无创产前检测胎儿染色体拷贝数变异的临床价值初探

韩华 魏新亭 吴菊花

【摘 要】目的：探讨无创产前检测（NIPT）胎儿染色体拷贝数变异的临床应用价值。方法：对2016年3月-2018年10月期间孕中期接受NIPT的5103例孕妇资料进行分析，对检测提示胎儿CNVS的孕妇实施介入性产前诊断脐血/羊水染色体G显带核型分析，进行高通量测序（NGS）基因组拷贝数分析，并对介入性产前诊断结果与NIPT检查发现的CNVs一致性进行分析。结果：5103例接受NIPT检查的孕妇中有17例提示CNVs，阳性率为0.33%，有13例产妇接受介入性产前诊断，确诊为CNVs胎儿7例，阳性预测值为53.85%。结论：NIPT检查能筛查出部分有临床意义CNVs胎儿，可作为常规检查手段，为提高产前筛查准确性，对NIPT检查提示为CNVs高风险者，应进行介入性产前诊断。

【关键词】无创产前检测;临床价值;染色体拷贝数变异;产前筛查

【中图分类号】R715.5【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2019）23--01

随着高通量测序技术的发展，该技术的精度得到提升，该项技术在对常见非整倍体筛查时发现胎儿基因组拷贝数变异（CNVs），而致病性的CNVs会导致胎儿微重复综合征/微缺失综合征（MDs），MDs种类多且十分复杂，且目前该疾病的发病机制尚不明确，患者临床主要表现有器官畸形、智力发育迟缓、生长发育异常、代谢性疾病、肿瘤、精神行为改变等。为了探讨NIPT在产前筛查中的应用价值，本文对在我院应用该项技术检测的孕妇临床资料进行分析，并比较NIPT检测异常结果与接受介入性产前诊断结果[1]，详细情况如下文所述：

1 临床资料与方法

1.1 临床资料

选取2016年3月-2018年10月在我院接受NIPT检查的孕中期孕妇5103例为研究对象，纳入孕妇年龄在18-49岁之间，平均（28.06±3.97）岁，孕周在15-20周之间，平均孕周为（18.35±1.01）周。

1.2 方法

抽取孕妇外周血5ml进行NIPT检查，对检查结果疑似胎儿CNVs的孕妇开展科学、认真的遗传咨询，并建议孕妇接受脐血穿刺术或羊膜腔穿刺术取样进行产前诊断。介入术前均有经验丰富的超声医师进行超声检查，抽取2ml脐血或20ml羊水，送至遗传诊断中心对胎儿染色体核型进行分析及低深度全基因组测序（CNV-seq）。抽取确诊为CNVs胎儿的父母4ml外周血，进行外周血染色体核型分析以及CNV-seq。

1.3 统计学分析

对孕妇基本信息及筛查结果应用Excel表格进行记录，并分析NIPT检查诊断阳性率、准确率。

2 结果

2.1 NIPT筛查结果

5103例接受NIPT产前筛查的孕妇，筛查结果有17例孕妇疑似CNVs，筛查阳性率为，阳性率为0.33%，有13例产妇接受介入性产前诊断，所占比例为76.47%。

2.2 产前筛查结果

接受介入性产前诊断的13例产妇中，确诊为CNVs胎儿7例，阳性预测值为53.85%，其中有5例致病变异为微缺失/微重复综合征MDs，这5例患者中有4例合并染色体结构异常，处于常染色质区域，检出区域覆盖功能基因。5例患者中有4例微缺失，微重复1例。对父母外周血染色体、基因结果证实，有4例为新发变异，1例证实为父系来源。

3 讨论

我国是出生缺陷率较高的国家之一，出生缺陷会给患儿家庭以及社会带来沉重的负担，为了有效降低缺陷儿出生率，做好产前筛查非常必要、产前筛查是对胎儿是否患有某种遗传性疾病或先天畸形进行预测的方法，借助生物化学、现代生物学、细胞遗传学、免疫遗传学、分子遗传学等技术，经母体或对胚胎/胎儿直接进行检测，来判断胎儿是否存在先天畸形或存在遗传缺陷。染色体异常是指染色体结构或数目发生异常，各种“致病因素”作用与卵子、精子以及早期卵裂球，导致数百亿种类型的基因发生突变或导致染色体畸形[2]，临床常见的染色体疾病有18-三体综合征、21-三体综合征、性染色体数目异常、13-三体综合征以及各种类型染色体结构异常，其中前4种类型在染色体疾病中所占比例高达95%[3]。大量研究表明，染色体异常是导致新生儿缺陷的主要原因之一，现阶段染色体疾病无有效的治疗方法，故有效的产前筛查是降低缺陷兒出生率的重要手段。

新生儿缺陷无论对家庭还是社会来说，都是一个沉重的负担，近几年受各种因素影响，我国缺陷儿出生率在逐渐升高，为了降低缺陷儿出生率，做好产前筛查非常必要。随着人们优生优育意识的提高，遗传因素在生殖发育异常诊疗中受到人们更多关注，以往进行产前筛查，主要通过分析孕妇年龄、孕史、家族史、超声筛查、血清学筛查，以筛查出胎儿染色体异常的孕妇，然后对高危孕妇进行介入性产前诊断，包含脐带血穿刺、羊水穿刺以及绒毛穿刺，通过细胞培养染色体核型分析，诊断胎儿染色体是否存在异常。该产前筛查技术存在着许多不足，漏诊率较高，直接影响了产前诊断质量，为了最大限度的降低缺陷儿出生率，提高产前筛查精准度势在必行。

CNVs是指长度在1kb以上的染色体片段拷贝数量减少或增加，主要表现为亚显微水平重复、缺失或倒置等变异，有学者认为，该现象与改变基因结构、CNVs本身的剂量效应、影响基因表达水平、CNVs远距离调控等对表型产生调控作用有关，本次研究，确诊的7例CNVs中有5例为MDs，其MDs片段均处于常染色质区域，检出区域均覆盖了功能基因，该结果说明，此次研究MDs的产生与CNVs数目本身剂量效应关系不强。以往使用的染色体核型分析，分辨率低，只能对8Mb-10Mb及以上的染色体片段重复或缺失进行观察，精准度低，漏诊率较高。随着医学技术的发展与成熟，产前筛查精准度大幅度提升[4]。NIPT检测中CNVs假阳性产生的原因与母体DNA干扰存在较大关联，这是因为胎儿游离DNA（cff-DNA）检测的DNA片段来自胎盘绒毛外层凋亡的滋养层细胞，因此，若存在限制性胎盘嵌合体，NIPT检测便会显示异常。因此，虽然介入性产前诊断虽然存在一定安全隐患，可能会增加流产风险，但是该项检查仍然是现阶段确诊CNVs的唯一的有效方法[5]。近几年，随着测序技术的不断改进，生物信息分析软件的成熟以及更多大样本的研究，相信在不久的将来能出现更准确、合理的CNVs筛查技术。

对已经确诊的CNVs父母进行遗传咨询，遗传咨询通过告知孕妇、家属携带CNVs的胎儿可能会发生的临床表现及预后，在让孕妇及家属知情后进行选择。

进行CNVs产前诊断结果进行遗传咨询与建议

（1）可能致病的CNVs是经文献报道但未能得到证实或共识的，若来源与双亲中的一方，则患病风险较低[6];

（2）致病性CNVs是经多人、多项研究报道并证实，会导致MDs的CNVs，有明确的致病性且会严重影响发育，应在对父母进行遗传咨询时明确告知不良的预后风险，让父母共同选择[7];

（3）临床意义不明的致病，父母表型正常，生物信息学分析难以给出明确的致病证据，单胎儿出现临床意义不明的CNVs时，建议父母双方进行外周血染色体检查、CNVs检查，若双亲或双亲中的一方表型正常，则患病风险较低。若疑似新发生变异，则需结果父母二人生育史、既往史、胎儿超声检查结果进行综合分析;

（4）正常多态性在健康人群中存在，尤其是表型正常的父母携带，不需进行特殊处理[8]。

综上所述，本次研究，5103例接受NIPT检查的孕妇中有17例提示CNVs，阳性率为0.33%，有13例产妇接受介入性产前诊断，确诊为CNVs胎儿7例，阳性预测值为53.85%。 以上研究结果充分说明，NIPT检查能筛查出部分有临床意义CNVs胎儿，可作为常规检查手段，但仍然有较高的假阳性率，为提高产前筛查准确性，对NIPT检查提示为CNVs高风险者，应进行介入性产前诊断【9-10】。

参考文献

王晨虹，林胜谋，李胜利. 胎儿染色体异常的产前超声分析与风险评估[J]. 现代妇产科进展，2008，17（9）：641-646.

吴莉，陈敏，钟进，宋春林，朱晓丹，伍秋艳.无创产前检测进行染色体缺失或重复检测的临床应用价值[J].实用妇产科杂志，2017，33（08）：622-625.

李彪.无创DNA产前检测对胎儿唐氏综合征的临床诊断价值分析[J].中国医药指南，2017，15（21）：56.

李琼. 2例无创产前检测胎儿染色体非整倍体假阴性探讨[A]. WHO遗传病社区防控中心.第十届全国遗传病診断与产前诊断学术交流会暨海峡两岸医药卫生交流协会遗传与生殖专业委员会第一届年会论文汇编[C].WHO遗传病社区防控中心：中国医学科学院基础医学研究所，2016：1.

朱湘玉. 拷贝数变异检测技术在先天性心脏病产前遗传学诊断中的应用研究[D].南京大学，2016.

赵和永. 全基因组拷贝数变异检测在产前高通量测序异常信号分析中的应用研究[D].山东大学，2015.

符芳. 微阵列比较基因组杂交技术在诊断和产前诊断不平衡染色体畸变中的应用[D].广州医学院，2010.

曾懿. 结合多重连接探针扩增的液相悬浮芯片技术应用于染色体非整倍体异常检测[D].厦门大学，2009.

刘锦平，李亮，王静. 胎儿右位主动脉弓与染色体异常的相关性分析[J]. 国际儿科学杂志，2016，43（2）：141-144.

黎新艳，田晓先，晁桂华，韦波. 产前超声诊断胎儿先天性心脏畸形与染色体异常的关系[J]. 临床超声医学杂志，2012，14（4）：263-265.