高效液相色谱法测定菠菜中阿维菌素残留量

李 爽

（朝阳市检验检测中心，辽宁朝阳 122000）

阿维菌素具有强烈的杀螨、杀虫、杀线虫的防虫害作用[1]，在我国的农业害虫防治体系中具有非常重要的地位，被广泛应用于水果、蔬菜等虫螨的预防与治疗中[2]，具有非常好的防虫效果，但食品中阿维菌素的残留会对人体的神经系统和内脏等多处产生损伤[3]。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）中限定了食品中阿维菌素的最大残留量，因此食品中阿维菌素的残留量的测定非常重要。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

菠菜粉中阿维菌素含量检测内部质控样品，大连中食国实检测技术有限公司，指定值0.398 mg·kg-1标准差0.003 5 mg·kg-1；鲜菠菜，购自农贸市场；阿维菌素标准物质（1 000 µg·mL-1），批号S069003，国产；丙酮（色谱纯，天津科密欧公司）、甲醇（色谱纯，天津科密欧公司）；SPE C18固相萃取净化小柱（规格：60 mg/3 mL，Waters，使用前用5 mL 甲醇和5 mL 水活化）；ODS C18固相萃取净化小柱（规格：100 mg/6 mL，Waters，使用前用5 mL 甲醇和5 mL 水活化）。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪（紫外检测器）Waters E2695-2489；AB204-N 型电子分析天平，上海梅特勒-托利多；N-EVAP 112 氮吹仪，美国Organomafion 公司；GTCS-2018 恒温水浴振荡器，常州金坛良友仪器有限公司；高速低温冷冻离心机，德国Sigrna 公司；MS-1 微型旋涡混合器，德国依卡公司；旋转蒸发仪；过滤器，滤膜孔径0.45 µm；微量移液器1（规格100 ～1 000 µL，Thermo）；微量移液器2（规格10 ～100 µL，Thermo）；微量移液器3（规格5 ～50 µL，Thermo）。

1.3 方法

1.3.1 高效液相色谱条件

采用高效液相色谱法[4-7]，ODS-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：甲醇（A）∶水（B）为（85 ∶15，V/V）；流速：1.0 mL·min-1；波长：245 nm；柱温：40[8]；进样量：20 µL。阿维菌素标准物质的高效液相色谱图见图1。

图1 阿维菌素标准物质的高效液相色谱图

1.3.2 标准工作曲线的配制

（1）标准储备溶液（20 µg·mL-1）。使用微量移液器量取标准物质0.5 mL 于25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

（2）标准曲线的配制。使用微量移液器精确吸取标准储备溶液（20 µg·mL-1）0.05 mL、0.10 mL、0.25 mL、2.50 mL 和5.00 mL 分别置于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。配制成浓度为0.1 µg·mL-1、0.2 µg·mL-1、0.5 µg·mL-1、5.0 µg·mL-1、10.0 µg·mL-1和20.0 µg·mL-1的系列标准工作液。

1.3.3 菠菜粉中阿维菌素的提取

称取菠菜粉内部质控样品2 g（精确至0.01 g），置于100 mL 具塞锥形瓶，加入18 mL 水（菠菜粉∶水=1 ∶9 相当于20 g 菠菜鲜样），超声波清洗器振荡溶解制成鲜样，加入50 mL 丙酮[9]，于振荡器上振荡0.5 h，用布氏漏斗抽滤[10]，分别用20 mL 丙酮洗涤两次锥形瓶及残渣。合并丙酮提取液，旋转蒸发仪设置水浴40 减压浓缩至约2 mL。

1.3.4 提取液净化

将1.3.3 项下浓缩后的提取液完全转入预处理后的C18固相萃取柱[11]，再用5 mL 三级水淋洗，弃去淋洗液。用5 mL 甲醇洗脱解吸阿维菌素，收集解吸洗脱液，40 氮气仪吹至近干。准确加入1.0 mL 甲醇溶解残渣，用0.45 µm 过滤器过滤，滤液待液相色谱上机测定。

1.3.5 空白样品

将鲜菠菜粉碎制样，称取20 g（精确至0.01g），置于100 mL 具塞锥形瓶，超声波清洗器振荡，加入丙酮溶液50 mL，按1.3.3 项下方法抽滤提取，按1.3.4项下方法净化，制成空白样品的待测液。

1.3.6 测定

在上述操作条件下，待仪器平衡稳定后，标样溶液连续进样5 针，分别计算各针响应值，待相邻两针变化小于1%，分组别按顺序上机进行液相色谱分析测定。

1.3.7 结果计算

质控样中阿维菌素的含量计算公式为

式中：X为质控样中阿维菌素的含量，µg·g-1；ρ为样品中阿维菌素浓度，mg·L-1；V为试样最终定容体积，mL；m为样品质量，g。

2 结果与分析

2.1 固相萃取柱的优化筛选

本实验对比了不同固相萃取柱对阿维菌素的净化效果[12]，实验共分4 组，分别精密称取2 g 菠菜粉置于4 个100 mL 具塞锥形瓶，按1.3.3 项下方法提取，4 组实验净化时分别选择ODS C18（200 mg）、SPE C18（500 mg）、SPE C18（200 mg）、SPE C18（60 mg）4 种不同的固相萃取小柱按1.3.4 项下净化方法进行净化，净化后样品经液相色谱测定。结果表明，选用SPE C18（60 mg）固相萃取柱净化的组别阿维菌素回收率最高（91.3%），净化效果最好。

2.2 线性范围

配 制 质 量 浓 度 为0.1 ～20.0 µg·mL-1的 标 准系列溶液，以阿维菌素质量浓度（x，ng·mL-1）为横坐标，阿维菌素峰面积响应值（y）为纵坐标进行线性回归，线性关系良好，相关系数r2=0.992 4，标准曲线为y=-3 687.999x+20 605.22。

2.3 回收率实验

本实验分为6 组，分别精密称取6 份菠菜粉内部质控样1.00 g、1.05 g、2.03 g、2.01 g、5.02 g和5.06 g，（精确至0.01 g），相当于各组阿维菌素的含量分别为0.398 µg、0.418 µg、0.808 µg、0.808 µg、1.998 µg和2.014 µg，均按1.3.3 项下方法提取，选用SPE C18（60 mg）固相萃取柱，按1.3.4 项下净化，经高效液相色谱仪测定各组浓度，按1.3.7 项下公式计算出各组阿维菌素实测值分别为0.362 µg、0.378 µg、0.728 µg、0.724 µg、1.861 µg 和1.873 µg， 空 白 样品阿维菌素含量为0 µg，回收率分别为90.95%、90.43%、90.10%、89.60%、93.14%和93.00%，平均回收率为91.20%，相对标准偏差为1.65%。

3 结论与讨论

农药残留对人体的各组织和脏器都产生较大损害，阿维菌素作为除螨剂的主要农药之一，被广泛被应用于果蔬种植过程的虫螨防治[13]，过量使用农药会造成其在食物中的残留，进入人体后其在体内残留时间长达30 d[14]，因此阿维菌素的残留量的测定至关重要。本研究采用丙酮振荡萃取菠菜粉中的阿维菌素，比对筛选最优固相萃取柱确定净化方法，提高了阿维菌素经固相萃取处理后的回收率，并同时起到了很好的净化作用，本方法采用HPLC（紫外检测器）测定菠菜粉中阿维菌素的农药残留量，方法简便可靠，可有效地减少杂质峰的干扰，提高蔬菜中阿维菌素参数定性及定量的准确性，能够满足果蔬中阿维菌素农药残留的限量检测要求，为制定食品中阿维菌素残留量的检测标准提供了良好依据。