泽泻不同炮制工艺及评价方法的研究

谢一辉， 余无双， 周丽姣， 罗金龙

(1.江西中医学院，江西南昌330004;2.阿斯利康(无锡)贸易有限公司，广东 珠海519000)

泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎。性味甘、寒，归肾、膀胱经。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕热淋涩痛，高血脂［1］。泽泻的炮制方法自古就有，包括酒浸、酒浸后炙、微炒、酒浸后蒸、清蒸、皂角水浸焙干、蒸焙干、米泔水浸后蒸、米泔浸后炒、盐水伴、盐水炒焦、酒炒、酒伴、酒伴烘等炮制方法［2］。现在临床使用的泽泻炮制饮片主要有盐泽泻、麸炒泽泻。中国药典(2005年版)收载品种为盐泽泻，樟帮法主要有麸炒泽泻和麸炒盐泽泻。樟帮法与药典法泽泻炮制的区别在于［3］，樟帮法盐炙后炒或单纯麸炒都要用辅料麦麸炮制，使泽泻饮片外观色泽均匀、金黄。然而，饮片外观美观均匀是否表明饮片的内在质量更好?本实验以泽泻有效成分和饮片外观色泽为指标，优化各炮制工艺。并定量分析饮片外观色泽差与饮片内在质量的关系，阐明以饮片外观色度差作为评判饮片质量指标的可行性。

1 仪器试剂

Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司);Diamonsil C18(5 μm，250 mm ×4.6 mm)(DIKMA公司);数码照相机:DSC－T70(Sony公司);TN408LC型红外测温枪(上海仪迷杰光电技术有限公司);KQ3200型超声仪;SZ－96A自动三重蒸馏水器(上海亚荣生化仪器有限公司);DE－3350光照仪(台北得益工业仪器有限公司);数据挖掘软件Clementine 8.0(SPSS公司);Adobe Photoshop 9.0;泽泻药材产于江西广昌泽泻种植基地(由我院褚小兰教授鉴定);对照品24－乙酰泽泻醇A(含量98.6%)和23－乙酰泽泻醇B(含量98.9%)(购自上海海灿化工科技有限公司);甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 评判指标的选择

泽泻功效主要表现在二个方面:利尿和降脂。泽泻中四环三萜类成分以及二萜类成分均有利尿作用，其中以23－乙酰泽泻醇B的作用最强，并有增加尿量的倾向［4］。四环三萜类成分也是泽泻降脂的主要有效成分，其中以24－乙酰泽泻醇A的作用最强［5］。故这2个有效成分为工艺优化的内在评判指标。

传统的炮制方法往往以饮片厚薄、颜色、气味为评判饮片优劣的指标，在中药饮片的销售中，常常也以饮片外观色泽来判断其质量的好坏。可见饮片外观色泽是评判中药饮片的一项重要指标。在现行的炮制工艺中，质量控制参数如火候的大小、饮片色泽等的评判都是凭操作人员手摸、眼观的经验，这虽然能够相对反映饮片的质量、工艺特色，但因其具有相当大的主观性，很难控制饮片质量一致性，使得饮片质量不稳定。本实验以饮片外观色度差和色泽均匀性为评判指标，通过对饮片色泽信息的提取，定量描述不同炮制条件下的饮片色泽差，为规范炮制工艺提供定量依据。同时分析了饮片外观色泽与饮片内在质量的关系，以及饮片外观色泽与炮制工艺参数的关系。

3 正交实验设计

根据相关文献对炮制方法的记载和预实验，采用正交L16(45)表，每个实验取泽泻生饮片250 g，用电炒锅炮制，用测温枪测定锅底温度，确定樟帮法麸炒泽泻因素水平为:炮制温度(180、220、260、300℃)，炒制时间(2、4、6、8 min)，麦麸量(10、25、40、55 g)，蜜量(0、0.125、0.25、0.375 g)。樟帮法麸炒盐泽泻工艺因素水平为:炮制温度(180、220、260、300 ℃)，炒制时间(4、6、8、10 min)，闷润时间(4、8、12、16 h)，麦麸量(10、25、40、55 g)，盐水量(15 mL水中含食盐3、4、5、6 g)。药典盐泽泻工艺因素水平为:炮制温度(180、220、260、300 ℃)，炒制时间(4、6、8、10 min)，闷润时间(4、8、12、16 h)，盐水量(15 mL 水中含食盐3、4、5、6 g)。

4 饮片炮制与评判检测的测定

每炮制工艺取生泽泻饮片48份，每份250 g，分成16组，每组3份，按3项正交实验设计工艺条件，平行炮制3份。每炮制工艺分别制得48份泽泻炮制饮片样品。

24－乙酰泽泻醇A和23－乙酰泽泻醇B含量的测定［6］:色谱柱:纳特(Inertsil ODS－3 C18，5 μL，250 mm×4.6 mm)，流动相:乙腈∶水 =78∶22，检测波长:208 nm，柱温:25℃，流速:1.0 mL/min，进样量:20 μL。

饮片外观色度差和饮片色泽均匀性测定［6］:取炮制饮片，随机取出5～10片，在CIE规定的D65标准光源［7］条件下获取各批饮片外观的色泽信息(照片文件)。用Adobe Photoshop9.0分别读入各批饮片外观的色泽信息数据(照片文件)，读取饮片的色泽指标数据 L、a、b值。用最新色差公式CIEDE2000计算各批饮片的色度差和饮片色泽均匀性。

5 结果与分析

以不同工艺的因素为自变量，饮片外观色度差，饮片色泽均匀性，24－乙酰泽泻醇A含量，23－乙酰泽泻醇B含量为评判指标，用13.0版SPSS统计软件进行相关性和方差分析，结果见表1～3。

表1 樟帮法麸炒泽泻正交实验检测指标数据的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

表2 樟帮法麸炒盐泽泻正交实验检测指标数据的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

表3 药典法盐泽泻正交实验检测指标数据的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

由表1～3可以看出各工艺所选因素都具有显著性差异。用多元方差分析找出各因素各水平的最佳值，即最佳工艺条件。

樟帮法麸炒泽泻的炮制工艺确定为:将炒锅加热至260℃，加入用蜂蜜拌匀的麦麸40 g(已用0.25 g的蜂蜜搅拌均匀)，炒至麦麸冒烟，再加入生泽泻片250 g，炮制4 min，表面呈亮黄色取出放凉，筛去麦麸即得。

樟帮法麸炒盐泽泻的炮制工艺确定为:取生泽泻饮片250 g，加入定量的盐水15 mL(内含4 g食盐)，搅拌均匀，密封闷润16 h，取出。将锅烧至260℃，撒入麦麸40 g，待麦麸冒烟后加入闷润好的盐泽泻片，不断翻炒6 min，表面呈金黄色，取出放凉，筛去麸皮即得。

药典盐泽泻最佳炮制工艺为:取生泽泻饮片250 g，加入定量的盐水15 mL(内含6 g食盐)，搅拌均匀，密封闷润12 h，取出。将锅烧至300℃，加入闷润好的生泽泻饮片，不断翻炒4 min，取出放凉即得。

用SPSS软件对数据进行相关分析，结果见表4～6。

表4 樟帮麸炒泽泻各工艺因素与各评判指标的相关性分析(n=96)

表5 樟帮麸炒盐泽泻各工艺因素与各评判指标的相关性分析(n=96)

表6 药典盐泽泻各工艺因素与各评判指标的相关性分析(n=96)

表4～6显示，各个炮制工艺中，炮制温度和炮制时间都是主要影响因素，而麦麸量、蜜量或盐水量影响程度小。结合各因素与指标的相关图分析，可得到以下结果:

23－乙酰泽泻醇B的含量与炮制温度和炮制时间一般都为非常显著性负相关。而炮制温度和炮制时间与24－乙酰泽泻醇A的含量有时为正相关，有的为负相关或不相关。泽泻在炮制过程中成分会发生变化。23－乙酰泽泻醇B的含量减少，24－乙酰泽泻醇A的含量增加。这主要受炮制温度和时间二个因素影响。由炮制温度或炮制时间对24－乙酰泽泻醇A或23－乙酰泽泻醇B相关图谱可知，炮制温度和炮制时间总体上是使23－乙酰泽泻醇B含量降低，但是，炮制温度在各工艺最佳炮制温度之内，23－乙酰泽泻醇B含量下降不多，炮制时间4至6 min之间，23－乙酰泽泻醇B含量变化不大。但超过最佳炮制温度或最佳炮制时间，23－乙酰泽泻醇B的含量迅速下降。24－乙酰泽泻醇A的含量随炮制温度升高而升高，但温度超过最佳炮制温度后，含量开始下降。炮制时间在6 min之内，含量影响不大，但炮制时间过长，24－乙酰泽泻醇A的含量迅速下降。

饮片色度差与泽泻中有效成分显著性负相关，饮片色度均匀性与泽泻中有效成分显著性正相关，说明饮片外观色泽越接近最佳颜色、饮片外观色泽越均匀，其有效成分的含量越高。可见，炮制过程通过控制饮片色泽来控制炮制时间有一定的科学道理。

各工艺中24－乙酰泽泻醇A的含量与23－乙酰泽泻醇B的含量都非常显著性正相关，揭示炮制过程中23－乙酰泽泻醇B的含量虽然在不断下降，但只要控制好炮制温度和炮制时间，是可以使有效成分均达到最大。

按各工艺最佳条件平行炮制10批，统计结果见表7。

表7 3种不同工艺饮片各测定值的基本统计数据(n=10)

数据显示，各工艺饮片有效成分含量、水分和浸出物的平均值差异较小，经T检验3者之间没有显著性差异，但它们之间有效成分含量的标准差和含量分布范围有显著差异。其顺序为:药典盐泽泻＞樟帮法盐泽泻＞樟帮法麸炒泽泻，说明工艺的稳定性存在差异，3者比较麸炒泽泻最优。灰分、饮片色度差和饮片色泽均匀性的平均值和标准差都存在显著差异，麸炒泽泻明显优于麸炒盐泽泻和盐制泽泻。表明泽泻炮制工艺中加麦麸，可使各批次饮片的质量差异性减小，质量相对稳定可控。这可能是由于药典法盐泽泻由于没有加入辅料，饮片局部受热不均，使饮片有效成分的变化产生比较大的浮动。而樟帮法均加麦麸，饮片受热均匀，有效成分不易被破坏，含量略高，同时麦麸的烟雾有利于使饮片迅速变成金黄色。

［1］中国药典［S］.一部.2005.

［2］叶定江，张世臣主编.中药炮制学［M］.北京:人民卫生出版社.1999:336.

［3］龚千峰主编.樟树中药炮制全书［M］.江西科学技术出版社.1990:10.

［4］杨新波，黄正明，曹文斌，等.泽泻提取物对正常及四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2002，8(3):24－26.

［5］友广教道(日).泽泻的研究［J］.国外医学中医中药分册，1997，19(5):58－59.

［6］谢一辉，余无双，罗金龙，等.泽泻饮片外观色泽信息研究［J］.中草药，2010，41(4):555－559.

［7］汤顺青主编.色度学［M］.北京:北京理工大学出版社，1990.