特制新会陈皮炮制前后成分变化及临床疗效观察

★ 余香 龚千锋 李群峰 梁志云 梁永广 蒋三元（.广州中医药大学附属新会中医院 广东 江门 5900；.江西中医药大学 南昌 330004）

新会是广陈皮的道地产区，又称新会陈皮［1］，为芸香科植物橘Citrus reticulataBlanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮［2］，具有理气化痰、祛风健胃的功效。研究表明新会陈皮中含有多种黄酮类活性成分，如橙皮苷具有抗炎抗过敏性哮喘的作用［3］，川陈皮素对支气管有舒张作用能起到平喘的治疗效果［1］，橘皮素可以减少炎症细胞浸润起到抗炎和免疫调节的作用等［4-5］。江门市新会区中医院特制新会陈皮饮片是以新会陈皮为原料制得，其炮制方法是将新会陈皮刮去橘络后，加适量蛇胆汁、甘草汁和NaCl 浸泡，烘干即得特制新会陈皮。该饮片保留了新会陈皮的饮片形式，具有理气健脾、化痰止咳、祛风和胃的功效，供人含服，极具当地特色，经临床长期应用，治疗咳嗽疗效显著。但目前还没有学者对该饮片炮制前后的成分变化进行研究，也没有对该饮片治疗咳嗽的临床效果进行系统观察，故笔者进行研究，以期为临床广泛应用该饮片提供参考。

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（日本岛津，LC-20A）；超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司，KQ-400KDE）；电子分析天平（岛津菲律宾工厂，AUW120D）；电热恒温干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司，DHG-9013A）。

1.2 试药

新会陈皮（江门市新会区中医院，批号：170501）；橙皮苷（成都植标化纯生物技术有限公司，批号：190802）；川陈皮素（成都植标化纯生物技术有限公司，批号：200322）；橘皮素（成都植标化纯生物技术有限公司，批号：190918）；蛇胆汁(广州市岭南中药饮片有限公司，批号：1601101)；甘草汁的制备，取甘草250 g（江西宏康中药饮片有限公司，批号：20181001），煎煮，过滤，定容至250 mL，制得甘草汁溶液（甘草汁∶甘草=1 mL∶1 g）。乙腈、甲醇、纯净水等试剂均为分析纯。

1.3 临床资料

选取广州中医药大学附属新会区中医院2019 年1 月—2020 年12 月收治的咳嗽患者126 例，随机分为观察组和对照组，各63 例。观察组男31 例，女32 例，平均年龄为（42.4±10.3）岁，对照组男33 例，女30 例，平均年龄为（43.7±9.9）岁，2 组患者资料比较无显著性差异（P＜0.05），具有可比性。

2 炮制前后成分变化研究方法与结果

2.1 炮制方法

取新会陈皮150 g，润软，刮去橘络，晒干。取蛇胆汁75 g和甘草汁25 mL加NaCl 15 g制成混合液，倒入新会陈皮中，拌匀，捞起，置于烘箱中65 ℃烘干，反复浸润烘干数次，直至混合液被完全吸收，最后烘干即得特制新会陈皮，其外表面黑棕色，有细皱纹和凹下的点状油室，内表面黄棕色，粗糙，质脆，气腥香，味咸苦。见图1。

图1 特制新会陈皮

2.2 橙皮苷、川陈皮素及橘皮素的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品5.78 mg 加甲醇溶解制成浓度为289.0 μg/mL 的橙皮苷对照品溶液；精密称取川陈皮素7.84 mg 加甲醇溶解制成浓度为39.2 μg/mL 的川陈皮素对照品溶液；精密称取橘皮素3.36 mg 加甲醇溶解制成浓度为16.8 μg/mL 的橘皮素对照品溶液。精密量取8 mL 橙皮苷对照品溶液、1 mL 川陈皮素对照品溶液、1 mL 橘皮素对照品溶液，置量瓶中，摇匀，得混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取特制新会陈皮粉末0.108 0 g、新会陈皮0.102 8 g，分别置于10 mL容量瓶中加甲醇定容至刻度，密塞，超声（45 Hz，240 W）处理45 min，再用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 色谱柱Inertsil ODS-SP 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）。以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表1 中的规定进行梯度洗脱方法［2］，进样量：10 μL，流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃，橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的检测波长分别为283、330、330 nm。按此色谱条件，橙皮苷的保留时间为6.056 min，川陈皮素的保留时间为23.682 min，橘皮素的保留时间为30.485 min。见图2。

表1 梯度洗脱条件

图2 混合对照品HPLC

2.2.4 线性关系考察 混合对照品的进样量按1，5，10，15，20 μL 进样，测定峰面积与质量浓度的关系，计算线性回归方程，X为质量浓度，Y为峰面积横坐标, 橙皮苷的回归方程为Y=1 848.3X-28 715.0，r=1.000 0，在0.23~4.62 μg 范围内线性关系良好，川陈皮素的回归方程为Y=3 957.3X- 13 930.0，r=0.999 9，在0.039~0.784 μg 范围内线性关系良好，橘皮素的回归方程为Y=5 160.5X- 22 801.0，r=0.999 7，在0.016~0.336 μg 范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 按“2.2.3”项色谱条件，连续测定对照品溶液6 次，计算橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的峰面积RSD分别为0.35%、0.62%、0.88%，表明仪器有良好的精密度。

2.2.6 重复性试验 按“2.2.2”项制备6 份特制新会陈皮供试品溶液，按“2.2.3”项条件测定橙皮苷、川陈皮素和橘皮素的含量，计算RSD分别为1.02%、0.98%、1.13%，表明该方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔2 h进样一次，计算得橙皮苷、川陈皮素、橘皮素的峰面积RSD分别为1.22%、1.33%、0.94%，表明供试品溶液在12 h 内稳定性良好。

2.2.8 加样回收率试验［6］精密称取特制新会陈皮饮片粉末约0.050 g，取同一批样品6 份,每份分别精密加入浓度为1.156 mg/mL 橙皮苷对照品1.0 mL 0.136 mg/mL 川陈皮素对照品1.0 mL 0.089 mg/mL 橘皮素对照品1.0 mL，按“2.2.2”项下的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定其含量，计算回收率。见表2。

表2 加样回收率试验结果

2.3 浸出物含量测定

取特制新会陈皮饮片粉末约5 g，置于50 mL 的锥形瓶中，精密加入50%乙醇溶液50 mL，密塞超声40 min，用干燥滤器迅速滤过，量取续滤液20 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，干燥（105 ℃）3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中浸出物的含量（%）。

2.4 特制新会陈皮炮制前后HPLC 比较

按上述色谱条件分别得到特制新会陈皮及新会陈皮的HPLC 图谱，特制新会陈皮比新会陈皮的3 种成分含量均降低，尤以川陈皮素下降最为显著。见图3、表3。

表3 炮制前后3种指标性成分含量比较

图3 特制新会陈皮及新会陈皮的HPLC叠加图

2.5 浸出物含量测定

取特制新会陈皮及新会陈皮粉末各约5 g，加入50 mL、50%乙醇，超声提取45 min 后，取续滤液10 mL，至恒重的蒸发皿中，蒸干，105 ℃干燥3 h，精密称定重量，置干燥器中冷却30 min，迅速以干燥品计算，作3 次平行试验取平均值，特制新会陈皮的稀醇浸出物含量为（44.57±1.57）%，新会陈皮的稀醇浸出物含量为（37.21±1.38）%。

3 临床疗效观察方法与结果

3.1 诊断标准

西医诊断标准参照中华医学会呼吸病学分会哮喘学组于2015 年《咳嗽的诊断与治疗指南》中关于普通感冒引起急性咳嗽的诊断标准［7］，临床表现除咳嗽外，还伴有如鼻塞和鼻后滴流感、流涕、喷嚏、咽喉刺激感或不适等其他上呼吸道相关症状，可伴发热，全身症状少见。中医诊断标准参照2012 年国家中医药管理局发布的《中医病证诊断疗效标准》中风寒袭肺证的辨证标准［8］，证候：咳嗽声重，咳痰稀薄色白，气急咽痒，鼻塞，流清涕，头痛，肢体酸痛，恶寒发热，无汗，舌苔薄白，脉浮或浮紧。

3.2 纳入标准

（1）符合上述中西诊断标准者；（2）年龄18~75 岁，性别不限；（3）知情同意书已签署者；（4）发病后未使用其他止咳化痰的药物。

3.3 排除标准

（1）伴发肺炎、急性支气管炎、化脓性扁桃体炎、肺结核等疾病者；（2）依从性差、自行退出或资料不全者；（3）合并肺、肝、肾及心脑血管等严重原发性疾病者；（4）发生严重药物不良反应者；（5）剧咳引发晕厥、气漏、胃食管反流、腹直肌破裂、疝气等症者。

3.4 治疗方法

观察组予特制新会陈皮（广州中医药大学附属新会中医院，批号：20181018），每日3 次，每次1 g，含服，疗程7 d。对照组予盐酸溴己新片（山西立业制药有限公司，国药准字H32023603），每日3 次，每次8 mg（1 片），口服，疗程7 d。2 组患者均对症予抗感染、抗过敏、抗组胺、解热镇痛、解除支气管痉挛等西医内科方法基础治疗。

3.5 临床试验流程

整个试验进行3 次访视，第1 次在患者被纳入研究首次用药前视访，第2 次在患者用药3 d 后视访，最后1 次视访在患者用药1 个疗程后。

3.6 观察指标

依据中华医学会呼吸病学分会哮喘学组于2015 年《咳嗽的诊断与治疗指南》，咳嗽的观察指标纳入视觉模拟评分（VAS 评分）、咳嗽症状积分及生活质量测评（LCQ 评分），同时监测药物的不良反应发生情况，更有利于对患者病情的评估及疗效的观察。

3.6.1 VAS 评分标准 在0~10 cm 的直线刻度上标记咳嗽的程度，0 为无咳嗽，5 为中度咳嗽，10为最严重咳嗽，患者根据自己的感受在相应的刻度上表示咳嗽的程度，记录为患者的VAS 评分［9］。

3.6.2 咳嗽症状积分 咳嗽症状积分含日间积分和夜间积分两部分，每部分按轻重程度划分为0~3 分。日间咳嗽积分：0 为咳嗽；1 为偶有短暂咳嗽；2 为频繁咳嗽，轻度影响日常活动；3 为频繁咳嗽，严重影响日常活动。夜间咳嗽积分：0 为无咳嗽；1 为入睡时短暂咳嗽或偶有夜间咳嗽；2 为因咳嗽轻度影响夜间睡眠；3 为因咳嗽严重影响夜间睡眠。根据患者情况记录咳嗽症状积分［10］。

3.6.3 咳嗽生活质量测评 本研究采用莱塞斯特咳嗽生命质量问卷（LCQ 评分）为专用量表,系统评价咳嗽程度和疗效，记录LCQ 评分［11］。

3.6.4 不良反应 参照药品不良反应监测办法，观察2 组患者在治疗期间出现的不良反应发生情况。

3.7 疗效判定

治愈为咳、痰症状基本消失，伴随体征也基本消失，或2 周以上未发作者；显效为咳、痰症状明显好转，伴随体征大部分消失；有效为咳、痰及体征均有部分缓解；无效为咳、痰症状无减轻，甚至加重，体征未见好转。总有效率=（治愈例数+显效例数+有效例数）/总例数。

3.8 统计学方法

本研究应用SPSS 24.0 软件进行统计数据处理，正交试验结果进行方差分析，计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验，以（P＜0.05）为差异具有统计学意义。

3.9 临床疗效评定

治疗后观察组总有效率为87.30%，明显高过对照组的73.01%（P＜0.05）。见表4。

表4 2组患者临床疗效结果（n=63） 例

3.10 疗效观察指标分析

3.10.1 2 组患者用药前后VAS 评分比较 观察组用药3 d 后VAS 评分与用药前比较明显降低，且比对照组改善明显，用药7 d 后VAS 评分更低，对照组用药7 d 后VAS 评分较治疗前明显降低（P＜0.05）。见表5。

表5 2组患者用药前后VAS评分比较（，n=63） 分

表5 2组患者用药前后VAS评分比较（，n=63） 分

注：与同组用药前比较，*P＜0.05；与对照组比较，#P＜0.05。

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3.10.2 2 组患者用药前后咳嗽症状积分比较 2 组患者用药3 d 后均较治疗前咳嗽症状积分明显降低，具有统计学意义（P＜0.05），用药7 d 后咳嗽症状改善更明显，且观察组咳嗽症状积分低于对照组，具有显著性差异（P＜0.05）。见表6。

表6 2组患者用药前后咳嗽症状积分比较（，n=63）分

表6 2组患者用药前后咳嗽症状积分比较（，n=63）分

注：与同组用药前比较，*P＜0.05；与对照组比较，#P＜0.05。

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3.10.3 2 组患者用药前后LCQ 评分比较 2 组患者用药7 d 后患者咳嗽生命质量评分明显升高，且观察组较对照组生活质量改善更明显，具有统计学意义。见表7。

表7 2组患者用药前后LCQ评分比较（，n=63） 分

表7 2组患者用药前后LCQ评分比较（，n=63） 分

注：与同组用药前比较，*P＜0.05；与对照组比较，#P＜0.05。

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3.11 2 组患者不良反应发生情况

本次试验对照组使用盐酸溴己新片的患者，出现2 例恶心、呕吐的不良反应，立即停药，并将这2 例病历予以排除，重新再纳入2 例患者进行试验，使用特制新会陈皮的患者未见药物不良反应发生。

4 讨论

特制新会陈皮是新会陈皮加蛇胆汁、甘草汁和Nacl 制得，气味及性状较新会陈皮发生了明显变化，其性温转偏寒，其味由原来的气香味苦变为气腥香味咸苦，外表皮由原来的深棕色变为黑棕色。其原材料要求使用新会陈皮是因为陈皮以新会产者为佳，且新会陈皮中生物碱辛弗林和N-甲基酪胺含量低于浙产陈皮、川陈皮和广西产陈皮等［1］，其苦涩味较少，再加入少许NaCl 后，更有利于饮片含服。炮制过程中，加入蛇胆汁有祛风除湿、清凉明目、解毒祛痱的功效，制约了新会陈皮的温性，且增加了本品祛风的作用，加入甘草汁具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效，使新会陈皮的祛痰止咳效果增强。本品炮制工艺中要求刮去橘络，与历代医药方书记载陈皮去白之说相吻合，如宋朝《雷公炮炙论》中“留白则理脾健胃，去白则消痰止嗽”，清朝《本草备要》中“入补养药则留白，入下气消痰药则去白”等。

为探明炮制后新会陈皮的内在成分变化，本研究采用高效液相色谱仪，测定了特制新会陈皮及新会陈皮中橙皮苷、川陈皮素及橘皮素的含量。结果显示炮制后川陈皮素和橘皮素的含量稍微下降，而橙皮苷的变化不大，这3 种药效成分虽然比生品少，但两者均符合2020 年版《中国药典》要求，含橙皮苷不得少于2.00%，含川陈皮素和橘皮素总量不得少于0.42%的标准，药效影响轻微。而研究特制新会陈皮的稀醇浸出物含量时，其含量明显高于新会陈皮，其增加了蛇胆汁中胆酸类有效成分，已被验证对咽喉类炎症有较为明显的疗效，具有清热、止咳化痰和平喘的作用，同时还增加了甘草汁中甘草酸、甘草苷等有效成分，研究表明甘草浸膏口服后能覆盖在发炎的咽部黏膜上，缓和炎性刺激而镇咳，甘草次酸胆碱盐对豚鼠吸入氨水和电刺激猫喉上神经引起的咳嗽都有明显的抑制作用，甘草还能促进咽部和支气管黏膜分泌，使痰易于咳出［12］，故特制新会陈皮祛风化痰止咳作用是增强的。而本品是否还有新的物质产生，还有待进一步研究。

为进一步研究特制新会陈皮治疗感冒咳嗽的效果，本文以临床常用且疗效确切的盐酸溴己新片为对照，观察特制新会陈皮治疗感冒咳嗽的临床效果。纳入了视觉模拟评分（VAS 评分）、咳嗽症状积分、生活质量测评（LCQ 评分）等指标，结果特制新会陈皮治疗感冒咳嗽效果较对照组显著，且各项观察指标均较对照组明显改善。同时监测药物的不良反应，对照组有2 例恶心、胃部不适的不良反应病例，观察组未见明显副作用。通过研究发现，广东沿海地区常年气温较高，海风、湿度较大，另一方面本地人多喜贪凉饮冷、嗜食水产品等，易致脾肺受伤，肺虚卫外不固，易感风邪，脾失健运，痰饮内生，内外合邪，诱发咳喘［13］。脾为生痰之源，肺为贮痰之器，临床采用健脾理气、止咳化痰的方法治疗。新会陈皮经炮制后其温性受制约，祛痰止咳效果增强，且增加了祛风止痉的作用，尤其适合当地感冒咳嗽患者使用。

本项目通过基础实验和临床观察，对特制新会陈皮进行了研究，比较了炮制前后成分变化，同时进一步验证了特制新会陈皮化痰止咳的临床效果。由于特制新会陈皮中蛇胆汁的检测指标为胆酸，且主要为牛磺胆酸钠，专属性较差［14］。同时，对于特制新会陈皮与普通陈皮的疗效比较研究还有待进一步完善。