HPLC测定开胃消食口服液中橙皮苷和川陈皮素的含量

杨志欢，苏加乐

（广西慧宝源医药科技有限公司，广西 钦州 535000）

开胃消食口服液收载于国家药品监督管理局国家药品标准［WS-398（Z-054）-2019Z］，原标准中样品的提取方法为萃取，由于萃取的过程中样品乳化严重，对含量测定的结果影响较大。因此，本研究拟优化提取方法，并在原质量标准的基础上增加川陈皮素的含量测定，即采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定橙皮苷和川陈皮素两种成分的含量，旨为更有效、全面地评价和控制开胃消食口服液的质量。

1 实验材料

1.1 仪器Waters2695高效液相色谱仪（包括2695四元梯度泵、2489紫外检测器、自动进样器、在线脱气机、柱温箱、Empower色谱工作站）；德国ELMA S120H超声仪、Milli-Q超纯水仪、XS205DU型十万分之一天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

1.2 试药与试剂 开胃消食口服液，由广西慧宝源医药科技有限公司提供；橙皮苷对照品（批号110721-202019，纯度95.3%，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供；川陈皮素对照品（批号112055-202102，纯度99.7%，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取川陈皮素9.75 mg，置于10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，作为川陈皮素储备液。精密称取橙皮苷16.64 mg，再精密吸取川陈皮素储备液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含橙皮苷317.16 μg、川陈皮素97.21 μg的混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 精密量取开胃消食口服液10 ml，置25 ml量瓶中，加10 ml甲醇溶解，超声处理（功率：200 W；频率：37 kHz）10 min，再加甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性样品溶液的制备 按处方及工艺制备缺陈皮的阴性样品，精密吸取阴性样品10 ml，置于25 ml量瓶中，按2.2项方法制备阴性样品溶液。

2.4 色谱条件 色谱柱为ZORBAX Extend-C18（5 μm，4.6mm×250 mm）；流动相为乙腈（A）和0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～12 min，A20%；12～18 min，A20%～45%；18～30 min，A45%～60%；30～35 min，A60%）；流速1.0 ml/min，检测波长209 nm，柱温30℃，进样量10 μl。在该色谱条件下，分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果各色谱峰分离效果良好，在橙皮苷、川陈皮素出峰的时间均无杂质峰干扰。色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品溶液0.2 ml、0.5 ml、1 ml、2 ml、5 ml、10 ml，分别置于6个10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液L1～L6。精密吸取上述溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，测定，以对照品的进样浓度（μg/ml）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），求得橙皮苷回归方程为Y=37 530.04X-11 715.46（r=0.999 9），表明橙皮苷在6.34～317.20 μg/ml浓度内线性关系良好。川陈皮素回归方程为Y=59 535.32X-29 938.31（r=0.999 6），表明川陈皮素在1.94～97.21 μg/ml浓度内线性关系良好。

2.5.2 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液（批号：201203），连续注入液相色谱仪6次，测定橙皮苷、川陈皮素的峰面积。结果橙皮苷的RSD为1.7%（n=6）、川陈皮素的RSD为0.1%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.5.3 重复性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号：201203）10 μl，共6份，注入液相色谱仪，计算橙皮苷和川陈皮素的含量，结果橙皮苷的平均含量为203.34 μg/ml，RSD为1.8%（n=6）；川陈皮素的平均含量为49.91 μg/ml，RSD为1.1%（n=6），结果表明重复性良好。

2.5.4 稳定性试验 取重复性试验中供试品溶液，分别在室温下放置1 h、3 h、12 h、24 h、35 h、51 h后进样测定峰面积，并计算橙皮苷、川陈皮素的含量测定，结果橙皮苷含量的RSD为1.5%（n=6），川陈皮素含量的RSD为0.8%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置51 h稳定。

2.5.5 加样回收率试验 取已知含量的开胃消食口服液（批号：201203）6份，精密吸取供试品5 ml，置25 ml量瓶中，精密加入橙皮苷、川陈皮素混合对照品溶液（橙皮苷的含量为317.2 μg/ml、川陈皮素的含量为97.2 μg/ml）3 ml，按2.2项方法制备供试品溶液。精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算回收率，结果橙皮苷回收率为94.51%～99.20%，RSD为1.8%（n=6）；川陈皮素回收率为98.36%～101.78%，RSD为1.3%（n=6）。结果表明回收率好，准确度高，见表1。

表1 加样回收率试验结果 （n=6）

2.6 样品含量测定 取本品10批，按拟定的含量测定方法测定，结果见表2。10批样品总黄酮含量以橙皮苷及川陈皮素计，平均含量为0.27 mg/ml，以平均含量下调30%作为其含量限值，即：0.27×（1-0.3）=0.19，因此拟定开胃消食口服液含橙皮苷及川陈皮素的总量不得少于0.19 mg/ml。

表2 10批开胃消食口服液含量测定结果

3 讨论

本研究参考相关文献及《中华人民共和国药典》，根据实际情况，针对性地对原有含量测定方法进行优化，考察了流动相、取样量、提取方法、稀释倍数、超声时间、溶剂、溶剂浓度。最终确定以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，取供试品10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇超声10 min提取最完全，且杂质峰无干扰，稳定性好，回收率良好，可作为开胃消食口服液的质量控制方法。