TP 法与CAP 法测定食品微生物菌落总数的效果对比

王佳敏

（乌兰察布市疾病预防控制中心，内蒙古乌兰察布 012000）

食品安全监管是国家公共卫生管理的重要工作，食品卫生检测是其中不可或缺的一环，食品中农药残留、重金属、微生物的检测都属食品卫生检测重点。在食品安全检测中，采取有效测定方法确定微生物群落总数以及类型，能够帮助检测部门掌握食品中微生物的生长繁殖情况，从而判定食物的储存环境，推断食物的新鲜程度和污染程度，帮助食品安全监管部门判断目标食品在生产、加工、储存、运输和销售等过程中是否符合国家相关标准，通过采取有效措施避免食品安全问题[1]。在当前食品微生物菌落测定手段与方法中，测试片法（Test Piece Method，TP）与计数琼脂平板法（Counting Agar Plate Method，CAP）均被广泛应用，两种测定方法各具优劣，本研究将对比两种测定办法的实际测定效果。

1 材料与方法

1.1 样品与材料

选取2021 年6 月至2022 年6 月疾控中心收集的食品样品共计80 份作为研究对象，所有样品同时接受CAP 法与TP 法检测。测试纸片法选择广东达元绿洲公司的“食品、饮用水菌落测定试纸片”，产品购置后存放于冰箱中，保存温度4 ～10 ，测试纸片应符合GB 4789.2—2022 要求，符合美国AOACOMA 标准986.33、990.12。培养基选择上海康润生物科技有限公司生产的营养琼脂成品，按要求配置、灭菌后备用。

1.2 方法

开展实验之前，严格按照研究标准落实无菌规则，对于涉及的实验器材、试剂均严格落实消毒标准，检测过程中用到的仪器及设备应严格按照操作说明进行使用。针对液体样品，用灭菌吸管准确吸取25 mL 样品加入225 mL 蒸馏水或生理盐水及有关检验的增菌液中，制成1 ∶10 的稀释液。吸取前要将样品充分混合，取样的吸管插入样品的深度一般不要超过25 mm；处理固体样品，将100 g 或100 g 以上的样品剪碎混匀，取25 g 放入无菌乳钵中充分研磨后再放入带有225 mL 无菌稀释液的稀释瓶中，盖紧盖后充分摇匀。样品处理完成后，适量与无菌磷酸缓冲液混合均匀，按照梯度进行10、100、1 000、10 000 倍数稀释，作为稀释液备用。

1.2.1 TP 法

菌落总数测试用纸是一种提前制备好的一次性培养基产品，该产品含有标准的营养培养基，检测到菌落时测试片会呈现红色。TP 法操作步骤：①样品处理完成后，将菌落总数测试片平摊于台面上，随后按照试纸操作步骤撕开上层膜，无菌吸管规范吸取样品1 mL，正确滴加在试纸上，盖上上层膜，完成后静置10 s，每个稀释度均接种2 片，做好空白对照；②培养，试纸回收叠加，放回自封袋，将透明面朝上，放置于37 培养箱中，培养24 h；③结果分析，观察测试纸片上是否会生长红色斑点，以菌落总数适中的测试片为常规对象，进行计数，乘以稀释倍数，随后计算细菌菌落的总数。

1.2.2 CAP 法

CAP 法操作步骤：①无菌吸管规范吸取1 mL 稀释液，放在灭菌平皿中，每个稀释度应保证不少于2个平行样，避免出现误差；②充分等待培养皿营养琼脂冷却，培养皿在制作过程中46 恒温保温，在凝固后翻转放置，培养48 h，同时做好空白对照。③在培养完成后，取出培养皿，计算菌落总数，菌落数乘稀释倍数，得到所含菌落总数。

1.3 观察指标

观察指标包括总菌落数及检出超标率、大肠杆菌菌落数及检出超标率、霉菌菌落数及检出超标率。

超标率=（超标个数/总个数）×100%，检出数与超标率越高，测定效果越好。

1.4 统计学方法

将数据纳入SPSS 23.0 软件中分析，计量资料比较采用t检验，并以（±s）表示，率计数资料采用2检验，并以率（%）表示，P＜0.05 为差异显著，有统计学意义。

2 结果与分析

CAP 组总菌落数数量及检出超标率、大肠杆菌与霉菌菌落数量及检出超标率高于TP 组，但差异不具统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 大肠杆菌与霉菌菌落数量及检出超标率

3 结论与讨论

食品微生物检验工作通常会对样品中的微生物采取分离培养、生理生化反应以及显微镜检查等方式来分析并确定菌落数量和种类，相关情况的分析对于食品的生产、加工、存储以及售卖等过程的食品安全管理有重要意义。在食品微生物测定中，菌落是在细菌培养之后生长繁殖在固体培养基上且能够用肉眼观察清楚的生长物，不同的菌落培养与检测方法广泛应用于食品微生物的检测当中。

本研究中所对比的TP、CAP 检测方法在各级检测部门中较为常见，发挥不同作用。测试纸片法（TP）因其快速鉴定的优点[2]，被食品管理部门用作食品快速检测。该方法快速便捷，在实际操作中，检测人员需要通过食品样品的收集处理，经过科学规范的操作，在规定的时间内明确食品中一种或多种菌种的数量。TP 法能够满足食品检验部门对市面流通食品进行快速检测的要求，进一步提高食品样品检验的速度与精度。计数琼脂平板法（CAP）则是实验室常见的食品微生物检测方法，广泛用于食品、化妆品和饮用水中微生物计数，该方法较TP 法能够获得更加准确的检测结果[3]，但实际结果受到较多因素影响，包括营养条件、温度、时间、pH 值等，若相关条件控制不好，则可能导致菌群不能有效繁殖[4]。因此在实际的食品样品检验工作中，CAP 检测需要注意诸多问题。例如，需要控制好温度的变化、要确保培养皿中的营养琼脂与样品充分混合、有不明沉淀物存在于培养基底部时要避免将沉淀物倒入倾注皿当中[5]。

研究结果发现，CAP 法的检出总菌落数及超标率、检出大肠菌群落数及超标率、检出霉菌菌落数及超标率均高于TP 法，但组间对比差异不具统计学意义（P＞0.05）。这与陈怡文等[6]的研究结果一致，两种方法各具优势与缺陷，但综合而言TP 法适用性更高。TP 法检测过程简便，省略了培养基配置、琼脂高压灭菌以及倾注冷却、等候琼脂凝固等步骤，减少了检测所需时间，对于食品微生物检测工作而言能节省时间成本。TP 检测法主要材料为薄纸片，而CAP 法一个稀释梯度则需要2 个平行，针对同一样品菌落总数的检测需要进行多个浓度梯度稀释，需使用多个平板，若样品过多，需购买较多培养箱，且培养平板所占空间需求较大，这对空间有限的检测机构而言并不方便，因此TP 法十分适合培养场地小、检测样品数量多的检测机构使用。同时，TP 法中培养基为预制备，不需人工制备，有效减少了人为因素对测定结果的影响[7]。此外，TP 法中纸片可降解，不会产生其他污染物品（如废液废物），能避免对生态环境产生危害，且试验结束后清洗工作量较少，这也是国外FDA、AOAC 官方方法、加拿大等均广泛将TP 法用于食物、空气、环境中菌落总数检测以及监控工作的关键原因[8]。但需注意的是，尽管TP 方法具有更多的优势，但从结果可见菌落数量与检出超标率低于CAP 法，可能原因是TP 法准确性辨识度低，不利于观察，且氧气条件控制受到一定限制[9]。研究发现，通过严密监测试验阶段中各阶段的半成品，实施过程质控有助于提高检测质量，未来还应深入研究并投入实践，以提高食品安全监测水平。

综上所述，在食品微生物菌落测定中，CAP 法检出效果综合而言优于TP 法，CAP 法检出数量、准确性均略高于TP 法，但CAP 法操作烦琐、影响结果的因素较多，而TP 法操作便捷、高效化，适用于多数基层单位，因此在实际应用中可根据实验条件和需求灵活选择。