中药黄芪甲苷对SD大鼠致畸性的研究

朱玉平， 张天宝， 万旭英*， 马玺里， 张 川， 张卫东， 朱江波

(1.第二军医大学基础部卫生毒理学教研室，上海200433;2.第二军医大学药学院天然药化教研室，上海200433)

黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。黄芪性温味甘，具有补气升阳、固表止汗、托疮生肌、利水消肿等疗效。黄芪的有效成分复杂，主要有皂苷类、黄酮类似物、多糖等。现代医学研究发现，黄芪不同提取物具有抗氧化、抗炎、扩血管、改善心脑缺血性疾病的作用，具有广泛的临床应用［1］。黄芪甲苷(又称黄芪皂苷IV，Astragaloside IV)为中药黄芪中的主要有效成分之一，有降压消炎，镇静镇痛，影响血清和肝脏蛋白质合成，影响血浆cAMP及再生肝DNA合成，促进NK细胞(自然杀伤细胞)活性及抗肝损伤等作用，是黄芪的重要生理活性成分，因此黄芪甲苷常作为黄芪药材的定性定量指标［2］。为提高临床用药的安全性，了解黄芪甲苷是否可通过胎盘具有胚胎毒性、胎儿毒性和致畸性。本研究按《生殖毒性研究技术指导原则》的设计要求，对其进行了致畸敏感期毒性试验，为该药的临床前毒性评价资料。

1 材料与方法

1.1 受试物 黄芪甲苷(原料药)由第二军医大学药学院药理学教研室提供。批号011025，剂型:淡黄色液体。溶剂为丙二醇－乙醇－生理盐水(1∶1∶8)。

1.2 实验动物 本实验采用为性成熟未交配过的成年健康SD大鼠，购自上海市计划生育研究所西普尔一必凯实验动物有限公司，动物许可证号:SCXK(沪)2003－0002，在本实验室适应性饲养1周后使用。试验时♂:♀鼠1∶1合笼，查见阴栓之日为妊娠第0天(GD 0)。

1.3 剂量选择 本试验设0.25，0.5和1.0 mg/kg体重3个剂量组(相当于大鼠静脉注射急性毒性试验MTD(15.0 mg/mL)的1/60～1/15)。溶剂对照组 (0.85%生理盐水1/4稀释的1∶1丙二醇－乙醇)，每组至少20只孕鼠，于 GD6－GD15(查见阴栓之日为妊娠第0天，gestation day:GD)按10 mL/kg体重连续尾静脉注射给药。

1.4 试验方法 大鼠标准致畸试验［3－4］

1.5 观察指标 分娩前一天剖杀动物(GD20)，观察母体孕期体重变化，黄体数、活胎率、死胎率、吸收胎率，胎儿身长、体重和胎盘重，胎儿外观和内脏畸形、以及骨骼的发育情况。

1.6 统计学方法 应用SPSS 10.0统计软件，均数的比较用方差分析，率的比较用卡方检验。

2 结果

2.1 黄芪甲苷对母体的影响 观察了孕期母体增重情况(GD20体重与GD0体重的差值)，发现黄芪甲苷在1.0 mg/kg剂量时孕鼠增重(GD20与GD0体重的差值)与对照组比较明显降低，差异具有统计学意义(结果见表1)。这说明在此剂量下黄芪甲苷对SD大鼠有一定的母体毒性。

2.2 黄芪甲苷的胚胎毒性 观察了活胎率、死胎率和吸收胎率的情况，发现黄芪甲苷在1.0 mg/kg剂量时SD大鼠的活胎率和死胎率与对照组比较差异具有统计学意义，表现为活胎率降低和死胎率升高，表明在1.0 mg/kg剂量时对SD大鼠有一定胚胎毒性(结果见表1)。

2.3 黄芪甲苷的胎儿毒性 观察了胎儿身长、体重和胎盘重，发现胎鼠身长在受试剂量下与对照组比较差异无统计学意义;在0.25 mg/kg和0.5 mg/kg剂量组胎鼠体重和胎盘重略低于对照组，但无明显剂量－反应趋势(结果见表2)，表明黄芪甲苷在受试剂量下对胎鼠无胎儿毒性。

表1 黄芪甲苷对孕鼠和胎鼠的影响

表2 黄芪甲苷对胎鼠生长发育的影响(±s)

表2 黄芪甲苷对胎鼠生长发育的影响(±s)

与对照组比较，*P＜0.05。

观察指标 溶剂对照组 黄芪甲苷/(mg/kg)0.25 0.5 1.0平均活胎体重/g 3.70±0.50 3.55±0.43* 3.50±0.49*3.64±0.62平均胎盘重/g 0.63±0.13 0.59±0.09* 0.59±0.09* 0.61±0.09平均活胎身长/cm 3.42±0.16 3.41±0.18 3.37±0.18 3.39±0.19

2.4 黄芪甲苷对胎儿骨骼发育的影响 观察了胎儿的尾椎数、骶椎数/荐椎数、胸骨节数、掌骨数、近端指骨数、远端指骨数、跖骨数、近端趾骨数、远端趾骨数、胸骨骨化不全和胸骨缺失的情况。发现在受试剂量下，胎鼠和胎尾椎数、骶椎数、胸骨节数、掌骨数、近端指骨数、远端指骨数、跖骨数、近端趾骨数、远端趾骨数、胸骨骨化不全和胸骨缺失与对照组比较差异无显著性，表明黄芪甲苷在各受试剂量下对胎鼠的发育无明显影响。(结果见表3)

2.5 黄芪甲苷的致畸性 胎鼠在受试各剂量组均未观察到明显的骨骼、外观和内脏畸形。在2.0 mg/kg剂量下见一只胎鼠左右心室肥大，但畸形发生率与对照组比较差异无显著性。表明黄芪甲苷对大鼠无致畸作用。

表3 黄芪甲苷对胎鼠骨骼发育的影响(±s)

表3 黄芪甲苷对胎鼠骨骼发育的影响(±s)

剂量 受检胎 尾椎数 骶椎数 胸骨节 掌骨数 近端指骨 远端指骨 跖骨数 近端趾 远端趾/(mg/kg)鼠数/个/个 数/个/个 数/个 数/个/个 骨数/个 骨数/个0 112 2.83±0.49 4.69±0.48 4.91±0.89 7.07±1.05 0.21±0.89 2.11±0.20 8.03±0.26 0.12±0.92 7.79±1.03 0.25 130 2.44±0.57 5.05±0.36 4.88±0.95 6.76±0.99 0 6.29±3.61 7.97±0.35 0 6.55±3.70 0.50 119 2.53±0.56 5.04±0.36 4.94±0.85 6.73±0.97 0 6.31±3.56 7.93±0.35 0.02±0.18 6.81±3.53 1.00 110 2.61±0.66 5.09±0.42 5.03±0.97 6.58±1.22 0.18±0.84 6.87±3.51 7.94±0.44 0 7.14±3.50

3 讨论

黄芪是传统中药，不但对正常和心功能受抑制的心脏有正性肌力作用，而且对收缩和舒张功能均有改善作用［5，6］。黄芪甲苷是从黄芪中提取的有效成分，有正性肌力作用。有研究表明该药具有加强心肌收缩力，改善心室收缩和舒张功能，却又不增加心肌耗氧量［7］。基于以上特性，黄芪甲苷很有可能是一种较好的强心和改善心功能的药物。妊娠高血压综合征(PrH)是孕产妇常见并发症，也是重要的死亡因素。黄芪甲苷作为一种传统中药，具有补气升阳、固表止汗、托疮生肌、利水消肿等疗效，很可能在孕期用于妊娠高血压的治疗。但国内外关于黄芪甲苷致畸性的报道却未见，这给该药临床用药安全问题带来一定的风险。

着床后的胚胎期是器官发生和形成期，此期细胞分裂、分化旺盛，发育基因和调控基因表达频繁，因而对外源性因素最敏感，易于影响发育调控基因及细胞功能，因此此期对致畸作用敏感，长期以来被称为致畸敏感期、危险期、关键期等［8］。标准致畸试验是采用在动物的器官敏感期进行染毒，该试验不但能检测受试物的致畸性，还可以观察受试物致胚胎、胎儿死亡和生长迟缓等资料。是目前检测外源性化学物致畸性最经典也是最可靠的的方法［9］。

本研究采用标准致畸试验，选用SD大鼠检测了黄芪甲苷的致畸性。研究结果表明，黄芪甲苷在1.0 mg/kg以上剂量时对SD大鼠具有一定的母体毒性。在胚胎毒性方面，SD大鼠在1.0 mg/kg以上剂量时出现活胎率降低死胎率增高现象。对受试动物的胎儿发育无明显影响，胎儿体重、身长、胎盘重、骨骼发育情况与对照组比较均无统计学差异。在致畸性方面对SD大鼠无明显的致畸作用。以上结果表明黄芪甲苷主要影响胚胎的早期发育。黄芪甲苷具有一定的胚胎毒性，孕期妇女应忌用此药。

［1］段亚丽，谢梅冬.黄芪化学成分及其有效成分黄芪甲苷含量测定的研究现状［J］.中国兽药杂志，2005，39(3):35－38.

［2］屠鹏飞，郭洪祝，果德安.中药与天然药物活性成分研究及新药的发现［J］.北京大学学报，2002，34(5):513－518.

［3］中华人民共和国药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学，药理，毒理学)［S］.1993.

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［5］周吉燕，樊 懿，孔建龙.黄芪中不同提取成分对在体大鼠心肌缺血一再灌注损伤的心功能影响［J］.中国中药杂志，2000，25(5):300－302.

［6］陈治奎，胡申江.黄芪对心血管疾病作用的实验研究进展［J］.心血管病学进展，2003，24(2):113－116.

［7］郑培黎，戴建亚，陈 红，等.黄芪甲苷对急性心衰犬心脏舒缩功能的影响［J］.中国药理学通报，2005，21(12):1534－1535.

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