高效液相色谱法测定复方磺胺甲恶唑片中SMZ、TMP的含量

吕 璐，石向群，郑由敏，周凯凤，孙利利

（九江学院基础医学院，江西 九江 332000）

高效液相色谱法测定复方磺胺甲恶唑片中SMZ、TMP的含量

吕 璐，石向群，郑由敏，周凯凤，孙利利

（九江学院基础医学院，江西 九江 332000）

目的 建立测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑（SMZ）和甲氧苄啶（TMP）含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱C18（5 μm，4.6 mm ×150 mm），以0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 ml/min，检测波长为 240 nm，柱温 40℃，峰面积外标法。结果 SMZ 在 20～100 μg/ml有良好的线性，r=0.993 1；TMP 在 4～20 μg/ml有良好的线性，r=0.996 6。结论 此法简单、专属性强、重现性好、结果准确，可作为该片剂质量控制的参考方法。

高效液相色谱法；复方磺胺甲恶唑片；SMZ含量；TMP含量

复方磺胺甲恶唑片是临床常用的磺胺类抗菌消炎药，其主要成分为磺胺甲恶唑（SMZ）和甲氧苄啶（TMP）。《中国药典》（2000年版）采用等吸收双波长分光光度法对2组份分别进行测定。另有文献报道采用倍率减差双波长法、三波长法、吸收度线性线合法、双波长比值光谱法等方法测定其含量，但均存在操作或计算较为繁琐的缺点。现采用高效液相色谱法，对2组份SMZ、TMP同时进行测定。

1 实验部分

1.1 仪器

高效液相色谱仪（瓦里安Varian Prostar 230 SDM/325 UV）；液相工作站（Varian Star 6.4）；电子分析天平（赛多利斯Sartorius CP324S）；高速离心机（中佳HC-2518）；超声波清洗机（宁波新芝生物）；无油隔膜真空泵（天津奥特赛恩斯）。

1.2 试药

对照品：磺胺甲恶唑、甲氧苄啶（中国药品生物鉴定所提供）；复方磺胺甲恶唑片（SMZ 0.4 g、TMP 0.08 g，湖北华中药业有限公司生产）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

1.3 步骤与条件

1.3.1 色谱条件 色谱柱是Varian C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流动相为甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）；以甲醇比例20%～60%梯度洗脱；检测波长240 nm；流速1.0 ml/min；进样量 100 μl，定量环 20μl；柱温 40℃；样品分析时间 10 min。

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取经105℃干燥至恒重的对照品SMZ 12.5 mg、TMP 2.5 mg置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取对照品溶液0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml分别置10 ml量瓶中，加甲醇使各容量瓶中溶液的体积为3 ml，加含20%甲醇的流动相定容至刻度，摇匀，配成标1、标2、标3、标4、标5混标溶液，以 15 000 r/min 离心 10 min，取上清液进样。

1.3.3 样品溶液的制备 取复方磺胺甲恶唑10片，精密称定，研细。精密称适量(约相当于SMZ 12.5 mg、TMP 2.5 mg)置25 ml量瓶中，加甲醇适量，经超声处理15 min后，加甲醇稀释至刻度。摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1.6 ml，置10 ml量瓶中，参照2.2方法定容、离心、进样。

2 结果与讨论

2.1 保留时间试验

取标2和样品各一份，分别按100μl进样，按2.1色谱条件进行分析，结果标2的保留时间为SMZ 6.848 6 min、TMP 5.408 6min，样品的保留时间为SMZ6.8453min、TMP5.4089min，其HPLC色谱图见图1。

图1 对照品及样品HPLC色谱图

2.2 线性关系考察

分别取系列标准溶液100 μl，依次进样，按2.1色谱条件进行分析，分别测其峰面积，采用外标法，分别以SMZ和TMP峰面积Y为纵坐标，各组份的浓度X（mg/ml）为横坐标，进行线性回归，得回归方程，相关系数及线性范围分别为SMZ：Y=+1.650 0 e+008 x+6.636 0 e+005，r=0.993 1，线性范围为 20～100 mg/ml；TMP：Y=+5.890 2 e+008 x+2.168 5 e+006，r=0.996 6，线性范围为4～20 mg/ml。对照品溶液标准曲线见图2。

图2 对照品标准曲线

2.3 精密度试验

取标3对照品溶液100 μl，重复进样3次，按照2.1色谱条件进行分析，计算含量，结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.4 样品含量测定

分别取3份样品溶液进样，按照2.1色谱条件进行分析，计算含量，结果见表2。

表2 样品试验结果

测得的SMZ和TMP含量分别是复方磺胺甲恶唑片标示量的94.81%和92.75%。

2.5 加标回收试验

在样品中加入一定量的对照品母液，配置成3份加标溶液，分别进样，按2.1色谱条件进行分析，做加标回收试验，计算回收率。结果见表3。

表3 加标回收试验结果（%）

2.6 讨论

2.6.1 检测波长的选择 复方磺胺甲恶唑片中SMZ、TMP的规格分别为4 mg/片、0.8 mg/片，含量相差较大，故本试验选择TMP紫外吸收度较大的波长（240 nm）为检测波长，以提高TMP测定的灵敏度和准确性。

2.6.2 洗脱方式的选择 本试验以甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）=80：20作为流动相系统进行等度洗脱，只出现一个峰，且前沿峰明显，产生的原因可能是柱温低、样品溶剂使用不当、柱过载等。采用梯度洗脱甲醇20%～50%2峰仍未分开，最后采用20%～60%甲醇梯度洗脱终使2峰完全分开。

2.6.3 流动相的组成及选择 2005年版药典中以水：乙腈：三乙胺=799：200：1（用氢氧化钠试液或冰醋酸调节pH值至5.9）为流动相，等度洗脱。为提高方法环境适用性，本试验考察了甲醇：水：冰醋酸：三乙胺 =225：345：0.5：0.2，作为流动相体系，虽然SMZ和TMP可以得到分离，但保留时间不一致；而采用甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）=80：20作为流动相等度洗脱，只出现溶剂峰，样品未分离；最后采用甲醇20%～60%梯度洗脱，能使2峰达到基线分离、保留时间一致、分离度好、重现性好、结果准确，可作为该片剂质量控制的参考方法。

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1671-1246（2011）08-0110-02