基质金属蛋白酶⁃9、基质金属蛋白酶组织抑制剂⁃1测定在慢性肾衰竭患者中的变化

解 冰，江利萍，王 军，夏 商 （江苏省镇江市丹徒区中医院，江苏镇江212028）

基质金属蛋白酶⁃9、基质金属蛋白酶组织抑制剂⁃1测定在慢性肾衰竭患者中的变化

解 冰，江利萍，王 军，夏 商 （江苏省镇江市丹徒区中医院，江苏镇江212028）

目的：测定基质金属蛋白酶（MMPs）和基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）在慢性肾衰竭患者中的结果，以期了解这两种物质在慢性肾衰竭病变中的作用．方法：选择不同期的慢性肾衰竭患者作为研究对象，采用ELISA法测定血清中的MMP⁃9和TIMP⁃1的浓度．结果：血清中MMP⁃9虽然在CRF病例中较高但方差分析提示，差异无统计学意义（P＞0．05）；血清TIMP⁃1的结果按肾功能衰竭的程度呈上升趋势，以CRFⅣ组的结果为最高，CRFⅠ组最低，组间比较差异有统计学意义（P＜0．001）；尿液中TIMP⁃1的结果以CRFⅣ组的结果为最高，CRFⅠ组最低，组间比较差异有统计学意义（P＜0．001）．慢性肾衰竭患者除CRFⅠ组α1⁃MG、β2⁃MG指标外，其余指标均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）．结论：通过检测血清MMP⁃9、TIMP⁃1以及尿液TIMP⁃1的浓度可以更好地了解慢性肾衰竭的程度和肾间质纤维化的形成原因．

MMP⁃9；TIMP⁃1；慢性肾衰竭；肾功能；肾间质纤维化；肾小管标志物

0 引言

肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）几乎是所有肾脏疾病发展的最终结果，其形成受细胞外基质（extracellular matrix，ECM）影响，最终结局是大量ECM的过度积聚形成纤维化，导致肾衰竭进入终未期肾衰．近年来对肾间质纤维化研究关于细胞外基质降解的内容较多，其中基质金属蛋白酶（matrix metallo proteinases，MMPs）是最重要的一种，基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of matrix metallo proteinases，TIMPs）是一组特异性抑制因子［1］；MMPs／TIMPs平衡失调是肾间质纤维化发病的关键．本研究通过分析慢性肾衰竭各期患者血清中MMP⁃9、TIMP⁃1及尿液中TIMP⁃1的浓度，以期了解其对肾脏病发病的意义，现报道如下．

1 资料和方法

1．1 一般资料选择2013－06／2016－06江苏省镇江市丹徒区中医院住院患者160例，其中男97例，女63例．平均年龄（43．6±15．7）岁．其中慢性肾衰竭Ⅰ期（CRFⅠ）39例；CRFⅡ期74例；CRFⅢ期34例；CRFⅣ期13例．所有病例诊断均符合中国中西医结合学会肾脏病诊断与治疗及疗效标准［2］．正常对照组20例．

1．2 标本留取血清标本抽取新入院患者空腹血，及时分离血清置－70℃冰箱保存；尿液采用二次晨尿法留取标本，取10 mL离心后再取上清液1 mL置－70℃冰箱保存．测定时放37℃水浴箱速融，检测过程避免反复冻融．

1．3 仪器BS⁃200全自动生化分析仪（深圳迈瑞）；ST⁃360酶标仪（上海科华）；MF⁃192深低温冰箱（日本三洋）．

1．4 试剂及测定方法MMP⁃9、TIMP⁃1采用ELISA法，由武汉华美生物工程有限公司提供的CUSABIO（美国）试剂，由专人严格按试剂盒说明书操作；肾功能指标如BUN、Cr、胱抑素C（CysC）、UA等均采用常规方法在生化分析仪上操作；肾小管标志物α1⁃MG采用胶乳增强免疫比浊法（试剂购自浙江夸克生物科技有限公司）、β2⁃MG采用比浊法，（试剂购自宁波美康生物科技股份有限公司）．1．5 统计学处理采用SPSS13．0统计学软件进行数据分析，计量资料采用±s表示，组间比较采用一维方差分析，P＜0．05表示差异具有统计学意义．

2 结果

血清MMP⁃9浓度比较，虽然CRF组中浓度较高，但方差分析提示差异无统计学意义（P＞0．05）；血清TIMP⁃1浓度比较，肾功能衰竭的程度均呈上升趋势，其中CRFⅣ组浓度最高，CRFⅠ组浓度最低，组间比较差异有统计学意义（P＜0．001）；尿液中TIMP⁃1浓度比较，CRFⅣ组最高，CRFⅠ组最低，组间比较差异有统计学意义（P＜0．001，表1）．慢性肾衰竭患者除CRFI组α1⁃MG、β2⁃MG指标外，其余指标均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05，表2、3）．

表1 MMP⁃9、TIMP⁃1、尿TIMP⁃1结果 （±s）

表1 MMP⁃9、TIMP⁃1、尿TIMP⁃1结果 （±s）

aP＜0．05 vs对照组．

组别 n 血清MMP⁃9（ng／mL）血清TIMP⁃1（ng／mL）尿液TIMP⁃1（pg／mL）CRFⅠ组 39 1．19±0．84 2．67±1．24a 802．3±399．6aCRFⅡ组 74 1．05±0．83 3．91±2．22a 3223．1±1403．8aCRFⅢ组 34 1．01±0．57 5．60±2．91a 8353．1±3126．3aCRFⅣ组 13 0．69±0．39 6．70±3．61a 12915．9±4890．5a对照组 20 0．82±0．28 0．86±0．48 78．1±38．1

表2 各组肾功能的结果 （±s）

表2 各组肾功能的结果 （±s）

aP＜0．05 vs对照组．

组别 n BUN（mg／dL）Cr（mg／dL）CysC（mg／L）UA（μmol／L）CRFⅠ组 39 27．28±11．57a 1．65±0．80a 1．97±0．54a 417．4±124．6aCRFⅡ组 74 42．93±13．80a 3．02±0．80a 2．79±0．61a 427．5±94．8aCRFⅢ组 34 68．20±21．30a 5．61±1．05a 4．02±1．32a 470．7±102．8aCRFⅣ组 13 90．30±21．90a 9．03±2．92a 4．59±1．88a 431．2±112．3a对照组 20 12．10±3．56 0．85±0．23 0．95±0．21 302．3±62．5

表3 各组尿液肾小管标志物的结果 （±s）

表3 各组尿液肾小管标志物的结果 （±s）

aP＜0．05 vs对照组．

组别 n α1⁃MG（mg／L） β2⁃MG（mg／L） NAG（U／L）CRFⅠ组 39 16．50±12．60 1．14±0．79 20．65±15．50aCRFⅡ组 74 26．00±18．30a 4．46±3．21a 24．60±12．00aCRFⅢ组 34 49．70±25．60a 7．02±5．34a 27．00±9．33aCRFⅣ组 13 40．30±22．80a 6．18±4．22a 19．80±9．77a对照组 20 7．60±4．86 0．18±0．16 8．52±3．45

3 讨论

研究表明，MMPs／TIMPs的平衡失调与肾间质纤维化间存在相关性，肾功能衰竭患者无论病因如何，最终均表现为血清TIMP⁃1和尿液TIMP⁃1含量增高；且TIMP⁃1的高表达更为重要［1，3］．虽有研究发现肾脏病患者肾小管间质MMP⁃9表达较正常组显著增强，间质纤维化程度越重则其表达越弱［4－5］，但本研究血清MMP⁃9的结果组间差异不大．有文献［6－7］报道认为肾小管间质TIMP⁃1的表达与病变肾小管肾间质呈显著正相关，这和本研究结果较为相似，表明TIMP⁃1表达增高，导致ECM降解减少，最终导致肾组织纤维化的发生．所以TIMP⁃1在肾间质纤维化的发生中起着不可替代的作用．曹灵等［8］研究发现TIMP⁃1升高参与了肾小球基底膜和肾小管基底膜的增厚，在膜性肾病的发病机理中起着重要作用．

所以使用相应的药物特别是中药来起着提升MMP⁃9，抑制TIMP⁃1的作用，缓解肾间质的纤维化，从而延迟进入终未期肾衰，一直是临床工作的追求．叶婷婷［9］研究发现，肾炎康复片可以下调TIMP⁃1在UUO模型SD大鼠肾间质中的表达，从而延缓肾间质纤维化的进展．有研究使用肾衰康胶囊、保元强肾I号、等药物治疗慢性肾衰竭患者均取得较好疗效［10－12］；另外，还有研究发现中药对抗肾脏纤维化有着较为重要的作用［13－15］．肾衰康胶囊、保元强肾I号均是本院制剂，已取得了省药监局的批文．

本研究探讨了MMP⁃9和TIMP⁃1在慢性肾衰竭患者中的表达，但对于中药对MMP⁃9和TIMP⁃1的作用机制仍有待进一步研究．

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The expression of matrix metalloproteinase⁃9 and tissue inhibitor of matrix metalloprotein⁃ase⁃1 in patients with chronic renal failure

XIE Bing，JIANG Li⁃Ping，WANG Jun，XIA Shang
Hospital of traditional Chinese Medicine of Dantu District，Zhen⁃jiang 212028，China

AIM：To investigate the effect of matrix metallopro⁃teinase⁃9（MMP⁃9） and tissue inhibitor of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase⁃9（TIMP⁃1）in the pathological changes of chronic renal failure by measuring the expression of MMP⁃9 and TIMP⁃1 in patients with chronic renal failure．METHODS：The concentration of MMP⁃9 and TIMP⁃1 in serum was determined by ELISA method in patients with different stages of chronic renal failure．RESULTS：The serum level of MMP⁃9 had no significant differences among different groups（P＞0．05），the serum and urine level of TIMP⁃1 had an ascending tendency with the severity of renal failure，and there were significant differences among different groups（P＜0．05）．All index except α1⁃MG and β2⁃MG in patients with chronic renal failure were significantly higher than those of control group（P＜0．05）．CONCLUSION：Through the detection of serum MMP⁃9，TIMP⁃1 and urine TIMP⁃1 concentra⁃tions，we can better understand the degree of chronic renal failure and the formation of renal interstitial fibrosis．

MMP⁃9；TIMP⁃1；Renal function；Renal interstitial fibrosis；Renal tubular markers

R692

A

2095⁃6894（2017）02⁃37⁃03

2016－11－22；接受日期：2016－12－15

解 冰．E⁃mail：499156048＠qq．com