富半胱氨酸61、PAI-1、miR-155对老年子宫内膜癌诊断及评估复发的应用价值

周琳 贾莉 孙琮 刘静

(淄博市第一医院妇科，山东 淄博 255200)

子宫内膜癌(EC)是临床常见女性生殖系统恶性肿瘤之一，流行病学调查显示，70%～75%的EC发生于绝经后女性，高发年龄为75～79岁〔1～4〕。临床研究表明，年龄是EC患者预后的重要影响因素，与中青年患者相比，老年患者复发率、死亡率明显升高〔5〕。近年来，随着医疗技术不断改进，老年EC患者生存时间相对延长，但淋巴结转移与复发风险仍居高不下，需给予重视〔6,7〕。富半胱氨酸(Cyr)61是一种参与血管性病变、肿瘤发生发展的重要因子〔8〕。纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)-1具有多种生物学功能，可加快肿瘤细胞黏附、迁移及侵袭过程〔9〕。miR-155在EC患者血清与组织中呈高表达状态〔10〕。但鲜有报道Cyr61、PAI-1、miR-155在老年EC患者中的联合检测价值。基于此，本研究尝试分析Cyr61、PAI-1、miR-155对老年EC诊断及评估复发的应用价值，旨在为临床提供循证依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取淄博市第一医院2017年3月至2019年3月收治的老年EC患者108例作为观察组，年龄60～81岁，平均(72.14±3.81)岁，体重指数(BMI)17.5～25 kg/m2，平均(21.47±1.54)kg/m2。另选取同期子宫内膜增生患者105例作为对照1组，年龄60～80岁，平均(71.83±4.05)岁，BMI 18～25 kg/m2，平均BMI(21.63±1.61)kg/m2。健康体检者105例作为对照2组，年龄60～79岁，平均(71.62±3.65)岁，BMI 17.0～25.5 kg/m2，平均(21.70±1.74)kg/m2。两组一般资料相比，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性，且本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2选取标准 纳入标准：观察组均经宫腔镜及病理学检查证实为EC，且符合《子宫内膜癌诊断与治疗指南(第四版)》中EC相关诊断标准〔11〕，均为首次确诊；对照1组均确诊为子宫内膜增生，且经术后病理检查证实；对照1组体检各项指标显示正常；3组临床资料完整，且均自愿签订知情同意书。

排除标准：伴有严重肝肾等重要脏器功能不全者；合并其他良恶性肿瘤者；参与本研究前接受放化疗、免疫治疗等相关抗肿瘤治疗者；存在严重感染者；观察组无法进行随访者。

1.3方法 检测方法：于各组入院次日、观察组随访1年复查当日采集清晨空腹静脉血5 ml，离心处理，离心速率为3 000 r/min，离心时间为15 min，取上清液，保存于-70℃恒温冰箱内待检。采用酶联免疫吸附试验检测血清Cyr61、PAI-1水平，试剂盒购自美国贝克曼库尔特公司；采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测miR-155水平，提取血清总RNA，逆转录，获取cDNA，实施RT-PCR，上游引物为miR-155对应引物，下游引物为PCR试剂盒通用引物，以U6为内参计算miR-155表达水平，试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司；采用放射免疫法检测肿瘤标志物〔糖类抗原(CA)125、癌胚抗原(CEA)、CA199〕水平，试剂盒购自美国R&D公司，所有操作步骤严格遵循试剂盒说明书。

治疗方法：观察组均根据患者临床分期、病理类型及病情状况给予合理化治疗，包括手术、放化疗等抗肿瘤治疗方案。并随访1年，统计复发情况。

1.4统计学方法 采用SPSS22.0软件进行t检验、χ2检验，符合正态分布且方差齐的计量资料相关性以Pearson分析，不符合正态分布或方差不齐的计量与计数资料相关性以Spearman分析，以受试者工作特征(ROC)曲线评价诊断价值，并进行多元线性逐步回归分析。

2 结 果

2.13组血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平 观察组血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平显著高于对照1组、对照2组(P<0.05)，对照1组Cyr61、miR-155显著高于对照2组(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平比较

2.2血清Cyr61、PAI-1、miR-155对子宫内膜良恶性病变的鉴别诊断价值 根据血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平绘制ROC曲线，Cyr61单独诊断AUC为0.817，95%CI为0.758～0.866，Z=10.964，P<0.001，当截断值>217.76 μg/L时，诊断敏感度为65.74%，特异度为83.81%；PAI-1单独诊断AUC为0.775，95%CI为0.713～0.829，Z=8.699，P<0.001，当截断值>14.91 μg/L时，诊断敏感度为58.33%，特异度为83.81%；miR-155单独诊断AUC为0.739，95%CI为0.674～0.797，Z=7.102，P<0.001，当截断值>5.81时，诊断敏感度为53.70%，特异度为83.81%；三者联合诊断AUC为0.898，95%CI为0.850～0.936，Z=19.524，P<0.001，诊断敏感度为77.78%，特异度为84.76%，见图1。

图1 血清Cyr61、PAI-1、miR-155对 子宫内膜良恶性病变的鉴别诊断价值

2.3观察组不同临床特征患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平 观察组不同年龄、病理类型患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平相比，差异无统计学意义(P>0.05)；不同临床分期、分化程度、肌层浸润、有无淋巴结转移患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平相比，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.4血清Cyr61、PAI-1、miR-155与临床特征的关系 Spearman相关性分析，血清Cyr61、PAI-1、miR-155与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移呈正相关(P<0.001)，与分化程度呈负相关(P<0.001)，见表3。

表2 观察组不同临床特征患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平比较

表3 血清Cyr61、PAI-1、miR-155与临床特征的关系

2.5复发与未复发患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155及肿瘤标志物水平 随访1年，失访2例，死亡5例。复发患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155、CA125、CEA、CA199水平均显著高于未复发患者(P<0.05)，见表4。

2.6血清Cyr61、PAI-1、miR-155与肿瘤标志物相关性 血清Cyr61(r=0.477、0.681、0.850)、PAI-1(r=0.578、0.752、0.777)、miR-155(r=0.691、0.654、0.608)与CA125、CEA、CA199呈正相关(P<0.05)，见图2。

表4 复发与未复发患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155及肿瘤标志物水平比较

图2 血清Cyr61、PAI-1、miR-155与肿瘤标志物相关性

2.7多元线性逐步回归分析 多元线性逐步回归分析，将肿瘤标志物、临床分期、分化程度、肌层浸润、淋巴结转移等其他因素控制后，血清Cyr61、PAI-1、miR-155仍与复发显著相关(P<0.05)，见表5。

表5 多元线性逐步回归分析

3 讨 论

2018年美国国立综合癌症网络(NCCN)EC临床实践指南中，将年龄>60岁作为EC高危因素之一〔12〕。老年EC患者通常预后较差，需及早诊断、及时治疗，以改善预后，降低复发与远处转移风险，延长生存期〔13，14〕。

Cyr61是即刻早反应基因(CCN)家族的重要成员之一，主要生物学功能为参与肿瘤新生血管形成、调节细胞增殖、促进肿瘤细胞迁移〔15〕。PAI-1属于丝氨酸蛋白酶抑制因子家族，与肿瘤细胞生长、转移、血管新生密切相关〔16〕。临床证实，miRNA对多种靶基因具有调节作用，参与细胞生物学功能，加快恶性肿瘤发生与进展〔17〕。其中，miR-155被发现与多种恶性肿瘤发生发展有紧密联系〔18〕。本研究发现Cyr61、PAI-1、miR-155可能参与老年EC发生过程。其中，Cyr61在恶性肿瘤中参与多种信号转导通路，可上调、结合细胞膜上配体，强化整联蛋白耦联激酶活性，激活Wnt/13-catenin信号通路，从而加速EC发生〔19〕。PAI-1可诱导肿瘤细胞在细胞内摄取复合物，促进肿瘤细胞生长、增殖，参与恶性肿瘤发生过程〔20〕。miR-155则可通过靶向抑制转化生长因子β激活，负调控干扰素产物，避免浆细胞样树突细胞对Toll样受体产生刺激过反应，发挥抗凋亡作用，有利于肿瘤细胞生长，加快恶性肿瘤发生〔21〕。故三者均能加速肿瘤疾病发生。同时，陈玉芬等〔22〕报道显示，血清miR-155在EC患者中具有良好诊断价值。本研究初次采用ROC曲线发现血清Cyr61、PAI-1、miR-155联合检测具有可靠辅助诊断价值，明显优于三者单独检测。故临床可同时检测上述指标血清水平有利于及早确诊，为把握治疗时机创造良好条件。

本研究发现Cyr61、PAI-1、miR-155可能在老年EC病情进展中发挥重要作用。推测原因，Cyr61能加快肿瘤新生血管形成，上调血管内皮生长因子及其受体表达，促进血管内皮细胞增殖，激活下游靶基因，从而促进肿瘤细胞增殖、侵袭〔23〕。有文献表明，PAI-1可经由细胞内信号转导途径加速肿瘤细胞迁移、增殖，还可与低密度脂蛋白受体相互作用，间接刺激JaK/STAT信号通路活化，增加肿瘤细胞移行，从而为肌层浸润、淋巴结转移提供有利条件，最终促进肿瘤病情进展〔24，25〕。另有研究证实，miR-155高表达的肿瘤细胞具有较强抗凋亡、增殖、侵袭、迁移能力，其表达水平越高，肿瘤细胞异常增殖、侵袭与转移进程越快〔26，27〕。故三者对老年EC病情进展产生重要影响。

此外，许晶〔28〕认为，PAI-1高表达与肿瘤不良预后显著相关。本研究结果发现，血清Cyr61、PAI-1、miR-155不仅与常规肿瘤标志物密切相关，还可能通过上调表达参与EC复发过程，增加预后不良风险，主要与三者能从不同方面、不同途径调节肿瘤细胞、新生血管等作用机制有关。故临床检测血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平还能为临床评估复发及预后提供有效信息，具有重要应用价值。但本研究选取样本量较少，且未考虑检测方法对指标水平的影响，需进一步采取大规模、多中心研究，以获取更可靠的数据支持。

综上可知，血清Cyr61、PAI-1、miR-155联合检测对老年EC具有可靠辅助诊断价值，且与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移、分化程度及肿瘤标志物密切相关，还有助于为临床评估复发提供参考依据。