右归饮对肾阳虚型子宫颈癌患者术后免疫功能的影响

·临床研究·

右归饮对肾阳虚型子宫颈癌患者术后免疫功能的影响

霍炽文林小琦

东莞市第三人民医院妇科，广东东莞523000

摘要目的探讨右归饮对肾阳虚型子宫颈癌患者术后CD8+CD28- T细胞免疫功能的影响。方法搜集72例肾阳虚型子宫颈癌术后患者，将患者随机分为观察组和对照组，并选择33例健康者作为健康对照组。观察组35例给予右归饮治疗，对照组37例给予常规治疗，比较治疗前及治疗3个月后2组患者CD8+CD28-T细胞及其细胞因子白介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)百分含量变化。结果治疗前，观察组与对照组的CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1差异无统计学意义，且均显著高于健康对照组(P<0.05)。治疗后，观察组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1水平均较治疗前明显下降(P<0.05)，且均显著低于对照组(P<0.05)。结论CD8+CD28-T细胞及其细胞因子升高是子宫颈癌患者的重要表现，右归饮可显著下调肾阳虚型子宫颈癌患者术后CD8+CD28-T细胞的免疫功能。

关键词子宫颈癌患者；肾阳虚；右归饮；免疫功能

doi：10.3969/j.issn.1674-4616.2015.05.001

收稿日期：(2015-05-26)

Effect of Yougui Yin on the CD8+CD28-T Cells’Function for the Cervical Cancer Patients of

Kidney Yang Deficiency Who Underwent Excision

HUO Chiwen，LIN Xiaoqi

DepartmentofGynecology，theThirdPeople’sHospitalofDongguan，GuangdongDongguan523000，China

AbstractObjectiveTo study the effect of Yougui Yin on the CD8+CD28- T cells’function for the cervical cancer patients of kidney yang deficiency who underwent excision.MethodsSeventy-two cases of postoperative cervical cancer patients with kidney Yang deficiency were included.Thirty-five cases in the observation group were given Yougui Yin；the other thirty-seven cases in the control group were not given Yougui Yin.CD8+CD28- T cells，interleukin 10(IL-10)，and transforming growth factor beta 1(TGF-β1)were compared before and after treatment in the two groups.ResultsBefore treatment，there were no statistical differences for CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 between the observation group and the control group，and all of these were significantly higher than those of healthy people(P<0.05).After treatment，CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 in the observation group was significantly reduced(P<0.05)，and were significantly lower than those of the control group(P<0.05).ConclusionThe increase of CD8+CD28-T cells and its cytokines is one of the important manifestations in cervical cancer patients with kidney Yang deficiency；Yougui Yin can significantly improve by down-regulating CD8+CD28- T cell immune function.

Key wordscervical cancer patients；kidney Yang deficiency；Yougui Yin；immune function

肿瘤免疫调节治疗是当前的热点。中药复方是肿瘤术后治疗的主要措施之一，且多数经典方剂已经被发现具有调节免疫的药理学作用[1]，因此探讨妇科肿瘤术后的中药复方治疗具有重要临床意义。妇科肿瘤的辨证与肾紧密相关，其中肾精不足是主要病机，右归饮是常用的中药复方[2]。研究显示，CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)与子宫颈癌发病相关，且国内学者章圣辉等[3]发现子宫颈癌患者外周血CD4+CD25+Treg升高。同样作为Treg的CD8+CD28-T细胞，是否也参与子宫颈癌的发病？目前尚缺少该方面的探讨。为此，笔者使用右归丸治疗肾阳虚型子宫颈癌术后患者，观察CD8+CD28-Treg及其细胞因子变化，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2011年1月—2014年7月于本院就诊的肾阳虚型子宫颈癌术后患者72例作为观察对象，按随机法分为观察组(35例)与对照组(37例)，观察组给予右归丸治疗，对照组给予常规治疗，并另选33例健康者作为健康对照组。2患者组的年龄、性别、病程、子宫切除范围等临床资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1　2组一般临床资料比较

1.2纳入标准

①经术后病理学确诊为子宫颈癌；②术后证实分期为I～Ⅱ期，无病灶转移，不需化疗或放疗；③无合并其他肿瘤；④排除自身免疫性疾病；⑤近8周未使用激素或免疫抑制剂[4]；⑥依从性好，能坚持随访。按照中医证候标准[5]：证见虚胖体弱，畏寒怕冷，头昏无力，腰膝酸软，腹胀隆起，或腹胀有积液，白带稀薄，或贫血消瘦，胎薄白，脉细无力者归属肾阳虚。

1.3CD8+CD28-Treg的流式细胞术检测

CD8-FITC、CD28-PE、IFN-γ及IL-4抗体购自BECTON DICKINSON；溶血素OptiLyse C、同型对照试剂IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5购自BECKMAN COULTER公司；FACS Calibur多色流式细胞仪购自美国BD公司。采用Ficoll分离获得外周血单核细胞，随后应用尼龙毛柱获得T淋巴细胞，再用免

疫磁珠(MACS)孵育30 min后进行磁珠而分离出CD8+CD28-Treg，使用固定穿透剂对CD8+CD28-Treg胞内IL-10及TGF-β1进行染色，使用双激光光源，其中FL1和FL2荧光通道以相应同种型鼠IgG染色细胞作阴阳分界线，仔细设置各荧光通道之间的荧光补偿，然后进行IL-10及TGF-β1的检测，运用FACSDIVA软件对CD8+CD28-Treg、IL-10及TGF-β1百分含量进行分析[6]。

1.4治疗方法与随访

观察组在此基础上给予右归丸(北京同仁堂股份有限公司，国药准字Z11021040，10丸装，大蜜丸)治疗，每次1丸，每日3次，连服3个月。对照组给予常规治疗。治疗3个月后复查CD8+CD28-Treg及其细胞因子水平。2组患者均予基本随访，包括3大常规、腹部及妇科超声等检查[7]。

1.5统计学处理

2结果

治疗前，观察组与对照组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1差异均无统计学差异，但均显著高于健康对照组(P<0.05)。治疗后，观察组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1水平均显著低于对照组(P<0.05)，且观察组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均较治疗前明显下降(P<0.05)，且CD8+CD28-T细胞下降水平与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；对照组仅CD8+CD28-T细胞较治疗前显著下降(P<0.05)，而IL-10及TGF-β1均较治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　2组治疗前后免疫功能的变化 ± s)

与健康组比较*P<0.05；与对照组比较△P<0.05；与治疗前比较▲P<0.05

3讨论

CD8+T细胞与肿瘤的发病机制密切相关。部分肿瘤，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者表现为CD8+T细胞增多，而部分肠道肿瘤表现为CD8+T细胞降低[8]。因此，CD8+T细胞对于肿瘤而言具有异质性，亦即在不同的肿瘤，其扮演不同性质的角色。根据细胞膜是否表达CD28分子，CD8+T细胞可以被分为CD8+CD28+杀伤性T细胞及CD8+CD28-抑制性T细胞，后者由于可以表达细胞因子IL-10、TGF-β1从而发挥免疫增强或抑制的双重作用，因此CD8+CD28-T细胞归属到CD4+CD25+同类的调节性T细胞(Treg)当中[9]。究竟子宫颈癌患者的CD8+CD28-Treg发挥何种作用，目前尚缺少相关探讨。

宫颈癌属于中医“带下”、“无色带下”、“崩漏”等范畴。根据天癸学说及养生学说，子宫颈癌的核心病因病机为肾虚，此类患者多有起居无常，房事无节等，耗伤肾气而致肾阳虚[10]。

“以药测证”是重要的临证思想，是论证药物与证候是否呼应的重要手段。为探讨上述问题，笔者采用了右归饮作为观察CD8+CD28-Treg变化趋势及判断性质的药物。右归饮出自《景岳全书》，组成为熟地、山茱萸、山药、枸杞子、杜仲、菟丝子、附子、肉桂、当归、鹿角胶，具有温补肾阳、填充精血之功效[11]。近年右归丸被应用于卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌等妇科恶性肿瘤，尽管其药理机制尚未完全阐明，但现有的证据[12]显示，熟地、山药、枸杞子及鹿角胶等具有明确的免疫调节作用。

本研究发现，治疗前观察组与对照组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均无统计学差异，且均显著高于健康人，这与Pita-Lopez等[13]报道的低分化子宫颈癌患者外周血CD8+CD28-T细胞升高具有一致性，这初步说明CD8+CD28-T细胞可能是子宫颈癌的一个免疫学特征，提示其可能是一个对发病起负面作用的淋巴细胞；观察组与对照组上述三者无统计学差异，说明2组具有可比性。治疗后，观察组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均较治疗前明显下降，进一步印证CD8+CD28-T细胞可能是对病情不利的指标，而且观察组CD8+CD28-T细胞已下降至与健康人无统计学差异，说明CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1三者都是右归丸的主要靶淋巴细胞及靶细胞因子。治疗后，对照组仅CD8+CD28-T细胞较治疗前显著下降，而IL-10及TGF-β1均较治疗前无显著性差异，说明在手术本身可能仅促进CD8+CD28-T细胞的下降，而对其细胞因子分泌无明显影响。治疗后，观察组CD8+CD28-T细胞、IL-10及TGF-β1均显著低于对照组，进一步印证了是否应用右归丸治疗，2组患者的免疫功能呈现显著性差异。

通过本研究笔者认为，CD8+CD28-T细胞及其细胞因子升高是子宫颈癌患者的重要表现，前者可能是肾阳虚的物质基础，可能是属于“邪”范围的淋巴细胞。右归饮可显著下调肾阳虚型子宫颈癌患者术后CD8+CD28-T细胞的免疫功能，可能是该复方通过“驱邪”而实现“扶正”的药理学基础。

参考文献

[1]余霞.参麦注射液对早期子宫颈癌手术患者免疫功能的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(5)：218-219.

[2]李升华，郑冬梅.右归丸治疗肾阳虚型围绝经期功能失调性子宫出血的临床观察[J].中国中医药科技，2013，20(6)：666-667.

[3]章圣辉，韩义香，吴建波，等.子宫颈癌患者外周血CD4+CD2+CD127lo/-调节性T淋巴细胞的含量及肿瘤免疫水平检测[J].中华妇产科杂志，2007，42(6)：419-420.

[4]郑爱文，陈雅卿，方静，等.早期子宫颈癌术后肺转移的临床病理特征及危险因素分析[J].中华妇产科杂志，2015，50(3)：204-209.

[5]王居详，徐力.中医肿瘤治疗学[M].北京：中国中医药出版社，2014：396-403.

[6]KOSMACZEWSKA A，BOCKO D，CISZAK L，et al.Dysregulated expression of both the costimulatory CD28 and inhibitory CTLA-4 molecules in PB T cells of advanced cervical cancer patients suggests systemic immunosuppression related to disease progression[J].Pathol Oncol Res，2012，18(2)：479-489.

[7]阿仙姑·哈斯木，李巧稚，阿布力孜·阿布杜拉.维吾尔族妇女宫颈病变组织中HLA-Ⅰ类抗原、CD3和CD8的表达[J].临床与实验病理学杂志，2010，26(6)：684-687.

[8]陈瑜，徐曼，肖琳，等.人子宫颈癌异常表达程序性死亡配体-1并促CD4+T和CD8+T细胞凋亡[J].重庆医科大学学报，2012，37(10)：859-863.

[9]LI N，JI PY，SONG LG，et al The expression of molecule CD28 and CD38 on CD4+/CD8+T lymphocytes in thymus and spleen elicited by Schistosoma japonicum infection in mice model[J].Parasitol Res，2015，114(8)：3047-3058.

[10]周敏，方晓阳.左归丸及右归丸创方思想的历史考察[J].中医杂志，2015，56(11)：901-905.

[11]陈杰，李晶，封玉玲，等.右归丸补肾填精的药理作用[J].中国实验方剂学杂志，2015，21(3)：134-137.

[12]杨锋，李小群，杨利学，等.右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响[J].中华中医药杂志，2015，30(1)：263-266.

[13]PITA-LOPEZ ML，ORTIZ-LAZARENO PC，NAVARR-O-MEZA M，et al.CD28-，CD45 RA(null/dim)and natural killer-like CD8+T cells are increased in peripheral blood of women with low-grade cervical lesions[J].Cancer Cell Int，2014，14(1)：97-98.