滋肾生血胶囊治疗急性髓系白血病的疗效机制研究

展昭民， 邓来军， 韩冰虹， 邱 林， 马 军

(1.哈尔滨血液病肿瘤研究所，黑龙江哈尔滨150010;2.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040)

急性髓系白血病(AML)化疗后会引起长时间的骨髓造血功能抑制和免疫功能损伤。我们应用滋肾生血胶囊对抗化疗药物副作用在多年的临床应用中取得了良好疗效。现将滋肾生血胶囊对AML患者化疗后外周血象、IL－3、GM－CSF、T 细胞亚群及活化水平的影响报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院AML(M3除外)患者60例，按入院先后随机分为空白组、对照组、治疗组。其中空白组20例:男14例，女6例;年龄17～62岁，平均年龄(38±15.0)岁;病程(7.5±2.8)月;分类:M02例，M11例，M25例，M49例，M53例。对照组20例:男15例，女5例;年龄16～55岁，平均年龄(38±14.6)岁;病程(6.9±2.5)月;分类:M02例，M11例，M25例，M410例，M52例。治疗组20例:男16例，女4例;年龄16～52岁，平均年龄(37±13.6)岁;病程(7.2±3.1)月;分类:M01例，M13例，M26例，M48例，M52例。3组在病种、病程、年龄、性别等方面无显著性差异，具有可比性。

1.2 纳入标准 临床病例诊断符合AML诊断标准［1］，化疗后达到完全缓解(CR)。骨髓原+幼粒小于等于5%，或原+幼单小于等于5%，红细胞和巨核细胞系统正常，化疗后临床上无白血病细胞浸润所致的症状和体征，生活正常或接近正常，血象完全恢复或基本恢复。

1.3 治疗方法 所有病例均给予DA、IA等常规序贯化疗及支持治疗(禁用白细胞成分输血)等常规药物。空白组给予常规化疗;对照组在常规化疗开始的基础上服用益血生胶囊(吉林敖东珠海药业有限公司，国药准字Z19983056，生产批号080510)，每次4粒，每日3次口服，共4周;治疗组在常规化疗的基础上服用我所制剂滋肾生血胶囊，每次4粒，每日3次口服，共4周。

2 观察指标

2.1 外周血象检测 白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)、中性粒细胞绝对值(NE#)于化疗前、化疗后1 d及化疗后21 d各检查1次。

2.2 T淋巴细胞(Tc)亚群及活化水平检测

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/HLA－DR+、CD8+/HLADR+细胞于化疗前，化疗后1 d各检查1次，均采集患者外周静脉血2 mL，采用流式细胞术(FCM)直接免疫法检测［2］。

2.3 细胞因子检测 IL－3、GM－CSF于化疗前、化疗后21 d各检测1次。采集外周静脉血4 mL，2 800 r/min离心6 min，分离血清，－80℃保存。采用酶联免疫(ELISA)法检测［3］。

3 统计学处理

检测结果采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，数据进行正态性及方差齐性检验，在此基础上进行t检验或t′检验。

4 结果

4.1 3组患者外周血象(WBC、Hb、PLT、NE#)情况比较 见表1。

表1 空白组、对照组及治疗组患者外周血象各系表达水平比较(±s)

表1 空白组、对照组及治疗组患者外周血象各系表达水平比较(±s)

注:组内对比，*P ＜0.05，**P ＜0.01;组间对比，▲P ＜0.05。

组别 例数 时间 WBC/(×109/L) Hb/(g/L) PLT/(×109/L) NE#(×109/L)空白组 20 化疗前 4.82±1.42 130.55±18.73 202.7±71.03 2.97±0.88化疗后1 d 3.22±1.02** 113.68±20.76* 135.65±55.55** 2.16±1.01*化疗后21 d 2.84±1.73** 95.7±20.89** 125.35±82.77** 1.45±0.91**对照组 20 化疗前 4.96±2.01 124.45±24.14 227.1±109.66 3.39±1.69化疗后1 d 3.80±1.57* 123.05±26.32 161.35±75.56* 2.62±1.46化疗后21 d 3.26±1.50** 108.05±15.22*▲ 155.5±60.30* 1.87±1.11**治疗组 20 化疗前 5.12±1.51 127.75±23.06 208.7±92.41 3.35±1.37化疗后1 d 3.74±1.74* 113.65±26.98 161.6±93.27* 2.47±1.22*化疗后21 d 4.08±1.77▲ 104.5±18.57* 127.85±73.43** 2.07±1.43**

化疗后21 d治疗组WBC表达水平明显高于空白组(P＜0.05);化疗后21 d对照组Hb表达水平明显高于空白组(P＜0.05)，而治疗组与空白组比较有升高趋势(95.7±20.89)g/L→(104.5±18.57)g/L，其余组间比较均无统计学差异。

4.2 对照组与治疗组比较 见表2、表3。

为进一步比较两药作用效果，我们总结了入组患者中化疗后住院观察病例，其中空白组8例，对照组8例，治疗组6例。由表2可以看出治疗组在化疗过程中及在化疗后13～15 d白细胞的下降程度与对照组比较虽未显示出明显差异(P＞0.05)，但治疗组白细胞开始逐渐恢复的时间出现在疗后10～12 d，在疗后16～18 d表现出明显差异(P＜0.05)，而对照组则在疗后16～18 d开始恢复，在疗后19～21 d表现出明显差异(P＜0.05)。3组重组人粒细胞集落刺激因子(rHuGM－CSF特尔津，300 μg/次，每日1次，厦门特宝生物工程股份有限公司生产，国药准字S20033050，批号080615)使用情况见表3。治疗组、对照组及空白组使用次数分别为0.5 次/人、0.625 次/人、1.125 次/人。

表2 对照组与治疗组外周血白细胞变化情况比较

表3 住院观察患者重组人粒细胞集落刺激因子使用情况对比

4.3 空白组与治疗组Tc亚群结果对比 见表4。

治疗组化疗后1 d外周血CD3+、CD4+细胞明显升高(P＜0.01、P＜0.05)，且 CD3+细胞与空白组对比有显著性差异(P＜0.05)。空白组(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+)、治疗组 CD4+/CD8+略高于化疗前水平，但无统计学意义(P＞0.05)。而CD8+细胞组内、组间对比均无明显变化。

表4 空白组与治疗组T淋巴细胞亚群表达情况对比(±s)

表4 空白组与治疗组T淋巴细胞亚群表达情况对比(±s)

注:组内对比，*P＜0.05，**P＜0.01;组间对比，▲P＜0.05。

组别 例数 时间 CD3+/% CD4+/% CD8+/% CD4+/CD8+空白组 20 化疗前 68.22±12.25 33.59±9.04 29.11±5.71 1.18±0.35化疗后1 d 72.77±13.89 36.05±13.09 27.34±7.66 1.37±0.50治疗组 20 化疗前 70.70±11.66 29.05±10.14 30.27±7.31 1.01±0.43化疗后1 d 82.87±10.56**▲ 36.73±10.17*29.67±6.06 1.29±0.48

4.4 空白组与治疗组Tc活化水平结果对比 见表5。

治疗组化疗后 CD4+HLA－DR+细胞、CD4+HLA－DR+/CD8+HLA－DR+的比值高于空白组(P ＜0.05);空白组化疗后CD8+HLA－DR+细胞出现明显下降(P＜0.05)，治疗组下降不明显(P＞0.05)，而组间比较无差异。活化的CD4+、CD8+细胞数占总CD4+、CD8+细胞数的比例(统计平均数)在化疗后均出现下降，但空白组下降程度较大。

表5 空白组与治疗组T淋巴细胞活化水平表达情况对比(±s)

表5 空白组与治疗组T淋巴细胞活化水平表达情况对比(±s)

注:组内对比，*P ＜0.05;组间对比，▲P＜0.05。

组别 例数 时间DR+/%DR+/%/CD8+HLA－DR+/CD4+/%/CD8+/%空白组 20 化疗前2.38±1.76 1.89±1.72 1.63±1.06 7.11 6.50化疗后1 d 0.55±0.43* 0.90±0.91* 1.06±0.62 1.80 3.29治疗组 20 化疗前 2.03±1.39 1.51±0.81 1.39±0.69 6.97 5.35化疗后1 d 1.97±1.85▲ 1.20±1.03 1.67±1.19▲4.98 4.05 CD4+HLA－CD8+HLA－CD4+HLA－DR+CD4+HLA－DR+CD8+HLA－DR+

4.5 3组患者IL－3、GM－CSF表达情况对比 见表6。

化疗后21 d IL－3水平出现不同程度的升高，治疗组、对照组显著高于空白组(P＜0.05);而GMCSF水平出现不同程度的降低，治疗组、对照组显著低于空白组(P＜0.05)，两中药组比较无统计学意义。

表6 3组患者IL-3、GM-CSF表达情况对比

5 讨论

本研究以化疗后缓解期患者作为研究对象，选择益血生胶囊作为对照药物，该药文献报道具有提高白血病患者化疗疗效，缩短骨髓抑制期的作用［4－5］。治疗药物滋肾生血胶囊在多年的临床应用中取得满意效果，全方以滋补肝肾、益气养血为组方原则，主要有熟地、首乌、桑椹、枸杞、当归、白芍、阿胶、紫河车、黄芪、红参、天冬等二十三味中药组成，对治疗白血病化疗后骨髓抑制的患者有很好疗效。

骨髓抑制以白细胞下降为主，并伴有血小板、红细胞下降。本研究发现应用滋肾生血胶囊能够在一定程度上减轻化疗后WBC的下降幅度，并明显提高其恢复水平，效果优于对照组。进一步分析可以看出滋肾生血胶囊可以缩短化疗后外周WBC开始恢复的时间。因此滋肾生血胶囊对化疗患者的作用是减轻化疗药物对正常WBC的杀伤作用，并通过缩短骨髓抑制期，加速 WBC的恢复，进而减少rhuGM－CSF的使用次数。与对照药物的比较中，治疗组对Hb的恢复作用虽不及对照组，但与空白组对比仍表现出一定的优势。而在PLT、NE#作用方面并不明显。综上所述滋肾生血胶囊促进外周血象恢复主要是通过促WBC的生成，并有一定的促Hb恢复作用。

AML患者免疫功能紊乱，表现为CD3+(T淋巴细胞总数)、CD4+(T辅助细胞或 Th)及 CD4+/CD8+(T 抑制细胞或 Ts)降低［6－8］。CD4+细胞为免疫应答中的主要反应细胞，CD8+细胞可对靶细胞产生细胞介导的细胞毒作用，CD4+/CD8+的稳定比例维持着细胞免疫反应的平衡。本研究发现治疗组能明显提高CD3+细胞水平，并在一定程度上提高CD4+细胞的水平，但CD4+/CD8+比值与空白组比较无明显变化。说明滋肾生血胶囊可能通过提高免疫细胞数量来改善机体免疫功能。T淋巴细胞表面表达的活化相关分子有CD28、CD38、HLA－DR等。我们检测发现 CD4+HLA－DR+、CD8+HLA－DR+细胞在化疗后均出现不同程度的降低，但治疗组CD4+HLA－DR+细胞明显高于空白组，并在一定程度上提高了 CD8+HLA－DR+细胞的数量，而且CD4+HLA－DR+/CD8+HLA－DR+比值高于空白组，CD4+、CD8+细胞活化比例 (CD4+HLA－DR+/CD4+、CD8+HLA－DR+/CD8+)下降幅度也最小。以上提示应用滋肾生血胶囊能够有效增强机体的自身抗肿瘤免疫反应，其机制可能是通过促T淋巴细胞的生成及对T细胞亚群活化的保护。

IL－3能促进多能干细胞增殖，为造血干细胞的正性调控因子。AML患者体内IL－3水平明显降低，我们检测发现AML患者化疗后IL－3水平均有不同程度升高，与文献报道一致［9］。治疗组、对照组明显高于空白组。提示滋肾生血胶囊、益血生胶囊可能通过提高正性调控因子的生成，进而加速造血原始细胞的增殖，保证骨髓造血功能的恢复。IL－3主要由活化的T细胞产生［10］，因此与前面结果结合分析IL－3水平升高可能是与滋肾生血胶囊保护T细胞的活化有关。白血病细胞在机体内扩增竞争性生长抑制正常造血细胞，因此白血病细胞分泌的调控因子具有量的优势。白血病细胞能自身分泌GMCSF［11］，所以 AML 患者体内 GM－CSF 水平升高，其水平的高低能够在一定程度上反映化疗的效果。从我们的结果可以看到化疗后GM－CSF水平均有不同程度的降低，与文献报道一致［3］。治疗组、对照组明显低于空白组。提示滋肾生血胶囊、益血生胶囊能够增加化疗药物对白血病细胞的杀伤作用，提高化疗疗效。两中药作用效果相似。

6 结论

6.1 滋肾生血胶囊在造血细胞不同分化阶段其功能有所不同，在早期干细胞阶段可能通过提高IL－3水平，进而加速造血原始细胞的增殖。而在分化成定向祖细胞以后，滋肾生血胶囊可能仅作用于部分血细胞，而这部分血细胞倾向于分化成白细胞、红细胞，其机制有待于进一步研究。

6.2 滋肾生血胶囊通过促进T淋巴细胞的生成及对T细胞亚群活化水平的保护来增强机体自身的抗肿瘤免疫反应。

6.3 化疗药物协同滋肾生血胶囊增强其对白血病细胞的杀伤作用。

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