不同炮制方法对藤三七珠芽总黄酮含量的影响
2019-11-13方镕泽王杰赵冉
方镕泽，王杰，赵冉
(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)
藤三七[Anrederacordifolia(Tenore)van steen]为落葵科(Basellaceae)植物藤三七(BoussingaultiagracilisMiers var.pseudobaselloides Bailey)的珠芽，别名洋落葵，又称落葵薯、川七、藤子三七、金钱珠、中枝莲和土三七等[1]，是一种近年来引进中国的药食同源的药用植物，原产地为巴西，目前在中国的云南、广东、福建、四川、浙江、江苏、北京等地均有分布。其味微苦，性温，具有滋补、活血补血、补益肝肾、消肿散瘀和壮腰健膝等功效，主治无名肿毒，外伤出血、吐血，腰膝无力等[2]。目前市场有用藤三七酒作为保健品使用，发挥消肿散瘀、补益肝肾的保健效果[3]。目前，国内外有关藤三七的化学成分研究还处于初级阶段，已有研究表明,藤三七的主要成分为皂苷类和黄酮类化合物，具有降血糖[4]、抗脂质过氧化[5]、抗菌消炎[6]、抗HIV[7]等药理活性。由于藤三七干燥时表面易发霉菌，在切片干燥时切面易发霉，变黑，因此此次研究采用蒸制、酒制等方法，用蒸制法验证是否能更好的进行药材储藏，酒蒸是验证在蒸制的基础上是否增加了药材的总黄酮含量，加强消肿散瘀的功效，为今后藤三七珠芽药材的充分利用提供参考依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器与试剂
紫外可见分光光度计(日本岛津公司，型号：UV-2700);水浴锅(常州国华电器有限公司，型号：HH-6);十万分之一电子分析天平(日本岛津公司，型号：AUW120D);万分之一电子分析天平(上海佑科仪器仪表有限公司，型号：YS1609256)。
氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠为市售分析纯；对照品：芦丁对照品(贵州迪大科技有限责任公司，纯度≥98.0%)。
1.2 样品来源及处理
藤三七药材采自贵阳市花溪区贵州中医药大学后山田边，由贵州中医药大学方药教研室赵冉副教授鉴定为藤三七珠芽(BoussingaultiagracilisMiers var.pseudobaselloides Bailey)。
生品：将新鲜藤三七珠芽分为三份，切成厚片，将生品放于40 ℃烘箱，烘干。
蒸制品：将新鲜藤三七珠芽烘至六成干，蒸制透心即可。
酒蒸品：将新鲜藤三七珠芽烘至六成干，用黄酒闷润0.5 h，再蒸至透心。将炮制的藤三七放于40 ℃烘箱中，烘干，打粉过2号筛，备用。
2 方法与结果
2.1 总黄酮的测定方法
精密移取藤三七珠芽滤液5 mL，置于25 mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠1 mL，摇匀，放置6 min，再加10%硝酸铝1 mL，摇匀，放置6 min，再加4%的氢氧化钠10 mL，加40%的乙醇稀释到刻度，放置15 min，以亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠试剂为空白参比液，在400～800 nm之间扫描，结果供试品溶液在510 nm处有最大吸收。
2.2 总黄酮含量的测定
2.2.1 对照品的制备
精密称取芦丁11.09 mg，置于25 mL的容量瓶中，加入40%的乙醇溶液，超声20 min，再加入乙醇定容至刻度制成0.443 6 mg/mL芦丁对照溶液即可。
2.2.2 供试品的制备
精密称定藤三七珠芽粉末2 g，置于锥形瓶中，加入40%的乙醇50 mL，静置1 h，称定质量，再置于80 ℃水浴回流2次，每次1 h，取出，放冷，用40%的乙醇补重后，离心过滤，取5 mL滤液置于25 mL容量瓶中待用。
2.2.3 标准曲线的绘制
精密取芦丁对照品溶液1 mL、2 mL、2.5 mL、3 mL、3.5 mL、4 mL置于25 mL容量瓶中，按照“2.1”项下的操作方法进行显色后，用乙醇溶液定容至刻度，测定吸光度A，以芦丁浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标，得到回归方程Y=9.813X+0.028 7(r=0.999 3)，说明芦丁对照品在0.017 74～0.070 98 mg/mL范围内呈良好线性关系，如图1所示。
2.2.4 精密度试验
精密量取供试品(生品藤三七)的提取滤液，连续测定6次，得出吸光度，计算RSD值，由实验数据可知其RSD<3.0%，说明仪器精密度良好。其结果如表1所示。
图1 藤三七总黄酮标准曲线
表1精密度试验
编号吸光度吸光度平均值RSD(%)10.34320.34730.3490.3421.7540.33350.34560.338
2.2.5 重复性试验
精密称取6份藤三七珠芽(生品)粉末约2 g，依次测定吸光度，计算RSD值，其结果如表2所示。由实验数据可知其RSD<3.0%,说明该实验方法重复性较好。
表2重复性试验
编号吸光度A吸光度平均值RSD(%)10.33320.35230.3610.3462.8440.34450.34760.339
2.2.6 稳定性试验
取同一份供试品滤液，测定10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min的吸光度，计算RSD值，由实验可知其RSD<3.0%，说明样品在1 h内稳定性较好，结果如表3所示。
表3稳定性试验
时间(min)吸光度A吸光度平均值RSD(%)100.341200.333300.3360.3312.10400.329500.328600.321
2.2.7 加样回收试验
取6份已知总黄酮含量的藤三七珠芽药材，精密称定约0.25 g，加入与其藤三七珠芽总黄酮含量比为1∶0.5，1∶1的芦丁对照品，按上述方法“2.2.2”项下进行提取后，取5mL按方法“2.1”项下进行显色后测定其吸光度，计算其回收率，结果如表4所示。
2.2.8 样品含量的测定
取生品及炮制品藤三七珠芽2 g，按方法“2.2.2”项下制备供试品，按方法“2.1”项下进行显色，测定吸光度，计算含量。其实验结果如表5所示。
表4加样回收试验
编号藤三七珠芽质量(g)瓜蒌总黄酮含量(mg)加入对照品量(mg)吸光度A检测含量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)10.250 110.105.110.60214.6288.4320.250 510.125.010.61514.9596.5030.251 110.145.150.62115.1196.3793.433.2440.250 810.1310.260.80119.7093.2450.250 710.1310.090.79819.6294.0960.250 510.1210.170.79219.4791.93
表5各总黄酮含量测定结果
样品称样量(g)吸光度A总黄酮含量(%)总黄酮均值(%)RSD(%)生品2.001 90.3383.942.000 20.3484.073.991.672.000 90.3413.98蒸制2.001 20.2112.322.001 60.2062.262.253.352.001 60.1992.17酒蒸2.000 70.2372.662.000 90.2272.532.554.162.001 10.2152.37
3 讨论
藤三七珠芽成份主要是皂苷类和黄酮类，且本身含有大量黏液质、在整个珠芽进行干燥时效果不好，贮存时易发黑发霉，所以本实验将藤三七珠芽进行蒸制，目的是起到杀酶保苷的作用，又由于该药材可用于活血化瘀，所以在蒸制的基础上验证酒蒸是否增加总黄酮含量，更有利于活血化瘀。在供试品制备时将其进行离心，其目的是由于所含黏液质较多，在过滤上造成较大的困难，因此用离心的方法，取其上清液进行过滤使用。在提取上，选用了30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇作比较，结果发现在同等条件下用40%乙醇提取的吸光度较大，在比较料液比1∶20，1∶25、1∶30时，发现当料液比在1∶25时，所提取的的总黄酮含量最大，所以本试验选用40%的乙醇进行提取，料液比为1∶25，且在料液比为1∶25时，离心的效果较好。实验结果表明，藤三七珠芽通过蒸制后，其总黄酮含量降低，但进行贮存的效果却优于生品。而酒蒸后的藤三七珠芽，其总黄酮含量略高于蒸制，其干燥贮存效果也优于生品与蒸制。
