气相色谱法（GC）测定瓜蒌子中3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇的含量

杨晓颖

气相色谱法（GC）测定瓜蒌子中3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇的含量

杨晓颖

目的 建立气相色谱法测定瓜蒌子中3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇含量的方法。方法 Agilent DB-1701毛细管柱（30mm×0.32mm(内径)×0.25μm），流量2.0mL/min；进样口温度280℃；检测器温度320℃；升温程序为70℃保持1.5min，以20℃/min-1升温至230℃保持2min，10℃/min升温至280℃保持8min。结果 在0.009625～0.09625mg/mL范围内，呈现良好线性关系（r＝0.9998），平均回收率为99.97%，RSD为1.09%。结论 本法简便可行、重复性好、灵敏度高，适用于瓜蒌子的质量控制。

瓜蒌子；气相色谱法；3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇

瓜蒌子为葫芦科(Cucurbitaceae)植物瓜萎和双边瓜蒌的干燥成熟种子，具有润肺化痰、滑肠通便之功效[1]。先期的研究表明，瓜蒌子种子含有括楼仁二醇、3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇、异括楼仁二醇等多种五环三萜化合物[2]，并有部分学者应用HPLC法对3,29-二苯甲酞基括楼仁三醇进行了测定[3]。本文着重研究气相色谱测定3,29-二苯甲酞基括楼仁三醇的含量，为瓜蒌子质量评价和品质控制提供可量化的新的技术参数。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 Agilent 6890N气相色谱仪，Agilent G1888A顶空自动进样器 (Agilent公司，美国)；Mettler Toledo AG135型万分之一电子分析天平（瑞士）。

水为超纯水（屈臣氏双蒸水），其余试剂均为分析纯。3,29-二苯甲酞基括楼仁三醇对照品（批号20100913，纯度 99.5%）、内标物质胆固醇（批号20100621，纯度：99.7%）均购自中国药品生物制品检定所。

瓜蒌子药材采集于信阳、焦作、驻马店，经专家鉴定为葫芦科(Cucurbitaceae)植物瓜萎（Trichosanthes kirilowii Maxim）干燥成熟种子。取药材粉碎，过40目筛，制成粗粉，40℃恒温干燥6h，得药材样品。

1.2 色谱条件 色谱柱：Agilent DB-1701毛细管柱（30mm×0.32mm(内径)×0.25μm）；流量2.0mL/min；进样口温度280℃；检测器温度320℃；升温程序为70℃保持1.5min,以20℃/min升温至230℃保持2min,10℃/min升温至280℃保持8min;载气为氮气；进样量1.0μl。色谱图见图1。

1.3 溶液的制备

1.3.1 内标溶液的制备 精密称胆固醇适量，加氯仿溶解并稀释成1mL含1.4895mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。

1.3.2 对照品标准溶液 精确称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品7.4475mg，置25mL的量瓶中，加入内标溶液5mL，氯仿定容，得浓度为0.2979mg/mL的标准品溶液。

1.3.3 供试品溶液 精确称取干燥的瓜蒌子粉末1g于索氏抽提器中，氯仿100mL，内标溶液1mL，热回流提取2h，提取2次，提取液过滤后，浓缩定容至50mL，得3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇提取物。

2 结果

2.1 线性关系考察 精确称取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品3.85mg，置20mL的量瓶中，加入内标溶液1mL，氯仿溶解并定容，摇匀分别精密吸取3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇对照品储备液1、2、3、5、7、10mL于20mL量瓶中，加氯仿稀释至相应的刻度，摇匀，得到不同浓度系列溶液。按照2.1项色谱条件进行测定。以3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇浓度（X）为横坐标，3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇峰面积与胆固醇峰面积的比值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=2987.36X－239（r=0.9998）。结果表明，3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇在0.009625～0.09625mg/mL范围内同其与相应胆固醇峰面积的比值呈现良好线性关系。

2.2 稳定性试验 取同一样品粉末约1.0g，精密秤定。按2.2.3项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、5、10、15、24h精密吸取供试品溶液1μl进样，计算3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇峰与胆固醇峰面积的比值，结果RSD为1.12%，表明供试品溶液在24h内稳定性较好。

2.3 精密度试验 精密吸取对照品标准溶液1mL于5mL量瓶中，氯仿定容。精密吸取溶液1μl，重复进样6次,按2.1项下色谱条件测定。计算3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇峰与胆固醇峰面积的比值，结果RSD为1.09 %，表明方法精密度良好。

2.4 重复性试验 取同一样品粉末6份，每份约1.0g，精密秤定。按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，结果3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇含量为1.487mg/g，RSD为1.19%。结果表明方法重复性良好。

2.5 加样回收率的测定 精密称取已知含量样品9份，每份约0.5g，分别加入标准品溶液（浓度为0.2979mg/mL）2、2.5、3mL，分低、中、高3个浓度进行加样回收试验，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按照2.1项条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

图1 气相色谱图（A.对照品；B.样品；1-内标，2-3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇）

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.6 样品含量的测定 精密称取采集不同地区样品3份，每份约1.0g，分别按照2.2.3项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件测定，计算3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇的含量。结果信阳、焦作、驻马店样品含量分别为1.487、1.398、4.493mg/g，平均含量为2.623mg/g，RSD为1.02%。

3 讨论

3.1 提取方法的选择 对瓜蒌子中3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇提取时，选择了超声波提取和索氏抽提器回流提取，结果显示索氏抽提器回流提取得率较高，故选用索氏抽提器回流提取。

3.2 溶剂的选择 根据文献方法[1-2]，比较了氯仿、乙酸乙醋、乙醚、甲醇等常用溶剂的提取效果。结果显示，当提取液中存在乙酸乙醋和乙醚时，检测干扰较大。这可能是由于瓜蒌子中脂肪油和萜的种类较多，彼此结构相似，根据相似相容原理，而使得大量杂质引入。而氯仿作为溶剂，杂质干扰较小，通过比较最终选择氯仿作为溶剂，分离效果和峰型明显，无干扰。

3.3 色谱条件的选择 本文对3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇的升温程序进行了比较，发现升温程序在80℃，保持2min，以15℃/min的速率升至230℃，保持2min，10℃/min升温至280℃保持8min；可达到较好的分离效果。但实验中发现在这种条件下的峰型较宽且峰与峰之间的分离度较低，主要可能升温速率慢，色谱流出时间过长。通过改变色谱条件，加快升温速率，即70℃保持1.5min，以20℃/min升温至230℃保持2min,10℃/min升温至280℃保持8min；进样口温度：280℃，通过此程序升温的方法，待测组分的良好分离，又能实现尽可能短的分析时间，使3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇得到较好的分离。

[1] 国家药典委员会.中国药典·一部[S].2010:104.

[2] 唐春风.瓜萎子的化学成分和定性定量研究[D].沈阳:中国医科大学，2005.

[3] 程雪梅，吴技，俞桂新,等.RP-HPLC法测定瓜萎子中3,29-二苯甲酞基括楼仁三醇含量[J].药物分析，2005,25(4):377-379.

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.24.014

462600 河南省临颍县第二人民医院（杨晓颖）