血府逐瘀汤及桔梗、牛膝对大鼠不同脏器中环核苷酸水平的影响*

吴承峰 刘 敏 陈菁菁 唐德才

（1.钟山职业技术学院，江苏 南京 210049；2.南京中医药大学，江苏 南京 210023）

目前在血府逐瘀汤的研究中，对于引经药桔梗、牛膝对全方效用的影响尚未见报道。笔者以慢性气滞血瘀模型大鼠为载体，在前期研究基础上［1-2］，采用ELISA法，观察桔梗、牛膝不同配伍的血府逐瘀汤对血瘀证模型大鼠各脏器组织中 cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值的影响，以期探明桔梗、牛膝的配伍意义及引经作用。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 清洁级健康成年SD大鼠90只，全雄性，体质量（200±20） g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号：SCXK（浙）20080033。其随机分为空白组、模型组、全方组、全方无桔梗组、全方无牛膝组、全方无桔梗牛膝组、桔梗牛膝配伍组、桔梗组、牛膝组共9组，每组各10只。

1.2 药物与试剂 （1）药物。血府逐瘀汤方中各药均购自南京中医药大学国医堂门诊部并经南京中医药大学中药鉴定学教研室鉴定。组成及剂量参照成人（体质量 60 kg）的用量比例：桃仁 12 g，红花 9 g，当归 9 g，生地黄 9 g，川芎 4.5 g，赤芍 6 g，牛膝 9 g，桔梗 4.5 g，柴胡3 g，枳壳6 g，甘草3 g。并由国医堂门诊部提供并进行制备煎液及水浴浓缩，每日1剂。盐酸肾上腺素注射液（天津金耀氨基酸有限公司）；氯化钠注射液（中国广州百特医疗用品有限公司）。（2）试剂。大鼠环磷酸腺苷（cAMP）ELISA试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供；大鼠环磷酸鸟苷（cGMP）ELISA试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3 动物模型制备 参考文献方法［3］，采用连续多次小剂量皮下注射肾上腺素（0.1%Adr），模拟较长时间大怒及情感焦虑状态，制备气滞血瘀动物模型。具体操作方法：用0.9%氯化钠注射液10 mL将0.1%盐酸肾上腺素注射液稀释为0.01%盐酸肾上腺素注射液，注射剂量为0.08 mg/kg体质量，颈背部皮下注射，每日1次，连续7 d。空白组于相同部位、相同时间注射等量0.9%氯化钠注射液。各组动物均在最后一次注射盐酸肾上腺素注射液后24 h处死。

1.4 给药方法 自造模之日起，各实验组分别灌胃中药水煎浓缩液（1 mL/100 g），其中全方组含生药1.27 g/mL、全方无桔梗组1.18 g/mL、全方无牛膝组1.12 g/mL、全方无桔梗牛膝组1.03 g/mL、桔梗牛膝组0.23 g/mL、牛膝配伍组 0.15 g/mL、桔梗组 0.08 g/mL，每日 1次，连续7 d。模型组、空白组分别灌胃0.9%氯化钠注射液1 mL/100 g。

1.5 检测指标及方法 上述各组动物处死后，立即剖取其心、肺、肝、肾组织，各组织分别取约50 mg。所取组织用生理盐水冲洗其上之血液或内容物，放入盛有2 mL冷醋酸缓冲液（pH值4.75、浓度50 mmol/L）的试管中，立即冰浴匀浆，悬浮液加入无水乙醇2 mL，混匀，静置 5min，3500 r/min离心 15min，收集上清液。再用75%乙醇2 mL洗沉淀物，混匀，3500 r/min离心15min。合并上清液，60℃烘箱中烘干。ELISA法测定各脏器组织中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值，测定方法严格按照试剂盒说明书操作。

1.6 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件。计量资料以 （）表示，多组主要定量指标采用One-Way ANOAY方差分析，两组间比较采用LSD及S-N-K分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠各脏器组织中cAMP的比较 见表1。（1）心脏组织。与空白组比较，模型组cAMP水平明显升高（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组对cAMP水平均有降低趋势，其中以全方组、无牛膝组明显（P＜0.05）；其他各组虽有减少，但无统计学意义（P＞0.05）。与全方组比较，桔梗牛膝配伍组降低cAMP水平较弱（P＜0.05）。与牛膝组比较，全方组、全方无牛组、全方无桔梗牛膝组均有显著差异 （P＜0.01），全方无桔梗组、桔梗组亦有显著差异（P＜0.05）。（2）肺脏组织。与空白组比较，模型组cAMP水平降低，但无统计学意义（P＞0.05）。各用药组之间比较，虽有数据上的差异，但是影响无规律，且无统计学意义（P＞0.05）。（3）肝脏组织。与空白组比较，模型组cAMP水平明显升高（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组对cAMP水平均有降低趋势，其中以全方组、全方无桔组、全方无桔梗牛膝组作用较明显（P＜0.01）；牛膝组作用明显（P＜0.05）；与桔梗牛膝配伍组、桔梗组比较，全方组、全方无桔梗组有显著差异（P＜0.01）；全方无桔梗牛膝组、牛膝组亦有显著差异（P＜0.05）。与牛膝组比较，桔梗牛膝配伍组、桔梗组有显著差异（P＜0.05）。（4）肾脏组织。与空白组比较，模型组cAMP水平降低，但无统计学意义（P＞0.05）。各用药组之间比较，虽有数据上的差异，但是影响无规律，且无统计学意义（P＞0.05）。

表1 对大鼠各脏器组织中cAMP的影响结果（pmol/mL，）

表1 对大鼠各脏器组织中cAMP的影响结果（pmol/mL，）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与全方组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与无桔组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01；与桔牛组比较，■P＜0.05，■■P＜0.01；与桔梗组比较，●P＜0.05，●●P＜0.01。与牛膝组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01。

2.2 对大鼠各脏器组织中cGMP的影响 见表2。（1）心脏组织。与空白桔梗牛膝配伍组比较，模型组cGMP水平明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，各给药组对cGMP水平均有明显降低趋势（P＜0.01）。与全方组比较，桔梗牛膝配值组、桔梗组、牛膝组降低cGMP水平较弱。（2）肺脏组织。与空白组比较，模型组cGMP水平明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，全方组对cGMP水平升高趋势最为明显（P＜0.01）。与全方组比较，全方无桔梗牛膝组升高cGMP水平较弱（P＜0.05），其他各组升高趋势更弱，有显著差异（P＜0.01）。（3）肝脏组织。与空白组比较，模型组cGMP水平明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，各给药组对cGMP水平均有降低趋势，其中桔梗组较明显（P＜0.05）；其他各组作用均非常明显（P＜0.01）。（4）肾脏组织。与空白组比较，模型组cGMP水平明显降低（P＜0.01）。与无全方牛膝组比较，全方无桔梗牛膝组、牛膝组水平有明显差异（P＜0.05）。

表2 对大鼠各脏器组织中cGMP的影响结果（pmol/mL，）

表2 对大鼠各脏器组织中cGMP的影响结果（pmol/mL，）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与全方组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与无牛组比较，■P＜0.05，■■P＜0.01。

2.3 对大鼠各脏器组织中cAMP/cGMP比值的影响见表3。（1）心脏组织。与模型组比较，牛膝组对cAMP/cGMP比值升高趋势较明显（P＜0.01）。与桔梗组比较，牛膝组对比值升高作用较弱（P＜0.05）。（2）肺脏组织。与空白组比较，模型组比值明显升高（P＜0.05）。组间比较，全方无桔梗组与全方无桔梗牛膝组作用差异明显（P＜0.05），其中全方无桔梗组对模型组比值影响较小，而全方无桔梗牛膝组则影响较大。（3）肝脏组织。与模型组比较，全方无牛膝组、桔梗牛膝配伍组对比值有明显升高趋势（P＜0.05）。（4）肾脏组织。与空白组比较，模型组比值水平明显降低（P＜0.01）。与牛膝组比较，全方组作用有明显差异（P＜0.05），全方无牛膝组作用有极明显差异（P＜0.01）。

表3 对大鼠各脏器组织中cAMP/cGMP的影响结果（pmol/mL，）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01； 与全方组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与无桔组比较，■P＜0.05，■■P＜0.01； 与牛膝组比较，●P＜0.05，●●P＜0.01。

3 结 论

cAMP、cGMP在体内各组织普遍存在，是细胞功能的重要调节物质；cAMP、cGMP对多种信息，尤其是药物的刺激非常灵敏，且各组织脏器中的含量水平，基本上可反映其细胞功能的某一动态平衡状态。研究发现，许多中药均是通过调节体内环核苷酸含量而起作用；反之，从环核苷含量变化中亦可观察到中药对机体的影响以及对疾病的疗效［4-5］。近年来，不少学者对cAMP、cGMP随“阴阳盛衰”而变化的现象作了大量研究，表明它们之间存在着类似中医阴阳学说的相互矛盾及对立统一的关系［6］。

本研究表明，血瘀模型组心、肝组织中cAMP、cGMP含量明显升高，而肺肾组织中cAMP、cGMP含量却呈现降低趋势，对cAMP/cGMP比值的影响则正好相反。从各用药组数据分析，含桔梗的用药组心脏组织中cAMP、cGMP水平明显降低，而含牛膝的用药组则降低均不明显。对肝脏中cAMP含量的影响却恰恰相反，即含牛膝的用药组肝脏组织中cAMP水平明显降低，而含桔梗的用药组则降低不明显。肝脏组织中cGMP的变化，除桔梗组外，其他各组作用均非常明显，表明桔梗、牛膝确实能影响心、肝组织中cAMP和cGMP的分布水平，这与桔梗“载药上行”、牛膝“引药下行”的引经理论正相符合。对肺、肾组织中cAMP的影响虽有数据上的差异，但无统计学意义，提示可能与血府逐瘀汤主要用于“血府”血瘀证有关，其部位虽在胸中，但血瘀证主要与心、肝关系密切。

对肺脏组织中cGMP的影响，以全方组对cGMP水平升高影响最为明显。与全方组比较，无桔梗牛膝组cGMP水平升高较弱，其他各组升高趋势更弱。提示全方组效果最好，而桔梗牛膝配伍则会影响药物在肺脏中的分布，说明牛膝“引药下行”之功可能影响桔梗“载药上行”特性。对肾脏组织中cGMP的影响，则以牛膝组和无桔梗组最明显，无牛膝组则作用最弱，提示牛膝确能增加cGMP在肾脏中的分布，通过观察对各脏器组织中cAMP/cGMP比值的影响，也发现有此规律。

综上，研究证实桔梗确有“载药上行”之功，能增加药物在心肺中的分布；而牛膝确有“引药下行”之力，能增加药物在肝肾中的分布；桔梗与牛膝单独使用，或单独配伍多起拮抗作用，但在全方中配伍却起协同作用，这也正是中医组方精妙之所在。

［1］陈菁菁，刘敏，唐德才.血府逐瘀汤及桔梗、牛膝配伍对血清NO、血浆ET-1的影响［J］.辽宁中医药大学学报，2011，13（11）：123-124.

［2］刘敏，唐德才，陈菁菁.血府逐瘀汤及方中桔梗、牛膝对血管内皮细胞黏附分子表达的影响［J］.辽宁中医药大学学报，2012，14（1）：76-78.

［3］和岚，蒋文跃，毛腾敏.注射肾上腺素模拟“气滞”复制急、慢性血瘀模型初探［J］.中国中西医药结合杂志，2004，24（3）：244-246.

［4］王树荣，翟继伟，盖英臣，等.天麻、桔梗、元胡归经的实验研究［J］.上海中医药杂志，1995，41（1）：44-46.

［5］王树荣，孙冰，丁国明.中药归经的实验研究［J］.中国中药杂志，1994，19（8）：500-502.

［6］王淑美，徐晓玉.滋阴清热药对环核苷酸的影响［J］.药学专论，2003，12（7）：26-27.