百令胶囊影响肾血管性高血压患者Klotho基因和肾功能的机制分析*

陈少秀张秋芳何华琼△

（1.湖北省十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院，湖北 十堰 442000；2.湖北医药学院，湖北 十堰 442000）

百令胶囊影响肾血管性高血压患者Klotho基因和肾功能的机制分析*

陈少秀1张秋芳2何华琼2△

（1.湖北省十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院，湖北 十堰 442000；2.湖北医药学院，湖北 十堰 442000）

目的 观察百令胶囊对肾血管性高血压（RVH）患者Klotho基因和肾功能的影响。方法 142例患者按入院先后顺序随机分为常规治疗组72例和联合治疗组70例。常规治疗组剔除介入和手术病例后进行保守治疗；联合治疗组在此基础上加服百令胶囊。两组均于治疗21 d时采血分析Klotho蛋白和Klotho-mRNA表达，检测Klotho基因凋亡相关基因p21和p53表达，比较尿液中β2微球蛋白 （β2-MG）、尿微量白蛋白（mAlb）、尿白蛋白排泄率（UAER）、尿磷（UP）和静脉血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、胱抑素C（Cys C）等指标；同时监测收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和心率（HR）。结果 联合治疗组总有效率为87.27%，优于常规治疗组的69.49%（P＜0.05）。两组治疗21 d后，SBP、DBP和HR与治疗前均有不同程度的降低，但组间比较差别不大（P＞0.05）。常规治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA及凋亡相关基因p21和p53表达与治疗前比较无明显变化（均P＞0.05）。联合治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA与治疗前比较明显上调，p21则下调，且优于常规治疗组（均P＜0.05），p53表达与治疗前比较变化不大（P＞0.05）。两组治疗21 d后，SCr、BUN和Cys C与治疗前比较均显著下降（均P＜0.05），且联合治疗组SCr、BUN和Cys C与常规治疗组比较下降更多（均P＜0.05）。两组治疗后UAER、β2-MG和mAlb与治疗前比较均下降，而UP则增高（均P＜0.05），且联合治疗组的UAER、β2-MG、mAlb和UP改善均优于常规治疗组（均P＜0.05）。结论 百令胶囊通过上调K-mRNA表达，抑制肾小管上皮细胞凋亡相关基因p21表达，降低肾小管上皮细胞凋亡率，提高UP排泄而达到保护肾脏的作用，可明显提高RVH的临床疗效。

肾血管性高血压 百令胶囊 Klotho基因及凋亡相关基因p21 肾功能

肾血管性高血压（RVH）属于继发性高血压，占高血压的3%～10%，死亡率高。RVH病因与肾血流量减少和肾缺血密切相关，患者多因一侧和（或）双侧肾动脉狭窄造成肾血管阻塞并因此激活肾素血管紧张素醛固酮系统而诱发血压增高［1］。RVH患者肾间质组织和结缔组织增生，肾小球纤维化萎缩导致肾小球内囊压力升高，由于肾细小动脉狭窄引起肾脏血流灌注不足造成肾脏实质性损害［2］。Klotho基因是一种新型抗衰老和肾脏保护性因子，通过调节钙磷代谢和抗凋亡等保护肾脏［3-4］。多项研究表明，Klotho高表达可减缓肾脏损伤促进损伤肾小管内皮修复，对延缓人类衰老和调整机体磷代谢中也起到重要作用［5］。p21和p53是重要的抑癌和抗细胞凋亡基因，参与RVH肾小管上皮细胞衰老的发生和病理改变［6］。由于Klotho主要在肾组织上表达，故Klotho表达下调也是肾损伤的标志。本研究试图通过应用百令胶囊治疗RVH来分析其对RVH

患者Klotho基因和肾功能影响机制。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 病例选择 1）纳入标准：RVH诊断标准参照《内科学》［7］；无高血压家族史的突发高血压患者。均签署知情同意书，同意接受本研究各种疗法且无病例脱落。2）排除标准：诊断应首先排除肾外性疾病，并结合泌尿系统疾病常规检查，对不能确诊者可以肾动脉血管造影进行鉴别诊断和排除。排除由RVH引起的继发性高血压患者；患者有严重神经官能症、精神病等原因无法表达自己主诉的；患者依从性差或不适合人选的；有药瘾、哺乳期或孕期妇女者。

1.2 临床资料 选取笔者所在医院于2015年1月至2016年2月收治的142例RVH患者，按入院先后顺序随机分为常规治疗组72例和联合治疗组70例。常规治疗组剔除介入6例和手术7例，保守治疗59例。联合治疗组剔除介入7例，手术8例，保守治疗55例。常规治疗组59例，男性28例，女性31例；年龄（29.22±7.60）岁，确诊RVH时间（1.06±0.37）年。联合治疗组55例，男性 21例，女性34例；年龄（33.67± 6.32）岁，确诊RVH时间（0.95±0.69）年。两组RVH患者确诊病程、年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.3 治疗方法 常规治疗组RVH治疗应根据临床诊断开展相应手术措施根治，但无论是内科保守治疗或外科手术，其基础治疗均应护肾降压为主，饮食以低盐、低脂肪为主，禁烟酒。口服马来酸依那普利片降压，

无尿者用速尿利尿。根据病情静脉滴注前列地尔护肾，及时应用糖皮质激素抗炎。对于由患侧血流量明显减少或双侧肾动脉狭窄的患者可行肾动脉血运重建手术。肾动脉狭窄伴有狭窄后扩张者进行旁路手术，肾动脉开口、近端1/3动脉粥样硬化斑块、内膜增生病变者行动脉血栓内膜剥除术；左肾动脉狭窄性纤维肌肉增生病变者行脾、肾动脉吻合术；肾动脉狭窄超过2 cm病变者行病变组织切除及移植置换术；肾动脉狭窄大于50%的顽固性高血压或不用降压药高血压达Ⅲ级的采用支架术。联合治疗组在常规治疗组治疗基础上加服百令胶囊（杭州中美华东制药有限公司，规格4 g/粒，批号：20150910036），每日3次，每次3粒，饭后口服。两组病例疗程均为21 d。

1.4 疗效标准 入院第21日对所有患者进行评估。治愈：临床症状消失，尿素氮、肌酐等肾脏功能正常。显效：临床症状明显改善，肾脏功能尿素氮、肌酐下降＞30%。有效：临床症状明显改善 ，肾脏功能尿素氮、肌酐下降＞10%≤30%。无效：临床症状无改善，肾脏功能尿素氮、肌酐上升或症状加重。总有效率＝（治愈例数+显效例数）/总例数×100%。

1.5 观察指标及方法 参照文献［8］，常规检查肾功能，每日常规测量收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和心率（HR）并取均值，RT-PSCR法检测人血Klotho蛋白和lothomRNA表达及Klotho基因凋亡相关基因p21和p53表达。

1.6 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件处理。计量资料以（）表示，组间均数检验采用多因素方差分析，两组比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验或双向方差Cmh χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组临床疗效比较 见表1。结果示，联合治疗组疗效优于常规治疗组（P＜0.05）。

表1 两组临床疗效比较（n）

2.2 两组治疗前后心功能比较 见表2。两组治疗21 d后，SBP、DBP和HR与治疗前均有不同程度降低（P＜0.05），但组间比较差别不大（P＞0.05）。

2.3 两组治疗前后Klotho基因及凋亡相关基因p21和p53表达水平比较 见表3。结果示，常规治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA及凋亡相关基因p21和p53表达与治疗前比较无明显变化（均P＞0.05）。联合治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA与治疗前比较明显上调，p21则下调，且优于常规治疗组（均P＜0.05），p53表达与治疗前比较变化不大（P＞0.05）。

表2 两组治疗前后心功能比较（）

表2 两组治疗前后心功能比较（）

与本组治疗前比较，*P＜0.05；与常规治疗组治疗后比较，△P＜0.05。下同。

组别 时间 HR（次/min）SBP（mmHg）DBP（mmHg）联合治疗组治疗前 10.79±10.76（n＝55） 治疗后 83.19±9.75*常规治疗组治疗前 99.82±9.47 182.63±22.37 119.81±19.26 138.22±10.27*89.97±11.23*184.51±20.79 120.56±17.07（n＝59） 治疗后 86.60±10.14*140.71±17.03*101.22±10.65*

表3 两组治疗前后Klotho基因及凋亡相关基因p21和p53表达水平比较（）

表3 两组治疗前后Klotho基因及凋亡相关基因p21和p53表达水平比较（）

组 别 时 间p21灰度值 p53灰度值 Klotho蛋白灰度值 Klotho-mRNA灰度值联合治疗组 治疗前（n＝55） 治疗后常规治疗组 治疗前15.02±1.37 10.79±1.09 69.34±6.291 79.57±6.21 6.22±0.26*△11.22±0.75 116.76±17.19*△106.16±14.15*△12.39±1.67 9.38±0.67 67.73±7.02 77.02±9.28（n＝59） 治疗后11.71±1.07 9.77±1.07 71.89±5.22 81.81±13.23

2.4 两组治疗前后肾功能比较 见表4。两组治疗21 d后，肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）和胱抑素 C（Cys C）与治疗前比较均显著下降（均P＜0.05），且联合治疗组SCr、BUN和Cys C与常规治疗组比较下降更多（均P＜0.05）。

表4 两组治疗前后肾功能比较（）

表4 两组治疗前后肾功能比较（）

组别 时间 Cys C（mg/L）SCr（μmol/L） BUN（mmol/L）联合治疗组 治疗前 4.02±0.47（n＝55） 治疗后 0.93±0.10*△常规治疗组 治疗前 3.79±0.33 172.24±24.37 29.21±5.99 91.03±10.69*△4.33±0.25*△169.57±20.72 30.57±5.21（n＝59） 治疗后 1.62±0.17*109.22±12.24*7.01±0.39*

2.5 两组治疗前后尿液检查结果比较 见表5。两组治疗后UAER、β2-MG和mAlb与治疗前比较均下降，而UP则增高 （均P＜0.05），且联合治疗组的UAER、β2-MG、mAlb和UP改善均优于常规治疗组 （均P＜0.05）。

表5 两组治疗前后尿液检查结果比较（）

表5 两组治疗前后尿液检查结果比较（）

组 别 时间 β2-MG（mg/L） mAlb（mg/mmol·Cr）UAER（μg/min）UP（g/24 h）联合治疗组 治疗前（n＝55） 治疗后常规治疗组 治疗前2.01±0.55 9.77±0.59 180.77±30.24 0.44±0.10 0.28±0.05*△0.54±0.13*△4.02±0.35*△1.41±0.08*△1.97±0.61 9.01±0.98 185.27±32.47 0.37±0.07（n＝59） 治疗后0.63±0.07*1.32±0.52*8.82±0.93*0.90±0.05*

3 讨 论

冬虫夏草具有“保肺益肾、止血化痰”之功效，含有多种氨基酸、多糖、核苷及甾醇类等化学成份，其中虫草多糖具有护肾、抗炎及增强免疫力等作用［9-11］。临床使用的百令胶囊是冬虫夏草菌经发酵制成虫草菌粉，具有抗炎、抗脂质过氧和调节机体免疫功能作用，并且能改善衰竭肾功能、增加肾血流量而达到护肾养生的目的［12］。

Klotho基因是一种新型的肾脏保护性因子，具有抗衰老作用，高血压病致肾损害主要在肾小球，而肾小管上皮细胞凋亡在肾小管间质病变的发生发展中也起重要作用。p21基因位于p53基因下游，是细胞周期素依赖性激酶抑制因子，它不仅对细胞有直接影响，且似乎控制着其他与衰变和疾病有关的若干基因，两者为抑癌基因，为抗调亡因子［13-14］。观察发现，联合治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA表达上调，p21表达下调，这说明百令胶囊对于抑制肾小管间质病变和肾小管上皮细胞凋亡具有一定的作用，且联合治疗组UP排泄明显提高，这对于保护肾功能起到至关重要的作用，因为UP主要从肾排泄，磷代谢紊乱也是肾脏疾病发病并造成肾功能损害的重要环节，UP排泄提高可减少肾功能损害。联合治疗组UAER、β2-MG和mAlb优于常规治疗组，显示百令胶囊在治疗RVH时可在基础治疗的基础上扩张肾动脉，在改善微循环，增加肾血流量及肾小球滤过率等方面具有肯定作用，这有利于降低肾小管对SCr、BUN的重吸收［15］。Cys C主要反应肾组织的炎症反应程度，在肾组织出现炎症反应时明显增高，Cys C应与百令胶囊减少炎性递质产生，抑制肾小管横纹肌溶解，保护肾小管细胞膜结构和功能完整，以减轻肾脏实质的损害，降低蛋白尿进而改善肾功能有关［16］。

综上所述，百令胶囊通过上调Klotho蛋白和K-mRNA表达，抑制肾小管上皮细胞凋亡相关基因p21表达，降低肾小管上皮细胞凋亡率而实现肾脏保护作用，可明显提高RVH的临床疗效。

［1］ 王磊，于芳，魏新伟，等．肾血管性和原发性高血压患者动态血压和动态心电图的差异性分析［J］.中国现代医生，2015，53（35）：26-28.

［2］ 张远慧.肾血管性高血压［J］．新医学，2006，35（5）：285-289.

［3］ 蒋雄京.RVH治疗新进展［J］．中国实用内科杂志，2012，32（1）：12-13.

［4］ 刘其锋，叶建明，李莎莎，等．Klotho抑制内质网应激反应减轻UUO大鼠肾间质纤维化的实验研究［J］．中国中西医结合肾病杂志，2015，16（3）：203-206.

［5］ 赵洪刚，张遵城.Klotho在肾脏损伤疾病中的作用研究进展［J］.重庆医学，2015，44（15）：2139-2212.

［6］ 李开龙，何娅妮，杜晓兰，等.P53-P21-R b信号通路在缺血再灌注损伤后期肾小管上皮细胞衰老中的作用［J］.医学研究杂志，2008，37（12）：78-84.

［7］ 王海燕.泌尿系统疾病［M］.北京：北京大学医学出版社，2005：198-192.

［8］ 林海仁，麦振华，粱国强，等.百令胶囊联合硝苯地平缓释片对高血压合并慢性肾功能不全患者血清胱抑素C及24 h尿蛋白定量水平的影响［J］.四川医学，2015，36（6）：869-872.

［9］ 宋艳丽，郭俐宏，朱克刚，等.百令胶囊对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用［J］.陕西医学杂志，2012，43（1）：25-27.

［10］周芳，张梅，李龙珠，等.冬虫夏草菌粉对大鼠实验性肾脏缺血/再灌注后VEGF及肾功能影响［J］.浙江临床医学，2015，10（9）：1678-1680.

［11］李英，陈德森，李莉，等.阿拓莫兰联合百令胶囊治疗糖尿病肾病合并高血压的临床研究［J］.世界中医药，2014，9（3）：311-315.

［12］Juniku-Shkololli A，Manxhuka-Kerliu S，Ahmetaj H，et al. Expression of immunohisto chemical markers of progression in pre-cancerous and cance rous human colon：correlation with serum vitamin D levels［J］.Anticancer Res，2015，35（3）：1513-1520.

［13］蔺昕燕，贾玉红，郭连英，等.p53-p21通路在动脉血管平滑肌细胞衰老中的作用研究［J］.大连医科大学学报，2015，37（4）：339-344.

［14］肖云，陶立坚，Damu Tang，等.p21和p53在肾间质纤维化大鼠中表达的研究［J］.中国医师杂志，2010，12（2）：145-148.

［15］赵卫东.百令胶囊减轻急性肾损伤的实验研究［J］.吉林医学，2011，32（11）：2083-2085.

［16］唐瑭，陈德森，彭吉霞，等.前列地尔联合百令胶囊治疗急性肾损伤435例临床研究［J］.世界中医药，2014，9（6）：754-758.

Mechanism Analysis of the Effect of Bailing Capsule on Klotho Gene and Renal Function in Patients with Renal Vascular Hypertension

CHEN Shaoxiu，ZHANG Qiufang，HE Huaqiong.
Shiyan Taihe Hospital，Affiliated Hospital of Hubei Medical College，Hubei，Shiyan 442000，China.

Objective：To observe the clinical effect of treating renal vascular hypertension（RVH），and to analyse the mechanism of the effect of Bailing Capsule on Klotho gene and renal function.Methods：142 cases of RVH were randomly divided into routine treatment group and combined treatment group according to the order of admission.The conventional therapy group was treated with conservative treatment except for the cases that needed intervention and operation treatment.The combination therapy group was given Bailing Capsule on the basis of the conventional therapy group.In 21 days of treatment，blood analysis of Klotho protein，Klotho-mRNA expression，and apoptosis associated genes such as p21 and p53 expression were done.Urine beta 2 microspheres protein（β2-MG），urinary microalbumin（mAlb），urinary albumin excretion rate（UAER），urine phosphorus（UP），venous blood urea nitrogen（BUN），creatinine（SCR），Cystatin C（Cys C）and other indicators were compared.At the same time，systolic blood pressure（SBP）and diastolic blood pressure（DBP），heart rate（HR）were monitored.Results：After 21 days of treatment，the expression of Klotho protein and Klotho-mRNA was up regulated and the expression of p21 was down regulated in the combination treatment group.Compared with the conventional treatment group，the result was（P＜0.05）.Urinary mAlb，beta 2-MG，UAER decreased，BUN，Cys C and SCr decreased significantly，UP increased，the total efficiency was significantly improved in the combination treatment group.Compared with the conventional treatment group，the result was（P＜0.05）.The comparison result of the expression of SBP，DBP，HR and p53 between the two groups was（P＞0.05）.Conclusion：By increasing K-mRNA expression，Bailing Capsule inhibits the expression of p21 gene related to apoptosis of renal tubular epithelialcells，decreases the rate of apoptosis of renal tubular epithelial cells，slightly increases excretion and reaches the kidney protective effect.It can significantly improve the RVH clinical curative effect.

Renal vascular hypertension；Bailing Capsule；Klotho gene and apoptosis related gene p21；Renal function

R544.1

A

1004-745X（2017）01-0109-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.01.034

2016-05-05）

湖北省教育厅重点项目（D20122402）

△通信作者（电子邮箱：ccssxcjob@163.com）