龙牡桂枝汤改善注意缺陷多动障碍模型大鼠行为的实验研究

何平，唐彦，杨若俊

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)简称儿童多动症，主要表现为注意缺陷、多动、冲动，常伴学习困难，是儿童最常见的行为障碍之一，严重影响其身心健康及学业成绩。云南省名老中医刘以敏教授从医近五十年，是全国第三、五批老中医学术经验继承指导老师，对于多动症的证治有着深厚的理论积淀和丰富的临床经验。他以仲景经方桂枝加龙骨牡蛎汤合甘麦大枣汤化裁，创制龙牡桂枝汤治疗ADHD疗效确切[1]，尤其能改善患儿的注意力。本实验应用目前国际上使用最为广泛的ADHD动物模型[2]——自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)，通过开场实验和Làt迷宫，探索龙牡桂枝汤对ADHD动物模型自发活动和非选择性注意力的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性SHR大鼠48只，鼠龄5周，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2 实验设备 (1)开场实验箱：装置及操作参考池霞等[3]的文献自制，为60 cm×60 cm×40 cm木制箱体，用线条将箱子底部分为20 cm×20 cm的9个方格。(2)Làt迷宫[4]：在开场实验箱中间放置一个30 cm×30 cm的透明有机玻璃箱，产生一个宽15 cm、长60 cm、高40 cm的通道，用一只4 W的冷光源，放置在木箱上方60 cm处。

1.3 药物及制备 药方由桂枝、白芍、生龙骨、生牡蛎、石菖蒲、炙远志、浮小麦、小枣、炙甘草组成，由云南中医学院第一附属医院门诊部药房提供，制成水煎剂后，按高、中剂量给药，配成含生药1.8 g/mL、0.9 g/mL的溶液并充分搅匀，用量分别为18 g/kg、9 g/kg贮于4 ℃冰箱备用；盐酸哌甲酯控释片(美国ALZA公司，批号：0DA3915)，每次灌胃时当场配制，使药物浓度为0.375 g/L，用量为3.75 mg/kg。

1.4 分组及给药 48只雄性SHR大鼠饲养于清洁级环境中，平衡1周后，按随机数字表法分为生理盐水对照组、盐酸哌甲酯对照组、龙牡桂枝汤中剂量组和龙牡桂枝汤高剂量组4组，均按10 mL/kg灌胃。每日给药1次，共14 d。用药前后进行行为学检测。

1.5 行为学检测方法 (1)开场实验：实验时将大鼠轻轻放入中央格子，在光亮条件下，观察5 min内大鼠的活动情况，以大鼠穿越的格子数和直立次数来衡量其自发活动水平。(2)Làt迷宫：实验时将大鼠轻轻放入角落，通过给大鼠一个视觉空间注意目标，观察10 min内大鼠的活动情况，记录其斜搭在玻璃箱上的次数，作为对环境刺激的非选择性注意指标。

2 结果

2.1 大鼠在开场实验中的行为表现 见表1。

表1 给药前穿越格子数和直立次数比较±s，n=12)

表1结果表明，给药前各组大鼠在实验箱中的穿越格子数和直立次数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药14 d后，各药物组与生理盐水组比较，SHR穿越格子数和直立次数明显减少，差异有统计学意义(P<0.01)；盐酸哌甲酯组大鼠穿越格子数和直立次数少于中药中剂量组，差异有统计学意义(P<0.05)，而中药高剂量组与盐酸哌甲酯比较差异无统计学意义(P>0.05)。提示中药和西药均能明显减少模型动物的自发活动，高剂量龙牡桂枝汤的作用与盐酸哌甲酯相近。

2.2 大鼠在Làt迷宫中的行为表现 见表2。

表2 给药前后各组大鼠斜搭次数比较±s，n=12)

表2结果表明，给药前各组大鼠斜搭次数差异均无统计学意义(P>0.05)。给药14 d后，各药物组与生理盐水组比较斜搭次数均增多，差异有统计学意义(P<0.01)；中药高剂量组斜搭次数多于中剂量组及盐酸哌甲酯组，差异有统计学意义(P<0.05)，中药中剂量组与盐酸哌甲酯组比较差异无统计学意义(P>0.05)。提示中药和西药对模型动物的非选择性注意力水平均有明显改善作用，而高剂量龙牡桂枝汤的作用优于盐酸哌甲酯。

3 讨论

ADHD的病因和发病机制至今尚未明确，其核心症状注意缺陷对学业和职业成就的影响较为深远，多动只是一个从属现象。中医认为，本病与遗传有较大关联，肾为先天之本，藏精舍志，故肾藏精气是基础；心主神明，注意力不集中是心神失调；肝主疏泄，情绪不稳是气机失于调畅。故本病与心、肝、肾三脏气血升降失调，阴阳水火失济有关，治疗则以交通心肾，开窍宁神，潜阳入阴为法，据此刘以敏教授以仲景《金匮》之桂枝加龙骨牡蛎汤合甘麦大枣汤化裁，创制了龙牡桂枝汤，方中桂枝味辛可制肝，白芍味酸可柔肝，二药相须为用，收敛浮越阳气；重用龙骨、牡蛎潜阳安神；龙骨、牡蛎之重镇可下交于肾，桂枝升发阴气而上交于心；浮小麦养心除烦，小枣宁心安神；基于“怪病顽症多有痰作祟”，龙骨、牡蛎降逆化痰；石菖蒲豁痰开窍；远志清心化痰，均可化无形之痰，以“开心窍，通神明”，炙甘草调和诸药，以上九药合用，蕴涵了升降互补、刚柔相济、相反相成的配伍思想，尤有“调和阴阳”之妙，用于心肝肾失调所致以注意缺陷为主的ADHD患儿，疗效甚佳。

本研究所采用的ADHD动物模型幼年SHR能同时表现出注意缺陷、冲动、多动等ADHD的核心症状，神经病理、生化和药理研究也支持其作为动物模型的合理性，是目前公认的研究ADHD最好的动物模型[5]，应用开场实验和Làt迷宫实验观察动物自发活动和非选择性注意力是目前应用最广泛、最基本的检测方法[6]。本研究首先通过动物行为学观察评价了龙牡桂枝汤的药效，结果显示，在开场实验中，龙牡桂枝汤高剂量组降低SHR自发活动水平与ADHD一线治疗药物盐酸哌甲酯相近；在Làt迷宫实验中，龙牡桂枝汤高剂量组提高SHR非选择性注意力水平的作用优于盐酸哌甲酯。本研究在动物实验中验证了龙牡桂枝汤的疗效，证实了此方能减少多动，尤其对注意力的改善较为突出。研究结果为临床用药提供了实验依据，其作用机制值得深入探索。

[1] 何平,朱瑛.刘以敏老师辨证治疗儿童多动症经验初探[J].云南中医中药杂志,2006,27(1):5.

[2] 池霞,郭锡熔,陈荣华.注意缺陷障碍的动物模型[J].国外医学：儿科学分册,2004,31(6)：317-319.

[3] 池霞,郭锡熔,陈荣华,等.注意缺陷障碍动物模型的行为学特征检测[J].中国临床康复,2006,10(38):68-70.

[4] Ruocco LA,de Souza Silva MA,Topic B,et al.Intranasal application of dopamine reduces activity and improves attention in naples high excitability rats that feature the mesocortical variant of ADHD[J].Eur Neuropsychopharmacol,2009,19(10):693-701.

[5] Davids E,Zhang K,Tarazi FI,et al.Animal models of attention-deficit hyperactivity disorder[J].Brain Res Brain Res Rev,2003,42(1):1-21.

[6] 洪琴,池霞,陈荣华.注意缺陷障碍动物模型的行为学检测[J].国际儿科学杂志,2007,34(1):9-11.

(收稿日期：2014-04-08)