小儿止咳合剂微生物限度检查*

张凤羽，郑兆银

(天津市静海县药品检验所，天津市301600)

小儿止咳合剂微生物限度检查*

张凤羽，郑兆银

(天津市静海县药品检验所，天津市301600)

目的:建立小儿止咳合剂微生物限度检查方法并验证。方法:按《中国药典》微生物限度检查法，通过常规法和培养基稀释法测定小儿止咳合剂对五种验证菌株的回收率，并对控制菌检查方法进行验证。结果:常规法试验对大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉无抑制作用，而对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强抑制作用;采用培养基稀释法，使金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率均大于70%。控制菌检查采用常规法。结论:本方法能准确检测出小儿止咳合剂中污染菌。

微生物限度检查法，验证，培养基稀释法

小儿止咳合剂是由前胡、冬瓜子、桑白皮、桔梗、苦杏仁、黄芩、百部等12味药组成，主治小儿肺热咳嗽，症见咳嗽气粗，痰多而黏，鼻咽干燥，身热面赤，口渴便秘。为了真实反映出药品中污染生物的情况，有必要对采取的方法进行验证，建立小儿止咳合剂的微生物检查方法。

1 材料

1.1 仪器LDZX－50FBS型蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂)、RS－1型涡旋仪(北京昊诺斯科技有限公司)、GZX－9240MBE型数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、DHP－9162型电热恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)、MJ－250BS－II型霉菌培养箱(上海新苗医疗器械制造有限公司)、SPX－250B生化培养箱(天津市华北实验仪器有限公司)等。

1.2 菌种金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B) 63501］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］和黑曲霉［CMCC(F)98003］均为第二代，购于天津市药品检验所。

1.3 培养基及稀释剂营养琼脂培养基(110512)、玫瑰红钠琼脂培养基(110312)、胆盐乳糖培养基(1204192)、营养肉汤培养基(120626)、改良马丁培养基(20101011)、MUG培养基(100111)和改良马丁琼脂培养基(20110212)，均为北京三药科技发展公司提供;pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液，所用试剂均为分析纯。

1.4 样品小儿止咳合剂(某医院制剂，批号120424、120516、120702)。

2 方法与结果

2.1 试验菌液的制备按《中国药典》2010年版一部附录微生物限度检查法制备［1］。

2.2 供试液的制备取本品原液作为供试液。

2.3 验证方法

2.3.1 常规法试验组:分别吸取供试液1 ml和含菌数为50～100 cfu的试验菌液1 ml置同一个无菌平皿中。菌液组:吸取含菌数为50～100 cfu的试验菌液1 ml置无菌平皿中。供试品对照组:吸取供试液1 ml置无菌平皿中。每组平行制备2个平板，分别立即倾注不超过45℃的营养琼脂培养基15～20 ml，在30～35℃培养48 h，或分别倾注不超过45℃的玫瑰红钠琼脂培养基15～20 ml，在23～28℃培养72 h，点计菌落数，分别计算各试验菌每次试验的菌回收率。

菌回收率(%)=(试验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数)∕菌液组平均菌落数×100%。结果小儿止咳合剂对大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉无抑制作用，回收率均大于70%，而对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强抑制作用，见表1。

表1 常规法回收率的试验结果

2.3.2 培养基稀释法试验组:分取供试液0.5、0.2和0.1 ml及含菌为50～100 cfu的菌液，每菌株制备6个平皿(每个浓度2个平皿)，其他同于常规法［2］。结果供试液加入量为0.2 ml时，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率均大于70%，说明培养基稀释法可消除小儿止咳合剂对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用，见表2。

表2 培养基稀释法回收率的试验结果

2.3.3 控制菌检查方法的验证试验组:取供试液10 ml及含菌数为10～100 cfu大肠埃希菌菌液1 ml加入胆盐乳糖培养基中，按《中国药典》2010年版一部附录微生物限度检查法进行检查。阴性对照组:取供试液10 ml及含菌数为10～100 cfu金黄色葡萄球菌菌液1 ml加入胆盐乳糖培养基中，方法同试验组。阳性对照组:取含菌数为10～100 cfu大肠埃希菌菌液1 ml加入胆盐乳糖培养基中，方法同试验组。供试品对照组:同试验组，不加大肠埃希菌菌液。结果阴性对照组未检出阴性对照菌，试验组与阳性对照组均检出大肠埃希菌，说明控制菌检查方法可按常规法进行，见表3。

表3 大肠埃希菌检查方法试验结果

3 讨论

该制剂为医院制剂，处方中的药味比较多，成分也比较复杂，各成分之间相互作用的机理并不是十分明确。制剂中可能存在着某种抑菌成分，在很大程度上影响着微生物限度检查的准确性、可靠性。因此依据《中国药典》收载的除去供试品抑菌作用的方法，本实验采用了培养基稀释法和薄膜过滤法进行预试验，结果两种方法的回收率均在70%以上。鉴于培养基稀释法的操作方法简便易行，且不需要特殊的仪器设备，因此本制剂的细菌计数可采用培养基稀释法。霉菌、酵母菌和控制菌的检查可采用常规法进行检查。

1中国药典［S］.一部.2010:附录79，附录138

2郭朝晖，何晓英，欧阳晓玫.当归腹宁滴丸微生物限度检查法的建立［J］.中国药房，2009，20(3):213

Microbial limit test for Xiaoer Zhike Mixture

Zhang Fengyu，Zheng Zhaoyin
(The Insitiute for Drug Control of Jinghai，Tianjin 301600)

Objective:To establish a microbial limit test method for Xiaoer Zhike Mixture.Methods:In accordance with Chinese Pharmacopoeia 2010th edition，the recovery of five tested strains treated with Xiaoer Zhike Mixture was determined by the plating method and the medium dilution method.The test method for the control bacteria was verified.Results:For plating method，Xiaoer Zhike Mixture，which had no inhibitory action on escherichia coli，canidia albicans and aspergillus niger，had potent bacteriostatic action on staphylococcus aureus and bacillus subtilis.For the culture medium dilution method，the recovery rate of staphylococcus aureus and bacillus subtilis was over 70%，respectively.Conclusion:The contaminated bacteria in Xiaoer Zhike Mixture can detected accurately by the method established in this study.

Microbial Limit Test，verification，culture medium diluted method

R927.11

A

1006－5687(2014)02－0034－02

2013－10－21