482例不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体感染状况分析

游洲，鲁锦志,黄庆，易村犍

长江大学第一临床医学院 荆州市第一人民医院妇产科，湖北 荆州 434000

随着我国二孩政策开放，生育需求逐渐增加，然而不孕不育的发生率逐渐增高，如何防治不孕不育成为目前生殖医学关注的热点问题。目前研究表明，引起不孕不育的原因很多，感染因素是其中之一。有文献报道，在不孕不育患者中，解脲支原体(Ureaplasma urealyticum, UU)和沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, CT) 感染率增高[1～3]，解脲支原体及沙眼衣原体感染与不孕不育的关系也成为很多研究者及临床工作者关注的问题。解脲支原体和沙眼衣原体是常见生殖道感染病原体，人体感染UU和CT可造成极大危害。UU和CT感染可使男性患前列腺炎、附睾炎、睾丸炎、精囊炎和尿道炎等，女性感染后可出现严重并发症，如盆腔炎、输卵管妊娠、子宫内膜炎等[4,5]。然而感染UU和CT是否为不孕不育病因之一，目前尚未定论。本研究收集不孕不育患者生殖道分泌物标本，采用实时荧光定量PCR技术检测UU和CT，并进行统计学分析，拟明确生殖道解脲支原体和沙眼衣原体感染与不孕不育的相关性，为不孕不育的临床防治提供相关指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2016年12月于荆州市第一人民医院生殖中心诊治的不孕不育患者作为不孕不育组。选取标准：1年以上正常性生活，未采取任何避孕措施而未妊娠者；排除标准：女性排除先天性不孕因素、子宫内膜异位症、排卵障碍及内分泌失调，男性排除无精症、少精症、单纯精浆变、性功能障碍和遗传因素。不孕不育组：年龄19～45岁，均龄(29.3±4.7)岁，男性患者181例，女性患者301例，含夫妇91对；另随机抽取妇科门诊同时期已育健康体检者842例为对照组：年龄19～50岁，均龄(31.2±6.3)岁，男性463例，女性379例。两组年龄差异无统计学意义(P>0.05)。调查者均已签署知情同意书并自愿参与此研究，医院伦理委员会审查通过。

1.2 试剂和仪器

1)仪器 BYQ6007E-380恒温金属浴，AgilentStratagene MX3000P型实时荧光定量PCR仪，XW-80A漩涡混匀器，TG1WS台式高速离心机。

2)试剂 解脲支原体核酸与沙眼衣原体核酸检测试剂盒，均购于上海复星长征医学科学有限公司(UU批号：20160802，CT批号：20160301)。

1.3 取材

1)女性标本 用阴道窥器充分暴露子宫颈，先用无菌棉签将宫颈外口分泌物拭净，再将一次性专用无菌棉拭子伸入宫颈口内1～2cm，旋转1周，停留约10s后取出(应略带粘膜)。为避免污染，拭子不能碰到宫颈外及阴道壁，将分泌物置于无菌配套样本管，用无菌棉球将试管塞紧，将标本立即封闭送检。

2)男性标本 将一次性男性专用拭子伸入尿道口内1～2cm，旋转1周，停留约10s后取出(应略带粘膜)置于无菌配套样本管，用无菌棉球将试管塞紧，将标本立即封闭送检。

1.4 检测方法

1)标本处理 将棉拭子从生物安全柜取出后置于EP管内，用1mL无菌生理盐水漂洗样本后去掉棉拭子转移至1.5mL EP管中。

2)DNA提取 吸取漂洗液200μL，将EP管放入离心机内以13000r/min离心10min，小心弃上清，可保留10～15μL残液，100℃加热裂解10 min，13000r/min离心10min，取样品上清液4μL，加入反应管中。

3) DNA的扩增过程 将分别含4μL标本DNA、校准品及质控品DNA的反应管置于离心机以5000r/min以内转速离心后放入全自动荧光定量PCR仪进行扩增，每次检测均分为空白对照、阴性对照及阳性对照。PCR仪参数设定：93℃ 3min预变；93℃ 45s后进入55℃ 1min持续10个循环当做荧光本底信号；93℃ 30s后进入55℃ 45s持续30个循环，在55℃时收集荧光。

4)结果判定 扩增结果以Ct值表示。如果增长曲线不呈S型或Ct≥40，结果为阴性，不呈S型表示样品DNA含量低于检测下限；如果增长曲线呈S型且Ct≤38，则结果为阳性；38

1.5 统计学分析

用SPSS22.0软件处理、分析数据，计数资料比较采用χ2检验，不孕不育组夫妻间感染解脲支原体、沙眼支原体则采用相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的病原体感染率比较

不孕不育组共检出UU感染296例，阳性率为61.4%(296/482)，对照组检出UU感染344例，阳性率为40.9%(344/842)。 两组比较，不孕不育组UU感染率明显较高(χ2=51.865，P<0.05)，差异有统计学意义；不孕不育组共检出CT感染26例，阳性率为5.4%(26/482)，对照组检出CT感染19例，阳性率为2.3%(19/842)。两组比较，不孕不育组CT感染率明显较高(χ2=9.191，P<0.05)，差异有统计学意义。见表1。

表1 两组患者的病原体感染率比较

2.2 不孕不育组夫妻间感染解脲支原体的相关性分析

不孕不育组91对夫妻中丈夫UU感染率为15.4%(14/91)，妻子感染率为48.4%(44/91)。夫妻间感染UU不具有相关性(r=0.075，P>0.05)。见表2。

2.3 不孕不育组夫妻间感染沙眼衣原体的相关性分析

不孕不育组91对夫妻中丈夫CT感染率为9.9%(9/91)，妻子感染率为11.0%(10/91)。夫妻间感染CT具有相关性(r=0.707，P<0.05)。见表3。

表2 不孕不育组夫妻间感染解脲支原体的相关性分析

注：r=0.075，P>0.05。

表3 不孕不育组夫妻间感染沙眼衣原体的相关性分析

注：r=0.707，P<0.05。

3 讨论

不孕不育症是目前很多已婚夫妇生育所面临的严重问题，其发病率因国家、民族和地区不同而异。据世界卫生组织统计，发达国家5%～8%的育龄夫妇存在不孕不育问题，发展中国家更严重，高达30%[6]。不孕不育发病原因有很多种，如阴道因素、宫颈因素、内分泌因素、精神神经因素等。生殖道病原体感染是影响健康生育的原因之一[7,8]，而UU和CT是引起生殖道感染的主要病原体，两者均为介于病毒、细菌之间的一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，常寄生于男女泌尿生殖道。在欧美国家，UU和CT感染引起的性传播疾病名列第一位[9]，而我国，UU和CT感染逐年增加，已位于生殖道感染的前列，其中UU感染率普遍比CT高[10]。

本研究结果显示，不孕不育组UU感染率为61.4%(296/482)，对照组UU感染率为40.9%(344/842)，两组对比显示不孕不育组UU感染率明显较高(χ2=51.865，P<0.05)；不孕不育组CT感染率为5.4%(26/482)，对照组CT感染率为2.3%(19/842)，两组对比显示不孕不育组CT感染率明显较高(χ2=9.191，P<0.05)。该结果与张建平等[11]人的研究结果一致，在他们的研究中不孕不育组UU感染率为47.8%，对照组UU感染率为4.0%，不孕不育组CT感染率为6.6%，对照组CT感染率为2.0%。这两组数据提示UU和CT感染与不孕不育的发生可能存在致密联系。另外，在本研究中不孕不育组及对照组，UU阳性率都偏高(61.4%、40.9%)，这可能和不同地区人的生活习惯和地域环境有关，也可能和夫妻年轻化有关。CT总体感染率偏低，可能UU相对CT而言更容易被人体感染，与其各自的感染方式有关。解脲支原体粘附并定居在人体的泌尿生殖道上皮细胞[12]，可侵入单核巨噬系统细胞，在细胞内增殖[13]。UU具有很强的黏附性，可使其吸取上皮细胞膜的脂质和胆固醇，损伤正常细胞膜结构，对上皮细胞造成损伤，破坏细胞粘膜屏障结构，引发生殖道感染；沙眼衣原体感染人体后，主要在宫颈、尿道及精液中存活，通过性接触、直接体液接触等途经传播。UU与CT感染方式的不同，可能导致感染率的不同，具体原因需进一步研究。

此外本研究结果还显示，不孕不育组91对夫妻中丈夫UU感染率为15.4%，妻子UU感染率为48.4%，夫妻间感染UU不具有相关性。然而赵本书等[14]人研究指出夫妻间感染UU具有相关性，本研究与其结果并不一致，这可能与夫妻间的生活习惯、生活环境有关，也可能与男、女生殖器结构不同，个体间的免疫力差异有关；而不孕不育组91对夫妻间中，丈夫CT感染率为9.9%，妻子CT感染率为11.0%，夫妻间感染CT具有相关性，这个结果与赵本书等人的结果一致。要进一步明确本地区夫妻间感染UU和CT的相关性，可能需要扩大调查范围或需要更大的样本量。

临床患者感染UU或CT后常无症状或仅有轻微症状，常忽略就医，从而延误患者治疗时机，导致慢性感染或反复感染，进一步加重生殖道的损伤，引起不孕不育的发生[15]。本研究证实UU和CT感染和不育不孕之间存在一定相关性，为下步研究UU和CT引起不孕不育机制提供了理论依据。另外有文献报道，UU和CT感染阳性患者经治疗后转阴，妊娠率显著高于未转阴者[16]。因此，临床上将UU和CT也作为孕前筛查项目，对不孕不育夫妇双方进行检测，可以提高不孕不育诊疗效果。

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