适量，用4种溶出介质pH值1.0盐酸溶液、pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水稀释成阿托伐他汀钙浓度为9.97 g/ml的溶液。

1.2.2.3 线性关系考察 精密量取适量阿托伐他汀钙对照品溶液，用3种溶出介质（pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水）稀释至刻度，摇匀，配置成0.997、4.985、9.97、19.94、39.88 g/ml系列标准工作液。分别进样20 l测定，以阿托伐他汀钙质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。

1.2.2.4 精密度试验 取“1.2.1.2”项下对照品溶液适量，用3种溶出介质（pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水）稀释成阿托伐他汀钙浓度为9.97 g/ml的溶液，分别连续进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。

1.2.2.5 加样回收率试验 精密称取已知含量的阿托伐他汀钙片研细粉末，置100 ml量瓶中，分别加入“1.2.1.2”项下对照品溶液0.8、1.0、1.2 ml，并用3种溶出介质（pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水）稀释至刻度，摇匀，离心取上清液测定药物浓度，计算回收率。

1.2.3 溶出度测定 参照阿托伐他汀钙片国家药品标准WS1-（X-106）-2003Z溶出度项下的方法，按照溶出度测定法（中国药典2015年版0931溶出度与释放度测定法第二法），分别量取经脱气处理的“1.2.1.1”项下3种溶出介质（pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水）900 ml，待溶出介质温度恒定在（37±0.5）℃，设置转速50 r/min，将阿托伐他汀钙片置6个溶出杯中，自供试品接触溶出介质起计时，根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》和实际溶出情况，分别于5、10、15、30、45、60 min取样5ml（同时补充同温等量空白溶出介质），滤过，取续滤液作为供试品溶液。进样测定药物含量，计算各时间点的累积溶出度，绘制溶出曲线。

1.2.4 溶出曲线相似性评价 根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，采用相似因子（f2）来比较溶出曲线，评价其他厂家阿托伐他汀钙片与原研制剂体外溶出行为的相似性。

2 结果

2.1 稳定性试验 阿托伐他汀钙于4种介质室温放置0、2、4、6、8、12 h，计算RSD分别为33.80%、2.55%、2.04%、1.28%。结果表明阿托伐他汀钙在pH值1.0盐酸溶液中不稳定，0、6、12 h分别降解约15%、50%和53%，在另3种溶出介质中12 h内稳定性良好。

2.2 方法学试验 阿托伐他汀钙在3种溶出介质（pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水）线性关系见表1，在0.997～39.88 g/ml范围内线性关系良好。3种溶出介质的RSD分别为1.11%、1.15%和1.71%，平均回收率分别为98.32%、99.17%和98.07%，均符合试验要求。

2.3 溶出度测定 不同厂家阿托伐他汀钙制剂在3种溶出介质的溶出度测定结果见封三彩图1～3。

2.4 溶出曲线评价 在溶出介质pH值6.8磷酸盐缓冲液和水中，原研药及A、B、C三个厂家的15 min溶出度均超过85%，可判定为溶出行为相似。在pH值4.5醋酸盐缓冲液中，与原研制剂比较A厂、B厂的f2值分别为73.94和76.01，可判定为溶出曲线相似，C厂f2值为41.26，判定为溶出行为存在差异。

3 讨论

有研究报道，阿托伐他汀钙在pH值1.0盐酸溶液中不稳定，迅速发生降解[5-6]，本文稳定性试验显示0、12 h阿托伐他汀钙降解分别达15%和53%。但与文献[5]报道结果不同，本研究发现阿托伐他汀钙在pH值1.0盐酸溶液中产生至少两个主要的降解产物，且降解产物与阿托伐他汀钙主峰面积未呈规律变化，峰面积和与药物浓度之间线性关系较差，无法准确测定阿托伐他汀钙在pH值1.0介质中的溶出量。因此，本文选择pH值4.5醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液和水作为溶出介质，分别考察阿托伐他汀钙片的质量。

本研究考察了纳入浙江省药品集中采购的全部阿托伐他汀钙片，包括原研药立普妥、国产仿制药A厂和B厂（均为通过仿制药一致性评价品种）、进口仿制药C厂。与原研药体外溶出研究比较，国产仿制药A厂、B厂具有完全相似的溶出行为，这与早期报道国产阿托伐他汀钙片的溶出速度显著慢于原研药的结果不同[7-8]；这表明近年随着我国大力推进仿制药一致性评价政策，国产仿制药企业通过对原研药的全面剖析和模拟，不断改进处方、辅料及生产工艺，仿制药水平得到大幅度提升。进口仿制药C厂的阿托伐他汀钙片，在pH值6.8磷酸盐缓冲液和水中的溶出行为与原研药相似，但在pH值4.5醋酸盐缓冲液存在差异，主要为前30 min的溶出慢于原研药，之后溶出无异，这是否影响体内生物利用度有待于进一步研究。

总之，本研究通过考察市售随机批号不同厂家的阿托伐他汀钙片体外溶出，所有产品均符合国家药品标准[WS1-（X-106）-2003Z]的溶出度检查要求，其中已通过一致性评价的国产仿制药在不同溶出介质中具有原研药完全相似的体外溶出行为，表明阿托伐他汀钙片的国内仿制药已经达到类似原研药的品质，为临床用药提供质量依据。