鬼灯笼提取物的体外抑菌实验
2019-11-13杨小良李瑶刘振飞
杨小良,李瑶,刘振飞
(广西中医药大学赛恩斯新医药学院,广西 南宁 530222)
鬼灯笼(ClerodendrumfortunatumL.)又名灯笼草,为马鞭草科植物白花灯笼的茎、叶,主产于广东、广西,微苦、微甘,性凉,有清热止咳、解毒消肿的功效,主治肺痨咳嗽、骨蒸潮热、跌打损伤、咽喉肿痛、疖肿疔疮。鬼灯笼根有清热解毒、凉血消肿的功效,主治感冒发热、咳嗽、咽痛、跌打肿痛[1]等。有研究表明,白花灯笼水提取物和醇提取物有较强的抗补体活性[2]。
鬼灯笼能治疗疖肿疔疮,但未见其抑菌研究的相关报道。为切合临床实际应用,本实验通过对鬼灯笼常用溶剂(水和70%乙醇)的提取物进行体外抑菌考察,初步研究其抗菌范围及所抗病原菌的最小浓度(MIC),为鬼灯笼的进一步研究和应用提供依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
RE52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);电热恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司);GI54DWS型高压蒸汽灭菌箱。
1.2 菌株及培养基
金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球耐药菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希杆菌、表皮葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、粪肠球菌、屎肠球菌、无乳链球菌和化脓性链球菌均为标准菌株,购自中国药品生物制品检定所;营养琼脂培养基(杭州滨和微生物试剂有限公司)。
1.3 药材
采自广西北流市,经广西植物所宁世江鉴定为马鞭草科植物白花灯笼(ClerodendrumfortunatumL.)的全株。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
鬼灯笼水提物:称取鬼灯笼药材粗粉20 g,加入10倍量的水冷浸1 h,煎煮2次,每次1 h,过滤,合并2次滤液,滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩,制成含药量为1 g/mL的药液,冷藏备用。
鬼灯笼70%乙醇提物:称取鬼灯笼药材粗粉20 g,加入10倍量的70%乙醇先冷浸1 h,然后回流提取2次,每次1 h,过滤,合并2次滤液,滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩,制成含药量为1 g/mL的药液,冷藏备用[3]。
将鬼灯笼水和70%乙醇提取物,各配制成含相当于原药材浓度为1 000 mg/mL, 500 mg/mL,250 mg/mL,125 mg/mL,62.5 mg/mL,31.3 mg/mL,15.6 mg/mL,7.8 mg/mL,3.9 mg/mL,1.9 mg/mL的浓度系列。
2.2 菌悬液的制备
将10种活化培养后的菌株接种于无选择性的LB琼脂培养基上,按照相应培养条件培养[4]。挑选新鲜菌落,悬浮于生理盐水中,振荡混匀,以0.5号麦氏比浊管为标准,调整细菌浓度为1.5×106cfu/mL的菌量,备用[5]。
2.3 纸片药敏实验
无菌条件下,将上述10种菌株混悬液分别接种到普通营养培养基表面,每种细菌平行接种3个平板,将药敏片贴于平板上,每个平板贴4片,其中一片为阴性对照。37 ℃ 培养 24 h,24 h后观察抑菌效果[6]。在纸片周围抑菌浓度范围内,测试菌的生长被抑制形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映了测试菌对鬼灯笼提取物的敏感程度[7]。
2.4 MIC实验
将定性滤纸制成的6 mm圆形纸片[8-9],灭菌烘干后,分别取若干纸片浸泡于上述20份溶液中2 h,烘干后备用;浸泡于无菌蒸馏水中做阴性对照,其他处理条件同前。
3 结果
鬼灯笼的水提物和70%乙醇提取物对革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌显著的抑制其生长,但对金黄色葡球耐药菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒沙门氏菌、粪肠球菌、屎肠球菌、无乳链球菌和化脓性链球菌则无抑制其生长的作用;而70%乙醇提取物对化脓性链球菌有一定抑制生长。结果见表1~表4。
表1鬼灯笼水、70%乙醇提取物对细菌抑制生长的影响
菌种类型抑菌环直径(mm)水提液浓度(1 000 mg/mL)70%乙醇提液浓度(1 000 mg/mL)无菌水金黄色葡萄球菌19.6522.080金黄色葡萄球耐药菌000铜绿假单菌000大肠埃希杆菌000表皮葡萄球菌22.6624.440伤寒沙门氏菌000粪肠球菌000屎肠球菌000无乳链球菌000化脓性链球菌07.280
表2鬼灯笼水提物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)
抑菌环直径(mm)金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00019.6522.6650019.4821.7525016.6119.8062.57.6917.6632.25010.9215.63007.81003.91001.9500000
表3鬼灯笼70%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)
抑菌环直径(mm)金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00022.0824.4450020.4123.8325011.4020.6262.510.6515.8532.25010.9215.6308.477.81003.91001.9500000
表4水和70%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)
供试菌水提物(mg/mL)70%乙醇提取物(mg/mL)金黄色葡萄球菌125125表皮葡萄球菌62.532.25
4 小结
鬼灯笼有清热止咳、解毒消肿的功效。体外抑菌实验结果表明,鬼灯笼水和70%乙醇提取物均对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均具有明显的抑菌作用,水和70%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为125 mg/mL;而对表皮葡萄球菌的最小抑菌浓度上有差别,水提物的最小抑菌浓度为62.5 mg/mL,70%乙醇提取物的最小抑菌浓度为32.25 mg/mL。鬼灯笼的水和70%乙醇提取物所含成分比较复杂,至于何种成分起作用有待下一步研究,本实验的研究结果将为鬼灯笼不同部位的抑菌能力考察提供一定依据。