M asson染色在宫颈微小浸润性鳞状细胞癌诊断中的应用

赵娜 杨建萍 尹玉慧 齐静雯 王玉豪 张红 陈奎生(郑州大学第一附属医院病理科 河南郑州 450052)



M asson染色在宫颈微小浸润性鳞状细胞癌诊断中的应用

赵娜 杨建萍 尹玉慧 齐静雯 王玉豪 张红 陈奎生
(郑州大学第一附属医院病理科 河南郑州 450052)

【摘要】目的 探讨Masson染色在宫颈微小浸润性鳞状细胞癌诊断中的应用价值｡方法 收集疑似宫颈微小浸润性鳞状细胞癌病例108例,分别对其进行Masson和免疫组化染色｡结果 Masson染色和免疫组化(抗体:IV型胶原)均能清晰地显示出基底膜变薄或者缺损程度｡Masson染色:70例(64.8%)为宫颈微小浸润鳞状细胞癌,20例(18.5%)宫颈原位鳞状细胞癌,18例(16.7%)为宫颈鳞状细胞癌;免疫组化染色:60例(55.6%)为宫颈微小浸润鳞状细胞癌,24例(22.2%)为宫颈原位鳞状细胞癌,24例(22.2%)为宫颈鳞状细胞癌｡两者差异无统计学意义(P>0.05)｡结论 Mas-son染色法可用来辅助诊断宫颈微小浸润鳞状细胞癌,尤其可在快速术中冰冻切片中辅助HE染色确诊有无微浸润性｡

【关键词】宫颈微小浸润鳞状细胞癌;基底膜;Masson染色;免疫组化染色

宫颈癌(invasive carcinoma of cervix,ICC)是起源于宫颈上皮细胞的恶性肿瘤,以鳞状细胞癌最为常见(60%～85%)[1],其中育龄期(20～49岁)是微小浸润性鳞状细胞癌好发年龄阶段[2]｡近年来,随着全民医疗保健与普查意识的逐步加强,微小浸润性鳞状细胞癌的检出率较以往明显增高｡值得关注的是,明确的宫颈癌病变诊断分级对临床治疗方案的选择具有重要的指导意义,尤其在年轻女性患者中｡截止目前,宫颈病变的诊断分级主要依据其基底膜[3](basement membrane,BM)完整与否来判定其是否发生浸润,进而完成明确诊断｡因常规的HE染色对基底膜着色能力较差,现临床上主要采用特异性较强的免疫组化对基底膜进行着色｡本研究收集2008年1月至2015年1月疑似宫颈微小浸润性鳞状细胞癌108例,分别采用Masson和免疫组化染色对其基底膜进行显色对比分析,现报告如下｡

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病例选择 收集2008年1月至2015年1月郑州大学第一附属医院病理科108例疑似宫颈微小浸润性鳞状细胞癌的病例,年龄为21～67岁,中位年龄43.4岁｡

1.1.2 主要试剂与仪器 10%福尔马林;Ⅳ型胶原(一抗);PV-9000(二抗);胃蛋白酶消化液;Masson复合染色液(试剂A:Weigert铁苏木素液;试剂B:丽春红酸性复红;试剂C:1%磷钼酸水溶液;试剂D:亮绿液,中山金桥);包埋盒;LEICA ST5020切片机;LEI-CA CV5030封片机;BENCHMARK XT免疫组化机(罗氏);显微镜(Olymps)｡

1.2 治疗方法

1.2.1 制片 取宫颈标本组织,10%福尔马林固定,常规制成石蜡切片｡连续切片5张,切片厚3μm,常规脱蜡脱水｡

1.2.2 免疫组化 按EnVision二步法染色步骤进行,所用试剂一抗小鼠抗人Ⅳ型胶原单克隆抗体,以肝癌组织标本为阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照｡购自北京中杉金桥生物技术有限公司｡

1.2.3 Masson染色法 ①切片脱蜡至蒸馏水中;②Weigert铁苏木素液染5～10 min;③流水冲洗;④1%的盐酸酒精分化;⑤流水冲洗,镜下观察;⑥丽春红酸性复红液染5～10 min;⑦流水少洗;⑧1%磷钼酸水溶液染5～10 min,镜下观察;⑨直接用苯胺蓝复染5 min;⑩1%的冰醋酸水溶液处理2 min;95%的乙醇脱水3次;无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片｡

1.2.4 结果判定 Masson染色胶原纤维呈蓝色,肌纤维呈红色,红细胞呈橘红色,基底膜含有胶原纤维,故染成蓝色｡基底膜呈连续线状结构为(+),基底膜部分呈变薄或连续缺失均为(-)｡免疫组化染色基底膜Ⅳ型胶原表达为连续棕色线性结构为(+),呈变薄或连续缺失均为(-)[4]｡

1.3 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件进行分析,率的比采用Mann-Whitney Test(秩和检验)或Fisher确切概率法｡

2 结果

免疫组化染色下60例(55.6%),Masson染色下70例(64.8%)病灶周边基底膜样物质减少或者部分缺如,结合形态学特点证实为宫颈微小浸润性鳞状细胞癌;免疫组化染色下24例(22.2%),Masson染色下20例(18.5%)病灶周边基底膜有完整的着色,将其暂定为宫颈原位鳞状细胞癌,但不排除因上皮脚横切或斜切面造成的假象;免疫组化染色下24例(22.2%),Masson染色下18例(16.7%)病灶周边基底膜完全缺如,将其诊断为宫颈浸润性鳞状细胞癌｡统计学分析显示,免疫组化与Masson染色分布差异无统计学意义(P=0.883)｡Masson染色和免疫组化均能清晰地显示基底膜的变化(有无破损或厚薄不均)｡见图1｡

图1 宫颈癌不同染色结果对比

3 讨论

宫颈微小浸润性鳞状细胞癌于1947年由Mest werdt首次提出,近年来有关其确切定义一直比较模糊,但间质浸润深度一直是一个公认的生物学行为指标,同时有研究发现不同的间质浸润深度其淋巴结转移率有明显的差异｡世界卫生组织(WHO)起初推荐认可国际妇产科联合会(FIGO)标准和美国妇科肿瘤医师学会(SGO)标准,即FIGO分期:1a1(浸润深度≤3 mm,水平宽度≤7 mm)和1a2(3 mm≤浸润深度≤5 mm,水平宽度≤7 mm),有无脉管与淋巴管瘤栓与分期无关,与此同时SGO标准规定为上皮基底膜下浸润深≤3 mm,水平宽度≤7 mm,且无血管淋巴管瘤栓形成｡截至2014年WHO对宫颈病变分级进行重新修订:低级别鳞状上皮内病变和高级别鳞状上皮内病变､微小浸润性鳞状细胞癌(相当于FIGO分期系统中的1a期宫颈病变,其定义为最大浸润深度为5 mm,最大水平扩张范围为7 mm｡)､浸润癌,其死亡率随临床分期的增加而明显增高｡尽管近年来综合治疗已成为宫颈癌治疗的一个重要策略[5],但手术仍是一致公认的宫颈癌的主要治疗手段,尤其是不同的临床分期所采用的手术方案大有不同[6],如对低､高级别鳞状上皮内病变者大多给予保留子宫的宫颈锥切术治疗;对明确为浸润癌的患者通常为改良子宫全切术加盆腔淋巴结清扫以及后续的辅助治疗;但对早期浸润性癌患者,手术方案的选择必须综合考虑患者年龄和意愿,该级对育龄期女性(具有生育要求的育龄期女性,一般采用宫颈锥切即可;若无生育要求,一般采用根治性子宫全切术;如果存在着淋巴结转移,无论患者有无生育要求,均采用改良子宫全切术加盆腔淋巴结清扫)尤为重要,其主要目的便于临床医生给患者以个体化､人性化治疗方案,进而提高医疗质量,促进患者术后恢复,改善生活质量｡

宫颈癌发病率仅次于乳腺癌,约88%的病例发生在发展中国家｡据不完全统计,现我国每年约有10万新增病例,约占全球20%,为我国女性最常见的妇科恶性肿瘤之一｡过去宫颈病变主要依赖于常规的HE染色和免疫组化等方法,HE染色判定主观性较强,对临床病例医师专业要求较高,限制了其在确定宫颈病变,尤其是在确定微小浸润性鳞状细胞癌方面的诊断｡免疫组化作为一种新兴的技术,其本身具有特异性强､敏感性高､定位准确､形态与功能相结合,可自动化等优点,但该技术因成本较高､技术操作要求苛刻､耗时较长等导致其难以大范围进行普及推广｡

本研究分别采用Masson染色和免疫组化对108例疑似微小浸润性鳞状细胞癌进行基底膜着色,进而对其进行临床分期,经统计学分析二者差异无统计学意义(P=0.883),进一步得出Masson染色法可用来辅助诊断宫颈微小浸润性鳞状细胞癌的结论｡Masson染色是传统经典的胶原纤维染色法,常用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色,在实验教学､组织的观察研究､疾病诊断等方面起着举足轻重的作用,现逐渐推广并应用于疾病的病理诊断､鉴别诊断以及科学研究中[7],但是运用于宫颈微小浸润性鳞状细胞癌的研究于国内尚属首次｡该方法操作简便､经济､染色效果好､易于观察,同时耗时短,可与HE染色同步进行,辅助其诊断宫颈微小浸润性鳞状细胞癌,这一点在快速术中冰冻诊断时显得尤为重要｡

此外,研究发现宫颈癌发病年龄有“年轻化"的趋势,与以往的研究结果相一致[8]｡近年来我国经济､人民生活水平､思想观念尤其在晚婚晚育方面有了很大提高,Masson染色技术可作为一种简便易行的宫颈病变诊断与分级的方法,在一定程度提高该病的检出率,同时也可被大范围推广应用,改善患者的生活质量｡

参考文献

[1] 杨雷英.WWOX､Bcl-2和S-100A4在宫颈浸润性鳞状细胞癌的表达及意义[D].济南:山东大学,2009.

[2] Gutnik H,Matisic JP,Zakelj M P,et al.Microinvasive cervical squa-mous cel carcinoma in Slovenia during the period 2001-2007[J].Radiol Oncol,2014,48(3):282-288.

[3] 彭向阳,彭伟雄,黄振华,等.IL-6和MMP-9在胃癌组织中的表达及其相关性[J].中国热带医学,2012,12(8):928-930,933.

[4] 田澄,金玉兰,赵晓丽,等.微波辐射PAS染色显示声带鳞状细胞癌早期的基底膜改变[J].诊断病理学杂志,2011,18(6):450-453.

[5] 朱晓艳.宫颈癌手术治疗进展[D].兰州:兰州大学,2013.

[6] Lytwyn A,Zaino R,Colgan T J,et al.Superficialy Invasive Squamous Cel Carcinoma of the Uterine Cervix[J].Pathology Case Reviews,2013,18(4):183-189.

[7] 李甜,陈红香,廖礼彬,等.人结肠切片三种特殊染色的比较[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2015,24(1):109-111.

[8] 马晓洁,李莎莎,谭榜宪.宫颈癌淋巴结微转移的研究进展[J].现代妇产科进展,2015,(4):303-305.

App lication of M asson staining in the diagnosis ofm icroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix

Zhao Na,Yang Jianping,Yin Yuhui,Qi Jingwen,Wang Yuhao,Zhang Hong,Chen Kuisheng.
(Department of Pathology,the First Afiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China)

【Abstract】Objective To investigate the application value of Masson staining in the diagnosis of microinvasive squamous cellbook=18,ebook=24carcinoma of the cervix.M ethods 108 cases suspected asmicroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix were colected.Immunohistochemistry and Masson staining were used to detect them.Results Both Masson and immunohistochemistry staining can show basementmembrane thinning or defect.Masson staining:70(64.8%)casesweremicroinvasive squamous cel carcinoma,20(18.5%)caseswere cervical carcinoma in situ,18(16.7%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.Immunohistochemistry staining:60(55.6%)cases weremicroinvasive squamous cel carcinoma,24(22.2%)cases were cervical carcinoma in situ,24 (22.2%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.There were no statisticaly diference between Masson and Immunohisto-chemical staining(P>0.05).Conclusion Masson staining can be used in the diagnosis ofmicroinvasive squamous cel carcino-ma of the cervix,especialy in assisting HE in fast frozen.

【Key words】microinvasive squamous cel carcinoma;basementmembrane;Masson staining;immunohistochemical staining

(收稿日期:2015-08-02)

通讯作者:陈奎生,E-mail:chenksh2002@163.com｡

【中图分类号】R 737.33

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.004