骨髓涂片、骨髓活检、骨髓活检联合免疫组化对骨髓增生异常综合征诊断价值探讨

李清平　肖波　黎艳

[摘 要] 目的：探讨骨髓涂片、骨髓活检、骨髓活检联合免疫组化对骨髓增生异常综合征的诊断价值。方法：观察120例MDS患者骨髓涂片及活检的形态学特征，同时利用免疫组织化学检测CD34在所有样本石蜡切片中的表达情况。结果：骨髓活检单项诊断符合率明显高于骨髓涂片单项诊断符合率，骨髓活检联合免疫组化的诊断符合率最高。三系病态造血骨髓涂片对红系检出率高，骨髓活检对粒系检出率高，而免疫组化可以排除骨髓活检中的假阳性率。增生程度Ⅲ级以上者，骨髓切片比骨髓涂片的检出率更高。尤其是增生程度IV、V，骨髓切片检出能力明显优于骨髓涂片。结论：骨髓活检联合免疫组化在诊断符合率、粒系病态造血和增生程度检出能力均高于骨髓涂片，而骨髓涂片对红系病态造血检出能力更具优势。

[关键词] 骨髓增生异常综合征；骨髓涂片；骨髓活检；免疫组织化学

中图分类号：R551 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）04-069-03

DOI：10.11876/mimt201604026

骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）是一组以外周血细胞减少、骨髓无效造血及骨髓发育异常为主要特征的细胞恶性克隆性疾病[1-2]。临床表现以进行性贫血常见，粒细胞降低或缺乏时表现为反复感染，血小板生成不足则表现为各脏器的出血，严重者可能进展为急性髓细胞白血病[3-4]。骨髓涂片、骨髓活检是诊断MDS最常用的细胞形态学检测手段[5-7]。CD 34是一种跨膜糖蛋白，在正常干细胞、定向祖细胞和淋巴性前体细胞上均有表达[8-9]，在正常人骨髓细胞中不表达或者低表达，在MDS 中表达增加，尤其可以识别带有强烈髓系前体细胞标记的真性“幼稚前体细胞异常定位”（ALIP）。本研究通过对比确诊的120例MDS患者骨髓涂片及活检的形态学特征，利用免疫组织化学检测CD34表达情况，探讨骨髓活检联合免疫组织化学法对MDS的诊断价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2012年1月至2015年7月我院临床资料完整、经临床、血象、骨髓涂片、骨髓活检，参照 WHO造血组织和淋巴系统肿瘤分类标准（2008年）确诊的MDS患者共120例。其中，男 87例，女33例，年龄15～85岁，中位年龄52岁。

1.2 材料与方法

1.2.1 骨髓涂片及切片 利用B65-01型骨髓活检针在患者髂后上棘局部麻醉后抽取骨髓液，立即推片制成涂片，晾干后进行瑞氏染色，光镜下观察有核细胞增生程度及红系、粒系和巨核系细胞是否发育异常，计数分类500 个有核细胞。

取骨髓组织块，经固定、脱钙、脱水、浸透、石蜡包埋、切片，所有切片HE染色，光镜下观察粒系ALIP 现象及红系、巨核系细胞是否发育异常。

1.2.2 免疫组织化学染色 样本切片脱蜡和水化，抗原修复，免疫组织化学染色，操作按照说明书要求，结果判读：CD34以胞浆出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性结果判断按照染色程度和显色细胞的数量结合进行归类：细胞显色比例<5%（-）；细胞显色比例在 5%～25%之间，淡黄色（+）；细胞显色比例在25%～ 50%之间，黄色（++）；细胞显色比例>50%，棕黄色（+++）。以（ ++ ）、（ +++ ）者为免疫组化阳性表达。

1.2.3 统计学处理 使用SPSS11.0软件，计数资料行χ2检验或Fishers确切概率法检验，相关比较采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断符合率

骨髓涂片单项诊断符合率64.2%（77/120），骨髓活检单项诊断符合率87.5%（105/120），骨髓活检联合免疫组化诊断符合率93.3%（112/120）。骨髓活检单项诊断符合率明显高于骨髓涂片单项诊断符合率，差异具有统计学意义（P<0.05）。骨髓活检联合免疫组化的诊断符合率最高。

2.2 三种方法在MDS病态造血检出率比较

如表1所示，骨髓活检及骨髓活检+免疫组化粒系检出率高于骨髓涂片，红系检出率低于骨髓涂片，组间比较差异有统计学意义。

2.3 增生程度

120例患者中，骨髓活检检出增生程度Ⅲ级以上检出率95.8%，骨髓涂片Ⅲ级以上者检出率70.8%，差異具有统计学意义（P<0.05）。增生程度IV、V者， 骨髓活检的检出率分别为21.7%和24.2%，骨髓涂片的检出率分别为9.2%和13.3%，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

MDS是起源于造血干细胞的高度异质性血液系统疾病，发病机制非常复杂，而临床特征缺乏特异性，预后情况比较差[10-12]。MDS在老年人中高发，但是老年患者本身身体素质差，可能掩盖了MDS的部分症状，因此临床易误诊及漏诊[13-14]。

本研究通过对比骨髓涂片单项、骨髓活检单项、骨髓活检联合免疫组化的诊断符合率，发现骨髓活检单项诊断符合率明显高于骨髓涂片单项诊断符合率，骨髓活检联合免疫组化的诊断符合率最高。说明免疫组织化学法能提高骨髓活检的诊断水平。

骨髓病态造血是诊断MDS的关键[15]，红系病态造血在涂片的特征包括巨大嗜多色（碱性）红细胞 、多核及分叶核幼红细胞、类巨幼样变红细胞、环铁粒幼红细胞等形态，骨髓涂片对细胞形态的观察优于活检切片，因此骨髓涂片在红系病态造血检出率比骨髓活检更具优势。

本实验发现骨髓活检对粒系病态造血检出率高于骨髓涂片。粒系病态造血在骨髓活检的特征是“ALIP ”阳性：原始粒细胞和早幼粒细胞3～5 个聚集成簇位于骨小梁间区称为“ALIP”，一张切片中“ALIP ”≥3个则为“ALIP ”阳性。本组所观察的120例MDS患者有88例检出“ALIP”现象，占73.3%。而粒系病态造血在骨髓活检易检出的原因可能是骨髓切片的取材范围广，未破坏原始细胞以集簇或集丛的结构存在，而在涂片制作过程中可能破坏了原始细胞这种结构。但是活检中“ALIP”现象是由髓系前体细胞（真性）或巨核系和红系前体细胞（假性）两类细胞组分构成，因此活检切片诊断中存在假阳性现象。而CD34可以特异性识别髓系前体细胞标记的真性“ALIP”，从而提高骨髓活检的诊断水平[16-17]。

总之，骨髓活检联合免疫组化在诊断符合率、粒系病态造血检出率高和Ⅲ级以上增生检出能力优于骨髓涂片，而骨髓涂片在红系病态造血检出率更高。骨髓活检、骨髓涂片、免疫组织化学三者各具优势，互相补充，可提高MDS诊断的准确性。

参 考 文 献

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