金匮温经汤药材不同炮制方法抗炎作用研究*

张秀萍 孙达辰 梁启超 佟 雷 韩 犇 张文宇

现代药理学研究表明,金匮温经汤具有一定的抗炎功效,主要通过减轻机体的微炎症反应程度,有效治疗虚寒证原发性痛经[1],通过减少炎细胞浸润、减轻组织水肿而抑制炎性反应的发生[2],显著降低腹腔液中致炎因子IL-1β,TNF-α,TGF-β1含量[3],降低EMs 模型小鼠异位内膜炎症因子水平,改善炎症反应[4]。但以上研究或者通过改变方中药材剂量,或者通过药物加减来达到相应的疗效,笔者通过改变方中药材炮制方法,与原方进行比较,观察其抗炎作用,以期从中药炮制角度初步探讨温经汤炮制前后抗炎作用,为临床研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 中药饮片吴茱萸、当归、阿胶、甘草、炙甘草、蜜炙桂枝、川芎、白芍、生半夏、桂枝、去心麦冬、蒲黄炒阿胶、人参、去心牡丹皮、生姜、购自哈尔滨市三棵树中药材市场;不去心牡丹皮、网购于大别山特产;酒炙吴茱萸、炒白芍、姜半夏、酒炙当归、酒炙川芎、煨姜、红参,购自御桂圆;不去心麦门冬,网购于火神派中药材。所购药品均符合医院规定。

1.2 实验动物ICR小鼠共50只,体质量(16±20)g,雄性;SD大鼠共50只,体质量150～180 g,雌雄各半。均购自北京维通利华,生产许可证号(SCXK-2016-0011)。

1.3 实验方法

1.3.1 金匮温经汤各炮制组制备方法将温经汤原方[吴茱萸,当归,川芎,白芍药,半夏,麦门冬(去心),人参,牡丹皮(去心),桂枝,阿胶,生姜,甘草]、全方炮制品[吴茱萸(酒炙),当归(酒炙),川芎(酒炙),红参,桂枝(蜜炙),白芍药(炒),姜半夏,阿胶(蒲黄炒),牡丹皮(不去心),煨姜,炙甘草,麦冬(不去心)]、君药炮制品[吴茱萸(酒炙),当归,川芎,人参,桂枝(蜜炙),白芍药,半夏,阿胶,牡丹皮(去心),生姜,甘草,麦冬]、臣药炮制品[吴茱萸,当归(酒炙),川芎(酒炙),红参,桂枝,白芍药,半夏,阿胶,牡丹皮(不去心),生姜,甘草,麦冬(去心) ](除阿胶、蒲黄炒阿胶需烊化外)制备成浓度为1 g/ml的溶液。放凉后置于4 ℃保存备用。

1.3.2 金匮温经汤炮制前后对小鼠耳肿胀的影响按课题前期研究[5-7],将ICR小鼠按体质量随机分为5组,每组10只,即金匮温经汤原方组,金匮温经汤全方炮制组,金匮温经汤君药炮制品组,金匮温经汤臣药炮制品组及空白模型对照组(以下简称原方组,全方炮制组,君药炮制组、臣药炮制组及空白对照组),各给药组按13 g/kg进行灌胃给药,空白对照组给予相同体积的蒸馏水,每日灌胃给药1次,连续灌胃给药4 d,采用小鼠耳肿胀法[8]于末次给药后用移液枪于左耳涂二甲苯0.02 ml,2 h后将小鼠麻醉致死,剪下双侧耳片,用9 mm打孔器分别打下左右耳相同部位的耳片立即用分析天平称重,左耳片重量减去右耳片重量作为肿胀度,并计算其肿胀抑制率[(肿胀抑制率模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度-模型组平均肿胀度)×100%]进行统计学处理,比较金匮温经汤炮制前后各组对小鼠耳肿胀的影响。

1.3.3 金匮温经汤炮制前后对蛋清所致大鼠足爪肿胀的影响将SD大鼠按体质量随机分为5 组,每组10只,即原方组,全方炮制组,君药炮制组及臣药炮制组及空白对照组,各给药组按7.8 g/kg进行灌胃给药,空白对照组给同体积的蒸馏水,每日灌胃给药1次,连续灌胃给药4 d,采用大鼠足爪肿胀法[8],用记号笔于大鼠左侧后爪踝关节上端腿毛尽处划一横线,排水银法测定鼠爪的体积作为给药前的正常足爪体积。末次给药30 min后,每只鼠其左后足注射10%的蛋清0.1 ml,观察各组对大鼠爪肿胀程度的影响,并计算鼠爪肿胀百分率[大鼠肿胀百分率=(致炎后鼠爪体积-致炎前鼠爪体积)×100%]进行统计学处理。

2 结果

2.1 金匮温经汤炮制前后对小鼠耳肿胀的影响与空白对照组比较,各给药组均能明显抑制小鼠耳肿胀(P<0.05),与原方组比较,其他各给药组给药后鼠耳肿胀度明显高于原方组(P<0.05)。君药炮制组耳肿胀抑制率达15.5%,臣药炮制组抑制率达17.27%,全方炮制组抑制率达18.58%,而原方组抑制率达29.21%,由此可见,原方组对小鼠耳肿胀抑制率疗效最好,其次是全方炮制组、臣药炮制组和君药炮制组。见表1。

表1 金匮温经汤炮制前后对小鼠耳肿胀的影响 (只,

2.2 金匮温经汤炮制前后对蛋清所致大鼠足爪肿胀的影响与空白对照组比较,给药后30 min开始,各给药组开始起效,给药60 min开始,君药炮制组对大鼠足足趾肿胀率作用达高峰,持续到240 min仍为高峰;臣药组给药后120 min达高峰,240 min时疗效降低;全方炮制组给药180 min达高峰,240 min时疗效降低;原方组给药120 min达高峰,持续到 240 min 仍为高峰。与原方组比较,君药炮制组及臣药炮制组与原方组各时间段疗效比较,差异无统计学意义;全方炮制组效果较原方组差(P<0.05)。见表2。

表2 金匮温经汤炮制前后对大鼠足肿胀的影响 (只,

3 讨论

金匮温经汤由当归、吴茱萸、白芍、川芎、桂枝、人参、阿胶、牡丹皮、生姜、甘草、生半夏、麦冬组成,此课题通过对上述药材(酒炙吴茱萸、酒炙当归、酒炙川芎、炒芍药、红参、蜜制桂枝、蒲黄炒阿胶、牡丹皮不去心、炙甘草、去心麦门冬、煨姜及姜半夏)进行炮制后进行组方。现代药理研究表明,吴茱萸、桂枝、人参、生姜、甘草、川芎、牡丹皮、白芍、炒白芍、生半夏、姜半夏、麦冬、当归[9-19]都具有抗炎作用,其中,白芍与炒白芍抗炎效果差异无统计学意义,当归抗炎效果优于酒炙当归,生半夏与姜半夏未进行对比。本研究发现,各给药组均有抗炎作用,对小鼠耳肿胀抑制率以原方组疗效最好;对蛋清所致大鼠足爪肿胀给药不同时间的作用以君药炮制组及原方组疗效持续时间最长,全方炮制组疗效最差,与前人对单味药抗炎研究趋势一致,都有抗炎的作用,但金匮温经汤炮制前后抗炎疗效差异产生的机制还需要进一步研究。