大蒜油对小鼠免疫功能影响的研究

郑昱郑建芳(.河南省人民医院 河南郑州 450003;.新乡市常乐制药有限责任公司 河南新乡 45363)



大蒜油对小鼠免疫功能影响的研究

郑昱1郑建芳2
(1.河南省人民医院 河南郑州 450003;2.新乡市常乐制药有限责任公司 河南新乡 453613)

【摘要】目的 探讨不同剂量大蒜油对正常小鼠免疫功能的影响｡方法 160只健康雌小鼠随机分为4批,每批分为4笼,分别编号1～4号,每笼10只;4批小鼠中每批1号笼为空白对照,2､3､4号笼分别按照2.0 mg/kg､4.0 mg/kg､8.0 mg/kg低､中､高3个剂量大蒜油进行喂养31 d,第1批4笼小鼠进行脏器/体质量比值测定;第2批实验小鼠进行碳廓清实验;第3批实验小鼠进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;第4批小鼠进行小鼠淋巴细胞转化实验｡结果2､3､4号笼小鼠脏器/体质量比值与1号笼比较,差异均无统计学意义(P>0.05);高剂量大蒜油组小鼠的吞噬指数明显高于其他两组,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1号笼(P＜0.05),并且随着食用剂量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于对照1笼小鼠(P＜0.05)｡结论 大蒜油具有提高小鼠免疫功能的效果｡

【关键词】大蒜油;碳廓清能力;巨噬细胞;淋巴细胞转化实验

大蒜油,又叫大蒜素,是从大蒜中提取的一类与水不相混溶的油状成分的总称,具有大蒜特有的辛辣味｡大蒜油是大蒜的主要活性成分,具有抗菌消炎､提高机体免疫能力､预防和治疗心血管系统疾病､降血脂､保护肝脏､防癌抗癌和抗衰老等多种作用[1-4]｡本研究旨在探讨大蒜油对小鼠免疫功能的影响作用,为大蒜保健功能的开发利用提供参考｡

1 材料与方法

1.1 实验药物 大蒜油,由许昌元化生物科技有限公司生产,批号20141120,避光,置阴凉干燥处保存｡实验时使用大豆油配制成相应剂量｡

1.2 实验动物 选择清洁级健康昆明种雌性小鼠160只[北京华阜康生物科技股份有限公司,许可证号:SCXK(京2014-0004)],体质量为(20±2)g,随机分为4批,每批40只小鼠,随机分为4笼,分别编号1､2､3､4,每笼10只,所有小鼠统一进行基础标准喂养｡

1.3 实验仪器 电子天平､UV1700紫外分光光度计､二氧化碳培养箱､低速离心机､显微镜､无菌手术器械､微量注射器(25μl)､细胞计数器､24孔细胞培养板､玻璃平皿､200目筛网､计时器､血色素吸管､载玻片､纱布､试管等｡生理盐水､Hank's液､RPMⅠ1640培养液､小牛血清､酸性异丙酮､MTT､PBS缓冲液､印度墨汁､0.1%Na2CO3溶液､鸡红细胞､甲醇､Giemsa染液等｡

1.4 给药剂量 4批小鼠中每批1号笼为空白对照,2､3､4号笼分别按照2.0 mg/kg､4.0 mg/kg､8.0 mg/kg低､中､高3个剂量进行喂养,连续喂养31 d｡

1.5 实验方法

1.5.1 脏器/体质量比值测定 喂养31 d后将第1 批4笼小鼠称重,脱颈椎处死,取小鼠胸腺及脾脏,用滤纸将脏器表面血污吸干,去除筋膜,称重,计算胸腺/体质量､脾脏/体质量比值,统计胸腺指数和脾脏指数｡

1.5.2 碳廓清实验 第2批实验小鼠喂养31 d后称重,印度墨汁以生理盐水稀释4倍,按照小鼠每10 g体质量0.1 ml计算,进行小鼠尾静脉注射,立即计时,在注射2､10 min分别小鼠内眦静脉丛取血20μl,迅速注入2 ml的0.1%Na2CO3溶液内,摇匀,以0.1% Na2CO3溶液为空白对照,于紫外分光光度计(酶标仪)中在600 nm波长处测量光密度值(OD)｡脱颈椎处死小鼠,取肝脏和脾脏,吸净脏器表面污血,称重,以吞噬指数(a)表示小鼠碳廓清的能力,计算公式:

K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)

a=体质量/(肝重+脾重)×K1/3

注:K:廓清指数;t1:注射墨汁第1次取血时间;t2:注射墨汁第2次取血时间;OD1:t1时的血液标本的吸光光度值;OD2:t2时的血液标本的吸光光度值｡

1.5.3 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 第3批实验小鼠喂养31 d,小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬浊液1 ml,轻揉小鼠腹部,加速悬浊液分散,计时30 min,脱颈椎处死,将小鼠仰位置于鼠板上,腹腔注射生理盐水2 ml,继续轻揉腹部20次,吸取腹腔巨噬细胞洗液1 ml,滴于2片载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,放入37℃孵箱内温育30 min,用生理盐水冲洗,除去未贴片细胞,自然晾干,加入1∶1的丙酮-甲醇溶液固定,10 min后,再使用Giemsa-磷酸缓冲染色10 min,用蒸馏水漂洗后,吹干,进行镜检｡油镜下计数,每片计数100个巨噬细胞,计算100个腹腔巨噬细胞中吞有鸡红细胞的吞噬数,计算吞噬率和吞噬指数,计算公式:

吞噬百分率(P%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的吞噬细胞数×100%

吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

X=sin-1√p

1.5.4 小鼠淋巴细胞转化实验 第4批小鼠喂养31 d,脱颈椎处死,无菌环境下取脾脏,置于含有Hank's液的无菌培养皿中,用镊子将脾脏磨碎,制成单个细胞悬液,过200目筛过滤,制成细胞悬液,继续使用Hank's液洗2次,每次使用离心机以1 000 r/min离心5 min,将细胞悬浮于1 ml的完全培养液中,镜检计数,调整细胞浓度到3×106个/ml,然后将脾细胞悬液分2孔加入24孔培养板中,每孔1 ml,其中1孔中加入75μl的ConA液,另1孔不做处理,为空白对照,将培养板置于二氧化碳培养箱中培养72 h,箱中二氧化碳浓度为5%,恒温37℃,培养到68 h时,吸取两孔中的上清液0.7 ml,加入0.7 ml不含小牛血清的RPMⅠ1640培养液,以及50μl的MTT,继续培养至72 h｡从培养箱中拿出,两孔均加入1ml酸性异丙酮,进行吹打混匀,至紫色结晶完全溶解,将溶液移入比色杯中,用紫外-可见分光光度计进行比色测定,测定波长为570 nm,光密度差值越大,淋巴细胞增殖能力越强,计算方法:

光密度差值=ODConA-OD无ConA

1.6 统计学方法 所有实验资料使用SPSS 18.0软件进行数据处理,定量资料以(±s)表示,P＜0.05为差异有统计学意义｡

2 结果

2.1 大蒜油对小鼠脏器/体质量比值的影响 3笼小鼠以不同剂量大蒜油喂养31 d后,与未食用大蒜油的1号笼小鼠相比,脏器/体质量比值差异无统计学意义(P>0.05)｡见表1｡

表1 大蒜油对小鼠脏器/体质量比值的比较(n=10,±s)

表1 大蒜油对小鼠脏器/体质量比值的比较(n=10,±s)

组别 1号笼 2号笼 3号笼 4号笼P大蒜油剂量/(mg/kg)2.0 4.0 8.0胸腺指数 3.61±0.30 3.45±0.47 3.44±0.38 3.52±0.51 >0.05脾脏指数 4.25±0.64 4.50±0.22 4.52±0.43 4.40±0.48 >0.05 0

2.2 大蒜油对小鼠碳廓清能力的影响 喂食大蒜油的3笼小鼠吞噬指数均高于1号笼,并且高剂量组小鼠的吞噬指数明显高于其他两组(P＜0.05)｡见表2｡

2.3 大蒜油对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响

食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1号笼(P＜0.05),并且随着食用剂量的增加,吞噬率也成正比增高｡见表3｡

表2 大蒜油对小鼠碳廓清能力吞噬指数的比较(n=10,±s)

表2 大蒜油对小鼠碳廓清能力吞噬指数的比较(n=10,±s)

组别 大蒜油剂量/(mg/kg) 吞噬指数/aP 1号笼6.08±0.71 2号笼 2.0 6.32±0.51 >0.05 3号笼 4.0 6.44±0.48 >0.05 4号笼0 8.0 7.15±0.39 ＜0.05

表3 大蒜油对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的比较(n=10±s)

表3 大蒜油对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的比较(n=10±s)

组别 大蒜油剂量/(mg/kg)吞噬率/P%吞噬率平方根反正弦转换值/XP 1号笼0 15±8 0.39±0.18 2号笼 2.0 26±7 0.47±0.14 ＜0.05 3号笼 4.0 30±5 0.53±0.11 ＜0.05 4号笼8.0 37±8 0.66±0.09 ＜0.01

2.4 大蒜油对小鼠淋巴细胞转化能力的影响 食用大蒜油小鼠光密度差值均高于对照1笼小鼠(P＜0.05)｡见表4｡

表4 大蒜油对小鼠淋巴细胞转化能力的比较(n=10,±s)

表4 大蒜油对小鼠淋巴细胞转化能力的比较(n=10,±s)

组别 大蒜油剂量/(mg/kg) 光密度差值P 1号笼0.11±0.03 2号笼 2.0 0.13±0.03 ＜0.05 3号笼 4.0 0.16±0.02 ＜0.05 4号笼0 8.0 0.17±0.04 ＜0.05

3 讨论

大蒜为百合科葱属植物蒜的鳞茎,自古大蒜就为医食同源,一方面能够促进消化､增强食欲､分解动物性蛋白质利于人体吸收;另一方面,其被誉为“天然广谱抗生素",具有抗菌､抗病毒､抗原虫､抗炎等作用｡近年来研究显示,大蒜越来越多的药效如预防动脉硬化､降血脂､抗癌等被人们认识､接受,大蒜主要化学成分有挥发油､氨基酸､硫胺等,挥发油中大蒜辣素为主要有效成分[5]｡

本研究结果显示,2､3､4号笼小鼠脏器/体质量比值与1号笼比较,差异均无统计学意义(P>0.05);高剂量大蒜油组小鼠的吞噬指数明显高于其他两组,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1号笼(P＜0.05),并且随着食用剂量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于1号笼小鼠(P＜0.05)｡由此说明,大蒜油对小鼠脏器､体质量无明显影响,可提高小鼠的碳廓清能力､巨噬细胞的吞噬能力,增加淋巴细胞转化能力,增强小鼠免疫功能｡

参考文献

[1] 郭涛,储晓琴,颜鸣,等.大蒜油亚微乳的安全性及体外抗真菌作用[J].沈阳药科大学学报,2005,22(6):458-462.

[2] 付强强,曾涛,李阳.大蒜油对小鼠酒精性脂肪肝预防作用[J].中国公共卫生,2010,26(11):1408-1409.

[3] 郑国华,李会庆.大蒜提取液对小鼠脾脏及血清溶血素抗体影响[J].福建中医学院学报,2006,16(4):33-34.

[4] 樊治英,吴发印.大蒜油及其分解产物抗肿瘤机制的研究进展[J].中国医药指南,2015,13(5):45-46.

[5] 张静,孔德.大蒜油活性成分､制剂制备和配伍应用[J].世界临床药物,2010,1(10):611-615.

A study of the effects of garlic oil on the immune function ofm ice

Zheng Yu1,Zheng Jianfang2
(1.People's Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450003,China;2.Xinxiang Changle Pharmaceutical Co.,Ltd,Xinxiang 453613,China)

【Abstract】Objective To study the efects of diferent doses of garlic oil on the immune function ofmice.Methods 160 healthy femalemice were random ly divided into 4 groups,each group was divided into 4 cages respectively,no.1～4,10 per cage.No.1 cage in each group was selected as ck,2,3,4 cageswere fed with 2.0 mg/kg,4.0 mg/kg,8.0mg/kg(low,me-dium and high)three doses of garlic oil respectively for 31 d.The viscera/weight ratio was determined in the first4 cages;car-bon clearance testwas carried out in the second batch;the experiments thatmacrophages in abdominal cavity ofmice swalowed up chicken red blood cels was carried out in the third batch;the lymphocyte transformation test was carried out in the fouth batch.Resu lts There was no significant diference in viscera/weight ratio between no.1 cage and no.2～4 cages(P>0.05).The phagocytic index in high-dose garlic oil group was significantly higher than the other two groups(P＜0.05),and the car-bon clearance ability was improved.The phagocytic ratio ofmice eating garlic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05),and with the increase of consumption of dosage,the phagocytic ratio was increased.Optical density diference ofmice eating gar-lic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05).Conclusion Garlic oil could improve the immune function ofmice.

【Key words】garlic oil;carbon clearance ability;macrophages;lymphocyte transformation test

(收稿日期:2015-09-20)

【中图分类号】R 285

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.003