老年胃癌组织miR-183、miR-144-3p表达及其与预后的关系

杜鑫 付保芹 李晓静 黄晓燕

(1河南护理职业学院护理系，河南 安阳 455000；2陕西省人民医院(陕西省感染与免疫疾病重点实验室))

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发病率居于所有恶性肿瘤的第五位，死亡率居于第三位〔1〕。手术切除是胃癌目前的主要治疗手段，但由于患者确诊时大多已发生转移，手术效果不理想，术后5年生存率低〔2〕。早期准确预测胃癌预后并指导个体临床治疗决策是提高患者生存率之关键。微小RNA(miR)是一种有9～25个核苷酸的内源性非编码RNA，在生物体内广泛存在，在细胞增殖、分化、凋亡等一系列细胞生理过程中发挥着重要作用，且被发现与胃肠道肿瘤等多种肿瘤的发生发展等有紧密关联〔3〕。研究发现〔4,5〕，miR-183、miR-144-3p在恶性肿瘤中呈现异常表达，对于肿瘤的诊断、治疗及预后评估有重要作用。本研究分析老年胃癌患者胃癌组织中miR-183、miR-144-3p表达与临床病理特征的关系，并探讨预后判断价值，以期为胃癌的靶向治疗提供参考思路。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2015年1月至2018年12月陕西省人民医院进行手术切除治疗的胃癌患者75例。纳入标准：(1)均经组织病理学检查确诊为胃癌；(2)行标准胃癌根治术(胃切除+胃周第2站淋巴结清扫)；(3)术前未接受放化疗等抗肿瘤治疗；(4)年龄≥60岁；(5)病例资料完整。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)合并严重肝肾疾病者；(3)非胃癌相关性死亡者；(4)随访等数据缺失者。本研究获得医院伦理委员会批准，患者或家属均签署知情同意书。

1.2研究方法 采用门诊结合电话的方式对患者进行随访，术后2年内每3个月1次，之后每6个月1次，随访截止至2021年5月31日。总生存(OS)时间是指患者术后当天开始至患者死亡或者随访截止日期所经历的时间。无进展生存(DFS)时间定义为术后当天开始到局部复发/远处转移或死亡或随访截止日期所经历的时间。收集患者年龄、性别、饮酒史、肿瘤最大径、肿瘤部位、TNM分期、组织学类型、脉管癌栓、淋巴结转移等临床资料。应用受试者工作特征(ROC)曲线确定miR-183、miR-144-3p的截断值，当miR-183相对表达量为1.76和miR-144-3p相对表达量为0.62时，此时的约登指数最大。以最佳截断值为1.76和0.62将患者分为miR-183低表达(<1.76)组(n=34)与miR-183高表达(≥1.76)组(n=41)和miR-144-3p低表达(<0.62)组(n=39)与miR-144-3p高表达(≥0.62)组(n=36)。

1.3实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-183、miR-144-3p表达 收集患者胃癌组织与癌旁正常组织(距癌组织边缘>3 cm)，利用TRIzol法进行总RNA的提取，采用分光光度计进行总RNA浓度及纯度的检测，按逆转录试剂盒说明进行反转录获得互补DNA，置于-20℃环境下保存。取总RNA 2 μg，采用荧光定量PCR仪(美国Thermo Forma公司)进行实时荧光定量PCR检测。PCR引物序列：miR-183上游引物5′-CCCGGGCTTGTCTTTTGTT-3′，下游5′-GAGTGGGTGGCTCACTCTTCTG-3′；miR-144-3p上游引物5′-ACACTCCAGCTGGGTACAGTATAGATGATGACT-3′，下游5′-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3′；扩增条件：95℃ 10 min，95℃ 15 s，60℃ 60 s，共45个循环。以U6作为内参，采用2-ΔΔCt法计算miR-183、miR-144-3p的相对表达量。

1.4统计学方法 应用SPSS24.0进行正态分布主量资料t检验；计数资料χ2检验；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间生存差异采用Log-rank检验；采用Cox回归模型进行预后影响因素分析。

2 结 果

2.1胃癌组织与癌旁正常组织miR-183、miR-144-3p表达水平 与癌旁正常组织(1.05±0.17、0.96±0.18)相比，胃癌组织miR-183表达(2.56±0.28)显著增高(t=39.922，P<0.001)，miR-144-3p表达(0.45±0.11)显著降低(t=20.937,P<0.001)。

2.2胃癌组织miR-183、miR-144-3p表达水平与临床病理特征的关系 miR-183高表达组TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、脉管癌栓及淋巴结转移比例均显著高于低表达组，miR-144-3p低表达组TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、脉管癌栓及淋巴结转移比例均显著高于高表达组(P<0.05)；不同miR-183、miR-144-3p表达水平患者年龄、性别、饮酒史、组织分化型、肿瘤原发灶部位、肿瘤最大径差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 胃癌组织miR-183、miR-144-3p表达水平与临床病理特征的关系〔n(%)〕

2.3胃癌组织miR-183、miR-144-3p表达与预后的关系 患者随访8～64个月，中位随访时间为32.3个月。miR-183高表达组OS率及DFS率均显著低于miR-183低表达组，miR-144-3p低表达组OS率及DFS率均显著低于miR-144-3p高表达组(P<0.05)。见图1。

将TNM分期、有无脉管癌栓、有无淋巴结转移、miR-183及miR-144-3p相对表达量等因素纳入Cox比例风险回归模型进行单因素分析和多因素分析，结果显示，淋巴结转移、miR-183高表达、miR-144-3p低表达均是老年胃癌患者OS及DFS的独立影响因素(P<0.05)。见表2、3。

图1 miR-183、miR-144-3p表达水平与胃癌患者OS、DFS关系的生存曲线

表2 老年胃癌患者OS影响因素的单因素及多因素Cox比例风险回归分析

表3 老年胃癌患者DFS影响因素单因素及多因素Cox比例风险回归分析

3 讨 论

胃癌的发生发展涉及多种基因、多信号转导途径及多步骤协同等相关过程〔6〕。如何从分子水平阐明其发生发展的分子机制，探寻新的靶向治疗方法有重要意义。本研究提示miR-183高表达及miR-144-3p低表达可能参与了胃癌的发生发展，并可能成为胃癌靶向治疗的重要靶点。

研究表明〔7，8〕，miR可能参与胃癌的发生、侵袭、转移等一系列生物学行为，是肿瘤生物标志物及潜在治疗靶点。miR-183是众多miRs家族的成员之一，在前脂肪细胞分化、成熟和肿瘤发生过程中起至关重要的作用〔9〕。本研究显示，胃癌组织中miR-183表达水平显著高于癌旁正常组织，与程勇等〔10〕研究报道一致，提示miR-183可能作为一种癌基因在胃癌发生过程中扮演重要角色。本研究说明miR-183可能促进了胃癌的发生发展。miR-183对细胞产生的生物学功能主要是通过其靶蛋白所介导的，其表达上调能够引起免疫球蛋白样结构域(LRIG)1 mRNA沉默，下调抑癌基因LRIG1及其蛋白表达，使得癌基因与抑癌基因平衡遭到破坏，引起细胞增殖失衡，从而促进肿瘤增殖〔11〕。

miR-144-3p也是一种具有多种生物学功能的miRNA，在多种恶性肿瘤中表达异常，被认为参与了肿瘤发生发展〔12,13〕。miR-144-3p能够通过调控细胞周期相关靶基因的表达，而对肿瘤增殖、凋亡过程产生影响〔14〕。研究表明〔15〕，miR-144-3p可能是一种抑癌基因，其能够通过抑制丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)6的表达，进而对肿瘤增殖产生抑制作用。本研究显示，胃癌组织中miR-144-3p表达水平显著低于癌旁正常组织，且miR-144-3p表达与TNM分期、脉管癌栓、淋巴结转移相关，与李早红等〔16〕报道一致，提示miR-144-3p可能作为一种抑癌基因，参与了胃癌的发生发展。

本研究说明miR-183高表达、miR-144-3p低表达与胃癌患者较差的生存期有关，可能对胃癌患者预后有重要提示。Zhang等〔17〕研究表明，miR-183在胃癌组织中表达增高，其表达上调与胃癌较高临床分期、淋巴结转移相关，是胃癌不良预后的独立危险因素。Gao等〔18〕研究显示，miR-144-3p在胃癌组织中呈低表达，与生存期独立相关。

综上，胃癌组织中miR-183表达上调、miR-144-3p表达下调，miR-183相对表达量≥1.76和miR-144-3p相对表达量<0.62是老年胃癌患者生存期的独立危险因素，可能成为潜在的胃癌预后新指标，并有望为靶向治疗提供新思路。