子宫内膜异位病灶中NF—κBp65的表达及意义

朱虹　高军

[摘要] 目的 探讨核转录因子kappaB p65（NF-κB p65）在不同部位子宫内膜异位病灶中的表达及意义。 方法 收集我院住院手术的子宫内膜异位症手术组织标本48例（包括盆腔外特殊部位的子宫内膜异位症16例，卵巢子宫内膜异位症32例），同期在位内膜22例，正常子宫内膜20例作为对照，采用免疫组化法检测NF-κB p65在上述各组内膜中的表达情况及与临床分期的关系。 结果 各组内膜均存在NF-κB p65的阳性表达，NF-κB p65蛋白表达于腺上皮细胞的胞核和胞浆，在盆腔外子宫内膜异位症异位病灶、卵巢子宫内膜异位症的异位内膜、在位内膜、正常子宫内膜中表达依次减少，差异有统计学意义（P<0.05），增生期与分泌期的子宫内膜相比，差异无统计学意义（P>0.05）。卵巢内异症异位内膜中NF-κB p65的表达与临床分期无明显相关性。 结论 盆腔外子宫内膜异位症异位病灶、卵巢子宫内膜异位症的异位内膜中均存在NF-κB p65的高表达，提示其可能参与了子宫内膜异位症的发生发展过程。

[关键词] 子宫内膜异位症；核转录因子kappaB p65；免疫组织化学

[中图分类号] R737.31；R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）11-0019-03

[Abstract] Objective To explore the expressions and significance of NF-κB p65 in different place endometriosis.Methods A total of 48 specimans with endometriosis （16 cases of extrapelvic endometriosis，32 cases of ovarian endometriosis and meanwhile 22 cases of eutopic endometrium） were enrolled in the study，20 cases of normal endometrium were involed as control group. Immunoh istochemistry was used to detect the expressions of NF-κB p65 in above groups. Results The expressions of NF-κB p65 were found in the glandular epithelial cells in all groups. The extrapelvic endometriosis cases showed the highest expression，followed by ectopic endometrium， eutopic endometrium，and showing the lowest in normal endometrium，the difference among those groups was significant （P<0.05）. However， the difference between prolificative phase and secretory phase was not significant （P>0.05）. Furthermore， there was no correlation with clinical stages in ovarian endometriosis. Conclusion NF-κB p65 proteins are highly expressed in extrapelvic and ectopic endometrium，which suggests that they may participate in the development and progression of endometriosis.

[Key words] Endometriosis；Nuclear factor-κB p65； Immunohistochemistry

子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）简称内异症，是指具有生长功能的子宫内膜腺体和间质种植在子宫腔被覆黏膜以外的其他部位引起的疾病，可导致痛经、不孕、盆腔痛及月经改变等症状，内异症具有类似恶性肿瘤发生侵袭、转移的特性，复发率高，治疗效果不理想，严重影响妇女的生活质量。NF-κB作为一种关键性的转录因子，已证实可通过调节细胞增殖、凋亡、迁移等相关因子的转录，参与肿瘤的生长和侵袭转移。本研究中，我们采用免疫组化法检测NF-κB p65蛋白在盆腔外内异症、卵巢内异症的异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜中的表达，了解NF-κB p65在上述各组内膜的表达差异及与临床分期的相关性，探讨NF-κB p65在内异症发生发展中的作用，为内异症的诊断和治疗提供新的实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究共收集组织标本90例，均来自于江西省人民医院妇科的住院患者，均经病理证实；其中卵巢异位内膜组织32例（巧克力囊肿），内异症在位内膜22 例，正常子宫内膜20 例，盆腔外内异症病灶16例；盆腔外内异症组标本采集于2006年1月～2014 年8 月，异位部位包括直肠2 例，膀胱1 例，宫颈2 例，后穹隆1 例，腹壁10例；32例卵巢异位内膜组标本采集于2013年8月～2014 年8 月收治的卵巢巧克力囊肿患者，年龄19～45 岁，平均34.6 岁，按照1985 年美国生育协会修改的rAFS 分期法，Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期7例；22 例卵巢内异症患者在位内膜取自上述因内异症而行子宫切除的子宫在位内膜，或诊刮所得的子宫内膜，其中增生期12例，分泌期10 例；正常对照组20例为同期因输卵管性不孕症、子宫畸形住院手术诊刮所得的子宫内膜，其中增生期10 例，分泌期10 例，均排除其他子宫内膜病变。所有患者术前6个月未用过内分泌药物，6个月内无妊娠和哺乳史，月经规则。

1.2 主要试剂

兔抗人NF-κB p65多克隆抗体即用型工作液购自武汉博士德生物公司。

1.3 实验方法

离体标本取材后置于4%多聚甲醛中固定，脱水，石蜡包埋，每份标本切片3 张，厚度为4 μm，部分盆腔外内异症病例少见，收集既往病例蜡块重新切片。分别进行NF-κB p65的免疫组化染色和HE 染色。

1.4 免疫组化结果判定

细胞浆内棕黄色颗粒状着色即为阳性。按FDA 推荐的染色强度分级：①阴性（-）：细胞无着色或阳性细胞数< 5%；②弱阳性（+）：细胞轻度着色呈淡黄色，阳性细胞数5%～25%；③阳性（++）：细胞着色呈深黄色，阳性细胞数25%～50%；④强阳性（+++）：细胞明显着色，呈棕黄色，阳性细胞数>50%。结果判断在双盲下进行，每张切片由两名经验丰富的病理科医生分别计数。

1.5 统计学处理

应用SPSS17.0 统计学软件进行分析，多组间比较采用χ2检验的Fisher确切概率法，两两比较采用Pearson卡方检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NF-κB p65在各组中的表达情况

NF-κB p65阳性表达主要见于子宫内膜腺上皮细胞的胞浆，在异位内膜的间质中亦有表达，见封三图2～5。

2.2 NF-κB p65在各组子宫内膜中的表达情况

NF-κB p65在盆腔外子宫内膜异位症异位病灶、卵巢子宫内膜异位症的异位内膜、在位内膜、正常子宫内膜中的表达依次减少，差异有统计学意义（P<0.005）；两两相比，差异均有统计学意义（P<0.05）；在位内膜和正常内膜中增生期与分泌期NF-κB p65表达差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.3 卵巢内异症异位内膜中NF-κB p65与临床分期的相关性

卵巢内异症异位内膜NF-κB p65在子宫内膜异位症rAFS临床各期的表达率差异无统计学意义（P>0.05），提示与rAFS临床分期无明显相关性。见表2。

3 讨论

内异症的发病率呈逐年增长的趋势，约占生育年龄妇女的15%。因其具有侵袭、浸润、转移等恶性肿瘤生物学行为，可在盆腔内形成严重而广泛的粘连，造成痛经、慢性盆腔痛、性交痛及月经改变等症状。近年来随着剖宫产率增高，盆腔外的内异症如腹壁切口内异症的报道逐年增高[1，2]，严重影响患者健康与生活质量。内异症治疗方法采用外科手术和激素治疗，但除根治性手术外，其余治疗效果均不理想，复发率高，是当前妇科领域研究亟待解决的问题之一。探讨内异症的发病机制成为了内异症研究的难点和热点。

核转录因子NF-κB是1986年由Bltimore和Rwiansen 在浆细胞和成熟B细胞中发现的，主要存在形式是p50 和RelA（p65）组成的异源二聚体。NF-κB作为多条信号转录途径的交汇点，活化后可促进白介素（IL）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、基质金属蛋白酶（MMPs）、黏附分子（ICAM）、凋亡相关因子（caspase-8）等表达[3-6]，参与机体免疫、炎症、应激等反应的生理病理过程[7]。内异症相关的大多数细胞因子基因的启动子都有功能性的NF-κB p65结合位点，NF-κB 的激活后可导致上述细胞因子过度表达，导致子宫内膜异位症的种植、侵袭和转移。

已有研究显示，NF-κB p65在内异症患者的在位及异位内膜中均有表达，且表达异常增高，而在正常子宫内膜组织表达微弱，提示NF-κB p65在内异症发病机制中有重要作用[8-12]。NF-κB在月经周期中增生期和分泌期的表达是否存在差异，众多研究结论不一。本研究结果显示，卵巢异位内膜NF-κB p65表达高于同期在位内膜（P<0.05），且明显高于正常内膜（P<0.05）；在位内膜与正常子宫内膜NF-κB p65表达相比，差异有统计学意义（P<0.05）。与多数国内外学者报道一致，提示的过度激活参与了内异症的发生发病过程。但NF-κB p65的表达在正常人群及内异症人群的增生期、分泌期表达无显著性差异，与Gonzalez-Ramos R等的研究结果相似[10，13]。

本研究初步探讨了盆腔外内异症的发病机制，盆腔外内异症可发生于膀胱、输尿管、肠管、阑尾、手术瘢痕、疝囊、肺、肾、膈和肢体等盆腔外特殊部位。其中以剖宫产术后腹壁切口子宫内膜异位症最为常见，目前认为，腹壁切口子宫内膜异位症的发病机制是手术时子宫内膜带至切口直接种植所致，属医源性种植。本研究结果显示，盆腔外异位病灶中NF-κB p65表达明显高于卵巢异位内膜、同期在位内膜，且明显高于正常内膜（P<0.05）。再次证实了NF-κB p65的高表达，通过调节各种细胞因子的活性，利于内膜的种植和生长。

卵巢内异症病例中，临床各期的的表达率差异无统计学意义（P>0.05），提示与rAFS临床分期无明显相关性。我们发现，I～II期患者的病灶中亦可存在NF-κB p65的高表达，其原因可能与现行的rAFS 临床分期仅考虑病灶的大小、深浅，而未考虑到病变的性质有关。在内异症发病初期，主要为红色病变，位置表浅，但血管生成旺盛，而且其腺体和间质细胞结构功能完整，具有很强的侵袭能力，本研究中1例Ⅱ期患者NF-κB p65表达呈强阳性，该患者术中卵巢囊肿与盆底轻度粘连，但盆腔内可见散在红色病灶，提示病灶处于生长活跃期，因此NF-κB p65的表达明显增高。Ramos等[14]研究也表明，腹膜内异症病灶中NF-κB 被活化，其中红色内异症病灶中NF-κB 的活性明显高于黑色病灶，表明NF-κB活化与内异症发病有关。

综上所述，NF-κB p65参与调控了子宫内膜的异位种植，异常活化的NF-κB p65 在EMs发生发展过程中起着重要作用，我们设想通过调控NF-κB p65有可能调控内异症的发生发展。进一步探讨其在内异症中侵袭转移的调控机制，将有助于为内异症患者的治疗提供新的靶点。

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（收稿日期：2015-02-13）